Anestezi uygulanmış hayvanı cerrahi platforma yerleştirerek başlayın. Ameliyat sırasında kornea kurumasını önlemek için her hayvanın gözlerine kayganlaştırıcı göz merhemi sürün. Traş edilmiş cerrahi bölgeyi üç alternatif tur povidon iyot ve izopropanol ile dezenfekte edin.
Daha sonra bir rulo kağıt havlu veya 1,5 santimetre çapında bir tüp yerleştirin, hayvanın altına, sadece kalçalara kadar yerleştirin. Hayvanı fenestre bir örtü ile örtün, cerrahi erişim için fenestrasyonu lomber omurga üzerinde ortalayın. Hayvandaki anestezi derinliğini doğrulamak için, her bir pençeyi sıkıştırın ve herhangi bir geri çekilme tepkisi olup olmadığını gözlemleyin.
Daha sonra 11 numaralı neşter bıçağı kullanarak, L2'den L6'ya kadar orta hattan aşağı doğru üç santimetre uzunluğunda bir cilt kesisi yapın. Şimdi kas ve cilt arasına steril kavisli bir çift cerrahi makas yerleştirin ve cildi alttaki kastan ayırmak için uçları nazikçe açın. L2 ila L5 omurlarının spinöz süreçlerini kaplayan fasyayı çıkarın.
25 ila 35 mikrolitre AAV9 vektörünü steril bir mikro santrifüj tüpünün kapağına pipetleyin. Vektörün tüm hacmini kapaktan insülin şırıngasına çizin. Daha sonra hayvan üzerindeki L5 ve L4 dikenli süreçleri tanımlayın.
Şırınga iğnesini, işlemin kaudal ucuyla hizalayarak L5 dikenli işlemin soluna yerleştirin. Şırınga iğnesini L5 lamina üzerinde yaklaşık sekiz milimetre ileri doğru ilerletin ve ardından kemikle temas sağlanana kadar L4 laminanın altından bel sarnıcına doğru ilerletin. Şırınga pistonuna yaklaşık beş saniye boyunca yavaşça bastırın.
Ardından iğneyi yerleştirme yerinden yavaşça çekin. 4-0 dikiş veya cerrahi zımba kullanarak, yaranın bir ucundaki kesiyi kapatmaya başlayın. Boya enjeksiyonunun başarısını değerlendirmek için, hayvanı ötenazi yaptıktan sonra, spinöz işlemlerin her iki tarafında omurgaya paralel kas içine dört santimetre uzunluğunda bir kesi yapın.
Dikenli süreçler arasındaki kasları hassas bir şekilde çıkarmak için omurga forseps veya makas kullanın. bir rongeur kullanarak, L6'dan alt torasik omurgaya kadar olan dikenli süreçleri çıkarın. Rongeur'un alt ucunu L5 laminanın altına yerleştirin ve omuriliğin üzerindeki kemiği birkaç ısırık alarak metodik olarak çıkarın.
