Başlamak için, kültürlenmiş hücrelerden berraklaştırılmış virüs elde edin. Ultrasantrifüj tüplerini çok kanallı peristaltik pompanın çıkış tarafındaki bir rafa yerleştirin. Serolojik bir pipet kullanarak, her bir ultrasantrifüj tüpüne 10 mililitre arıtılmış virüsü dikkatlice dağıtın.
Ardından, %15 iyodiksanol fraksiyonunun 22 mililitresini temiz bir 50 mililitrelik konik tüpe aktarın. Pompanın sağ tarafındaki kılcal damarları boruya yerleştirin ve pompayı çalıştırın. Pompayı durdurun.
İodiksanol fraksiyonu, pompanın çıkış tarafındaki kılcal damarların ucuna ulaştığında, her bir ultrasantrifüj tüpüne arıtılmış virüs içeren bir çıkış kılcal yerleştirin ve pompayı çalıştırın. %15'lik fraksiyonun sonuncusu giriş kılcal damarlarına alınmak üzereyken pompayı durdurun. Daha sonra,% 25 iyodiksanol fraksiyonunun 22 mililitresini 15 mililitrelik konik tüpe aktarın.
Pompayı çalıştırdıktan sonra, tüm fraksiyonun giriş kılcal damarlarına alınmasına izin verin ve pompayı durdurun. Gerekirse, %60'lık fraksiyondan daha fazlasını ekleyin ve lizat üstte bir kubbe yapana kadar ancak taşmayana kadar her tüpü doldurun. Pompayı durdurun ve çıkış kılcalını dikkatlice çıkarın.
Ultrasantrifüj tüpünü bir ara parça ile kapatın ve 70 TI tipi bir rotora yükleyin. Santrifüjlemeden sonra, ultrasantrifüj tüpünü bir destek standına kelepçeleyin. Tüy bırakmayan bir mendil kullanarak ultrasantrifüj tüpünün kapağını çıkarın.
Daha sonra, 5 mililitrelik bir şırıngaya 20 gauge iğne takın ve iğne ile% 40 ve% 60 iyodiksanol arayüzünün yaklaşık 3 mililitre altında ultrasantrifüj tüpünün duvarına nüfuz edin. Arayüzü ve% 40 fraksiyonun bir kısmını yavaşça aspire edin. Bir parmağınızı ultrasantrifüj tüpünün açık üst kısmı üzerinde tutarak şırıngayı dışarı çekin ve aspire edilen AAV fraksiyonunu 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın.
Son olarak, aspire edilen virüs fraksiyonunu AAV lizis tamponunda iki kat 40 mililitrelik bir hacme seyreltin. Peristaltik bir boruyu yıkadıktan sonra, ikinci fraksiyonlama turu için 20 mililitre seyreltilmiş AAV fraksiyonunu yeni bir ultrasantrifüj tüpüne yükleyin.
