Floresan görüntüleme için optimum kesme sıcaklığı bileşiğinde oküler doku gömme ve kriyoseksiyon

Lütfen tüm çevirilerin yapay zeka tarafından oluşturulduğunu unutmayın. İngilizce sürüm için buraya tıklayın.

90 Views

•

02:29 min

•

November 10th, 2023

DOI :

10.3791/201613-v

November 10th, 2023

•

Erik A. Souverein¹, Aaron Nagiel²^,³^,⁴, Ksenia Gnedeva⁵^,⁶

¹Keck School of Medicine, University of Southern California, ²The Vision Center, Department of Surgery, Children’s Hospital Los Angeles, ³The Saban Research Institute, Children’s Hospital Los Angeles, ⁴USC Roski Eye Institute, Department of Ophthalmology, Keck School of Medicine, University of Southern California, ⁵Eli and Edythe Broad CIRM Center for Regenerative Medicine and Stem Cell Research, University of Southern California, ⁶Tina and Rick Caruso Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, University of Southern California

Transkript

Tavşan gözünün kriyo koruması tamamlandıktan sonra,% 30'luk bir sükroz çözeltisinden 100 milimetrelik bir diseksiyon kabına aktarın. Diseksiyon mikroskobu altında, gözün iç kısmındaki fazla sükroz solüsyonunu çıkarmak için gözü dikkatlice çevirin. Bir mendil kullanarak, gözün dış kısmındaki fazla sükroz solüsyonunu nazikçe silin, tek kullanımlık bir gömme kalıbını optimum kesme sıcaklığı veya OCT bileşiği ile 0,5 ila bir santimetre derinliğe kadar doldurun.

Gözü yukarı bakacak şekilde gömme kalıba yerleştirin ve kabarcık oluşumunu önleyerek gözün iç kısmını yavaşça OCT bileşiği ile doldurun. Göz, OCT bileşiğinde ortaya çıktığında ve kalıbın iç yüzeylerine temas etmediğinde, gömme kalıbını parafine sarın ve gece boyunca dört santigrat derecede saklayın. Ertesi gün, gömme kalıbını bir diseksiyon kabına yerleştirin.

Mümkünse, OCT bileşiğini gözün içinden bir mendille nazikçe çıkarın. Gözü taze OCT bileşiği ile doldurulmuş yeni bir gömme kalıbına aktarın. Ardından, son gömme ortamının kalıntı veya kusur içermediğinden emin olmak için kalıbı daha önce yapıldığı gibi doldurun.

Kalıbı oryantasyon amacıyla etiketleyin. Gözü kriyo kalıbında yukarı doğru konumlandırın, böylece OCT bileşiği iç retinayı kaplar. Gözün üst kısmını belirlemek için optik sinir kafasını bir yer işareti olarak kullanın Etiketli gömme kalıbını kuru buzun üzerine yerleştirin, gözün kalıbın iç yüzeylerine temas etmediğinden veya havaya maruz kalmadığından emin olun.

Bloğu, gözün üst kısmı yukarı ve alt kısmı aşağı bakacak şekilde kriyostat üzerine monte edin. Kalan kornea ve iris sağa veya sola bakacak şekilde. Kesit almak için gözün dikey eksenine paralel yeni bir bıçak yerleştirin.

Bölümleri kestikten ve gece boyunca kuruttuktan sonra, 80 santigrat derecede bir dondurucuya bir slayt yerleştirin. Tavşan gözünün tüm retinal kriyoseksiyonunun floresan görüntüleri, üstteki fotoreseptör tabakasından önemli bir ayrılma olmaksızın düzgün pigmentli bir retina pigment epitel tabakası gösterdi. Retina bölümünün parlak alan görüntüsü, tüm katmanların bozulmamış retina morfolojisini daha da gösterir.

Daha Fazla Video Keşfet

Ocular Tissue Embedding

Cryosectioning

Optimal Cutting Temperature Compound

Dissecting Microscope

Embedding Mold

OCT Compound