Başlamak için, bromofenol mavisi boya enjekte edilmiş fareyi stereotaksik çerçeveden serbest bırakın. Anesteziden sonra, fareyi bantlı bir köpük levha üzerine sabitleyin. Sağ atriyal apendikste bir ila iki milimetrelik bir kesi yapın.
Sol ventriküle bir infüzyon iğnesi yerleştirin. 20 mililitre önceden soğutulmuş tuzlu su, ardından 20 mililitre buzlu% 4 paraformaldehit çözeltisi infüze edildi. Şimdi cildi çıkarmak ve kafatasını ortaya çıkarmak için boyundan buruna kadar orta hat boyunca bir kesi yapın.
Kafatasındaki artık kasları temizlemek için forseps veya makas kullanın. İnce makasın bir bıçağının ucunu, midsagital sütürün rostral ucunda kemiğe bakacak şekilde keskin bir kenarı foramen magnum ile beyin arasına yerleştirin. Kafatasını midsagital sütür boyunca yavaşça kaydırın ve kesin.
Kafatasını çıkarmak için forseps kullanın, beyni açığa çıkarın. Döner mikrotom kriyostatını açtıktan sonra, oda sıcaklığını eksi 20 santigrat dereceye ayarlayın. Numune diskinin yüzeyini eşit şekilde kaplamak için biraz optik kesme sıcaklığı veya OCT bileşiği dökün.
Numune diskini kriyo odasına yerleştirin ve OCT'nin katılaşmasına izin verin. Diski numune kafasına takın. Ardından, bıçağı bloğa yaklaştırın ve diske paralel düz bir düzlem oluşturmak için OCT bloğunu kesin.
Bir tıraş bıçağı kullanarak, beyni enjeksiyon bölgesinden uzakta, bir beyin dilimi kalıbında koronal yönde kesin. Enjeksiyon bölgesini içeren beyin dokusunu, kesik tarafı aşağı bakacak şekilde OCT düz düzlemine yerleştirin. OCT'yi beynin üzerine dökün ve diski kriyo odasına yerleştirin, böylece numune bloğunun katılaşmasına izin verin.
Hedef bölge yaklaşana kadar numune bloğunu kesin ve enjeksiyon bölgesi seviyesinden birkaç bölüm yapın. Koronal beyin dilimlerini oda sıcaklığında PBS içeren altı oyuklu bir plakaya toplamak için soğutulmuş küçük bir yazı fırçası kullanın. Bir fırça kullanarak, altı oyuklu plakadan beyin bölümlerini alın ve bir slayta yerleştirin.
Kuruduktan sonra, görsel olarak, beyin bölümlerinde enjekte edilen bölgeyi gözlemleyin.
