Başlamak için, yerleşik vasküler duvar CD34 pozitif kök hücrelerini murin modellerinden izole edin. Manyetik aktive hücre sıralaması ile saf hücreler elde edin ve bunları karakterize edin. Kalsiyum sinyalini tespit etmek için, hücrelerle önceden tohumlanmış bir lamel alın ve PBS ile bir kez yıkayın.
Daha sonra hücreleri Fura 2-ve Tyrode çözeltisi ile karanlıkta 30 dakika inkübe edin. Boyayı çıkarmak için, hücreleri Tyrode çözeltisi ile 10 dakika inkübe edin. Ardından hazneyi ters çevrilmiş bir floresan mikroskobu sahnesine monte edin, ana pencereyi açın ve kepçe ayarları diyaloğu ve kamera sayfasına gidin.
Canlı görüntü gösterimi için canlı düğmesine basın. Görüntüleri elde etmek için, hücreleri farklı renklerle daire içine almak ve ilgi alanlarını önceden tanımlamak için birkaç serbest çizgi çizin. Floresan mikroskobu, ATP uygulamasının izole vasküler duvar CD34 pozitif kök hücrelerde hücre içi kalsiyum düzeylerini artırdığını gösterdi.
