Başlamak için, canlı hücre analiz sistemi yazılımını başlatın. Gemi ekleme işlemini başlatmak için ekranın sol üst köşesindeki artı sembolüne basın. Tarama programını çalıştırmak için Zamanlamaya Göre Tara'yı seçin, ardından Yeni'yi seçin.
Standart'ı seçin. Ardından, tarama ayarlarını hücre hücre seçenekleri olarak Yok olarak ve görüntü kanallarını ilgili çekim süreleriyle birlikte Faz, Yeşil ve Kırmızı olarak ayarlayın. Hedefi 20x olarak ayarlayın.
Listeden plakayı seçin ve plakayı görüntüleme sisteminin tepsisine koymak için damar konumunu seçin. Numuneleri içeren kuyucukları seçin ve kuyu başına yakalanacak görüntü sayısına karar verin. Bu bilgi, plaka için otomatik olarak tahmini bir tarama süresi oluşturur.
Her bir kuyucuk için hücre türü ve bileşik gibi bilgileri girmek için Plaka Haritası Oluştur'a tıklayın. Sonra çalışmayı adlandırın. Sonraki ekranda, analiz türü olarak Temel Çözümleyici'yi seçin ve daha önce kullanılan analiz tanımlarını gösteren açılan listeden Analiz Tanımı'nı seçin.
0.0'da hem yeşil hem de kırmızı için spektral karışımını bırakın. Taramayı sekiz saat boyunca her 15 ila 20 dakikada bir gerçekleşecek şekilde zamanlayın. Taramanın başlangıç zamanını ayarlamak için ekranın üst kısmındaki beyaz ve gri çubuğu sürükleyin.
Bir sonraki ekranda, tarama ayarlarını gözden geçirin ve taramayı başlatmak için Programa Ekle'ye basın. Taradıktan sonra, Görünüm sekmesinde, analiz için kabı açın. Ekranın solundaki Analizi Başlat'a basın ve Yeni Analiz Tanımı Oluştur'u seçin.
Temel Çözümleyici'yi seçin ve Faz, Yeşil, Kırmızı ve Örtüşme görüntü kanallarını kullanın. Eğitim için altı ila sekiz temsili örnek görüntü seçin. Analiz tanımını yapılandırmak için, nötrofil hücre dışı tuzakları veya NET'leri oluşturan nötrofillere yeşil nesneler ve tüm nötrofillerin çekirdeklerine kırmızı nesneler ayarlayın.
Geçerli Önizleme veya Tümünü Önizle'ye basın ve sonuçları optimize etmek için her parametreyi ayarlayın. Analiz için tarama sürelerini ve kuyuları seçin. Ardından analiz tanımı için bir etiket sağlayın.
Özeti gözden geçirin ve analizi başlatın. Analizden sonra, analiz edilen etüdü açmak için analiz tanımının adına çift tıklayın. Ekranın solundaki Katmanlar'ı açın ve her hücrenin doğru şekilde işaretlenip işaretlenmediğini kontrol edin.
Ekranın sol tarafındaki Grafik Metrikleri'ni tıklayın, ardından yeşil sayım için görüntü başına sayı'yı seçin. Dışa aktarılacak zaman noktalarını ve kuyuları seçin. Gruplandırmayı seçmek için, tarama sırasında tüm kuyucukların doğru şekilde belirtildiğini onaylamak için Plaka Haritası Kopyaları'nı seçin ve Verileri Dışa Aktar'a tıklayın.
Benzer şekilde, kırmızı sayım ve çakışma sayısı için verileri dışa aktarın. Verilen denklemi kullanarak, her koşul ve zaman noktası için hücre oluşturan NET'lerin yüzdesini hesaplayın. NET oluşumunun zaman seyri, her bir zaman noktasında NET oluşturan nötrofillerin yüzdesi çizilerek görselleştirilir.
Bir AKT inhibitörü eklemek, PMA veya kalsiyum iyonofor ile uyarılan nötrofillerde NET oluşumunu bloke etti. NET oluşumunu hedefleyen potansiyel moleküllerin gösterilmesi, bu metodoloji kullanılarak yüksek verimli bir şekilde test edilebilir.
