Başlamak için 3D yazıcıyı bir bilgisayara bağlayın. 3D baskılı kelepçelere iğneli bir mililitrelik tek kullanımlık şırınga yükleyin. cl'yi sabitlemek için iki M8 soket cıvatası kullanın.ampşırınganın etrafında.
Pistonu manuel olarak kaldırmak için kılavuz vidayı döndürün ve şırıngada iki mililitrelik bir hava boşluğu oluşturun. Vibrio cholerae kültürlerini hazırlamak için, hücreleri 10 steril cam boncuk ile üç mililitre Luria suyuna aşılayın. Hücreleri çalkalama inkübatörde 37 santigrat derecede beş ila altı saat büyütün.
Benzer şekilde, E.Coli'yi üç mililitre sıvı Luria suyuna aşılayın. 37 santigrat derecede gece boyunca inkübasyondan sonra, 200 mikrolitre kültürü üç saat boyunca taze Luria suyuna aşılayın. Kültürü 10 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın.
Ardından, oda sıcaklığında 644G'de beş dakika santrifüjleyin. Şimdi, süpernatanı çıkarın ve peleti 10 mikrolitre sıvı Luria suyunda yeniden süspanse edin. Ardından, 3D biyoyazıcıya boş bir üç mililitrelik plastik yem kilit şırıngası yükleyin.
Şırınga pistonunu kılavuz vidayla bağlayın. Pistonun daha iyi hareket etmesini sağlamak için hava boşluğunu aktarmak için şırıngayı manuel olarak geri çekin. Şırınga ucuna uygun boyutta kör bir iğne takın.
Şırınga pistonunu geri çekmek için vidayı manuel olarak döndürün ve bakteriyel süspansiyonu şırıngaya yükleyin. Granül hidrojel karışımını hazırlamak için, çapraz bağlı akrilik asidin kuru granüllerini 400 mililitre% 2 Lennox Luria-Bertani suyu ile karıştırın. 10 molar sodyum hidroksitin 500 mikrolitrelik artışlarıyla pH'ı 7,4'e ayarlayın ve pH'ı bir test şeridinde test edin.
Hidrojel karışımını 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarmak için 50 mililitrelik steril plastik bir şırınga kullanın. Matrisi oda sıcaklığında bir dakika boyunca 161 G'de santrifüjleyin. Daha sonra, matrisin gerekli hacmini baskının gerçekleşeceği bir kaba aktarmak için 30 mililitrelik bir şırınga kullanın.
Ardından, hidrojel matrisli numune kaplarını yazıcının yapı platformundaki tutuculara yerleştirin. 3D baskı yazılımını başlatın. Dosyaya tıklayın, ardından yazılıma önceden programlanmış bir gcode yüklemek için dosyayı aç'a basın.
Hareket uzunluğunu girin. Ardından, X, Y, Z düzlemlerini hareket ettirerek yazıcı kafalarını X/Y düzleminde ortalayın. Z eksenini yeniden ayarlamak için ana sayfa simgesine basın.
İğne ucunda az miktarda bakteri süspansiyonu görülene kadar şırınga pistonuna bastırmak için vidayı manuel olarak yavaşça döndürün. Fazla süspansiyonu steril tek kullanımlık bir mendille silin. Şimdi, yazıcı kafasını herhangi bir numune kabının hidrojel ortamına sabit bir mesafede indirin.
Yazdırmaya başlamak için yazdır'a tıklayın. Yazdırma işlemi tamamlandıktan sonra numune kaplarını kapatın. Şırıngayı ve iğneyi uygun şekilde atın.
Yazıcıyı %70 etanol ile silin. Geniş görüş alanı görüntüleme için, yakınlaştırma lensi takılı bir kamera kullanın. Hücreleri oda sıcaklığında yazdırdıktan hemen sonra görüntüleyin.
Ardından, numuneleri 37 santigrat derecede bir inkübatöre aktarın. Matrisin gözenek boyutundaki farklılıkların modal olmayan hücresel yayılmayı etkilediği görülmedi. Bununla birlikte, modal hücreler, daha küçük gözeneklere göre daha büyük gözeneklere sahip matriste daha hızlı yayılır.
Daha büyük gözeneklere sahip hidrojel matrislerindeki vibrio cholerae kolonisi, pürüzsüz dağınık tüylerle yayılır. Modal olmayan hücrelerde dağınık tüyler yoktu. Daha küçük gözeneklere sahip hidrojel matrislerindeki koloni, hem modal hem de modal olmayan hücreler için yalnızca pürüzlü, fraktal benzeri tüyler yoluyla yayılır.
Her iki hücrenin de ilk 150 saat boyunca benzer oranlarda yayıldığı gözlendi. Bununla birlikte, daha uzun süreler boyunca, bazı örnekler daha hızlı yayılma oranları sergiledi. Deneyden sonra hidrojelde azalmış verim stresi, depolama modülü ve kayıp modülü gözlendi.
