Hipokampusu embriyonik bir fare beyninden diseke ederek başlayın ve disseke edilen dokuyu buz gibi soğuk kalsiyum ve magnezyum içermeyen tampon veya CMF'ye yerleştirin. Daha sonra, CMF'yi çıkarın ve dokuyu taze soğuk CMF ile dört kez durulayın, tüpü durulamalar arasında hafifçe döndürün. Daha sonra filtrelenmiş% 0.125 tripsin çözeltisi ekleyin ve her beş dakikada bir dönerek 37 santigrat derecede 15 dakika inkübe edin.
İnkübasyondan sonra, tripsin çözeltisini çıkarın ve iki kez buz gibi soğuk CMF ile yıkayın. Sonra üç mililitre tripsin inaktivasyon çözeltisi ekleyin. Daha sonra, hücreleri ayırmak için, üç mililitrelik bir şırıngaya bağlı 14 gauge bir iğne ile iki saniyelik çekilişler kullanarak 30 kez titre edin.
15 gauge iğne kullanarak 30 kez, ardından 16 gauge iğne kullanarak 20 kez ve ardından 18 gauge iğne ile 20 kez olmak üzere iki saniyelik çekimlerle titrasyona devam edin. Ardından, hücre ayrışmasını tamamlamak için 21 gauge iğneyi 15 kez kullanarak üç saniyelik çizimler yapın. Bir mikroskop lamı üzerine bir damla hücre süspansiyonu yerleştirerek hücre kümelerini kontrol edin.
Daha sonra, 0.22 mikronluk bir şırınga filtresi kullanarak beş mililitre FBS'yi filtreleyin. Hücre süspansiyonunu 15 mililitrelik konik bir tüpte FBS'ye nazikçe katmanlayın. Hücreleri beş dakika boyunca dört santigrat derecede 200 x g'da santrifüjleyin.
FBS'yi çıkarın ve peleti bir mililitre ılık antibiyotik antibiyotik içermeyen nörobazal ortamda yeniden süspanse edin. Hücre süspansiyonunu %0.4 tripan mavisi ile seyreltin ve bir hücre sayımı elde edin. Hücreleri 750 mikrolitre antibiyotik içermeyen nörobazal ortamda, önceden ısıtılmış poli-D-lizin kaplı 4 oyuklu odacıklı slaytta kaplayın.
Hücreleri nem kontrollü bir odada 37 santigrat derece ve% 5 CO2'de inkübe edin.
