Başlamak için, fare kalp dokusunu içeren beş mililitrelik bir taşıma şişesine iki mililitre sindirim tamponu ve fare iskelet dokusunu içeren 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne dört mililitre sindirim tamponu ekleyin. Dikenli bir fareden izole edilen kalp ve kuadrisep kas dokusunu bir Petri kabının kapağına yerleştirin. Bir çift doku makası ile bir milimetre küpten daha küçük parçalar halinde doğrayın.
Kıyılmış dokuyu ilgili sindirim tüplerine aktarın. Tüplerin içeriğini düşük hızda iki saniye boyunca girdaplayın. 20 dakika sonra tüpleri döndürücüden çıkarın.
Doku parçalarının yerleşmesine izin verin. Süpernatanı aspire etmek için bir P 1000 pipeti kullanın. Süpernatanı, 20 mililitre buz gibi soğuk FACS tamponu içeren 50 mililitrelik santrifüj tüplerine aktarın.
Sindirim tüplerini ilgili hacimlerde sindirim tamponu ile doldurun. Onları tekrar döndürücü üzerinde kuluçkaya yatırın. Kasları başka bir sindirim turuna tabi tuttuktan sonra, sindirimi gidermek için buz gibi soğuk FACS tamponu ekleyin.
50 mililitrelik bir santrifüj tüpünün üzerine 40 mikrometrelik bir hücre süzgeci yerleştirin. Sindirim süspansiyonunu süzün ve süzgeçten geçirin. Hücre süspansiyonunu 500 G'de dört santigrat derecede sekiz dakika santrifüjleyin.
Süpernatanı çıkardıktan sonra, pelete üç mililitre ACK lizis tamponu ekleyin ve yeniden süspanse edin. Süspansiyonu buz üzerinde beş dakika inkübe edin. FACS tamponu ile hacmi 40 mililitreye kadar doldurun.
Numuneleri tekrar 500 G'de dört santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin. Süpernatanı boşalttıktan sonra, peleti 0,5 mililitre FACS tamponunda yeniden süspanse edin. Son olarak, süspansiyonu beş mililitrelik polistiren yuvarlak tabanlı bir tüp üzerine yerleştirilmiş 40 mikrometrelik bir hücre süzgeci kapağından süzün.
