Başlamak için, tek bir OP50 kolonisini beş mililitre LB içinde ampisilin ve amfoterisin B ile aşılayın ve bir bakteri çalkalayıcıda 37 santigrat derecede yaklaşık altı saat inkübe edin. Kültür bulanıklaştığında, OP50'nin preinokülum kültürünü ampisilin ve gliserol ile 250 mililitre TB'de 1 ila 2.000 oranında seyreltin. Daha sonra OP50 sıvı kültürünü steril bir santrifüj tüpüne aktarın.
Tüpü dört santigrat derecede bir masa üstü santrifüjde 3, 100 G'de 15 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı atın ve yeniden santrifüjlemeden önce OP50 peletini steril suda yeniden süspanse edin. İkinci yıkamadan sonra, süpernatanı atın ve OP50 peletini steril suda 50 mililitre hacme kadar tekrar süspanse edin.
Önceden tartılmış 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. OP50'yi peletlemek için tüpü 20 dakika santrifüjleyin. Santrifüjlemenin sonunda, tüpte su kalmadığından emin olarak kalan tüm süpernatanı dikkatlice çıkarın.
Boş santrifüj tüpünün ağırlığını pelet ile santrifüjleme tüpünün ağırlığından çıkararak peletin ağırlığını hesaplayın. Mililitre başına 50 miligramlık bir konsantrasyon elde etmek için OP100 peletini S-tam tamponda iyice yeniden süspanse edin. Herhangi bir kontaminasyon olup olmadığını kontrol etmek için OP50 süspansiyonunu bir agar plakası üzerinde test edin.
OP50 süspansiyonunu dört santigrat derecede S-tam tamponda saklayın.
