Başlamak için, standart bir cam kapak fişini üç eşit şeride bölmek için bir elmas kalem kullanın. Kapak kayma şeridinin bir parçasını ev yapımı bir hazne tutucunun altına yapıştırmak için vakumlu gres kullanın. Benzer şekilde, kapak kayma şeridinin ikinci parçasını hazne tutucunun üstüne takın.
Ardından, iki kapak fişi arasına 200 mikrolitre etiketli RBC süspansiyonu enjekte etmek için bir pipet tabancası kullanın. Mikropipet aspirasyon kurulumunu monte etmek için, hücre odasını bir mikroskop platformu üzerindeki tutucu tablaya monte edin. Haznenin konumunu, hedefin hemen altına gelene kadar ayarlayın.
Şimdi tutucuyu, bağlı su deposunun sıvı seviyesinin altına düşene kadar indirin. Mikropipete demineralize su enjekte edin, ardından hava kabarcıklarını gidermek için 34 gauge iğne ile donatılmış bir şırınga kullanın. Mikropipet tutucunun ucunu yarıya kadar sökün ve suyun tutucudan birkaç saniye damlamasına izin verin.
Ardından, süspansiyonla doldurulmuş mikropipeti tutucu uca yerleştirin ve tutucu vidayı sıkın. Mikropipeti hücre odasına yerleştirin. Ardından, mikroskop altında pipeti ve eritrositleri bulun.
Bulunan RBC ile aynı hizada olduğundan emin olmak için pipet ucunu indirin. Su haznesinin yüksekliğini, uçtaki hidrolik basıncı sıfırlayacak şekilde ayarlayın. Ardından, ince bir pozitif basınç oluşturmak için su haznesini hafifçe kaldırın.
488 nanometre floresan uyarma ışık kaynağını açın. Floresan kamerayı ve iletilen kamerayı açın. İlgili yazılımda her iki kamera için pozlama süresini, ilgilenilen bölgeyi ve gruplama boyutunu girin.
Ardından, Çok Boyutlu Alım paneli altında alım numarasını 2000 olarak ayarlayın. Gerekli kaydetme dizinini seçin. Ardından, mikromanipülatör yardımıyla mikropipeti bulun.
Pnömatik basınç kelepçesini açın ve kontrol kutusunun harici modda olduğundan emin olun. Sistem içindeki herhangi bir ofset basıncını telafi etmek için düğmeyi yavaşça çevirin. Pnömatik kelepçeyi kontrol eden yazılımı başlatın.
Milimetre başına 20 milivolt cıva dönüştürme faktörü ile basıncı kontrol altında tutmak için elektrik kontrol panelini kullanın. Şimdi sistem içindeki basıncı sıfırlayın, ardından mikropipeti dikkatlice RBC'lerin yakınına yerleştirin. Mikropipet ucunda hafif bir pozitif basınç oluşturmak için su haznesinin konumunu ayarlayın.
Kamera yazılımında alımı başlatın ve floresan deklanşörü açın. İstenen basınca ulaşmak ve bir RBC'yi aspire etmek için hesaplanan voltaj büyüklüğünü kontrol paneline yazın. Basıncı önceden ayarlanmış bir süre basılı tutun, ardından bırakın.
Benzer şekilde, daha fazla analizden önce deneyi bir sonraki RBC ile tekrarlayın. Basınçtaki kademeli artış, kalsiyum iyonlarının RBC'lere mobilizasyonunun artmasına neden oldu.
