Canlı Görüntüleme Kullanılarak Radyosensitivite Değerlendirmesi için Hasta Kaynaklı Tümör Organoidlerinin Işınlanması ve İşlenmesi

Başlamak için, hastadan türetilmiş tümör organoidi veya PDTO elde edin ve her üç ila dört günde bir PDTO'ya üç mililitre taze zenginleştirilmiş DMEM F / 12 kültür ortamı ekleyin. Küçük hayvan araştırma radyasyon platformu ışınlayıcısını kullanarak, PDTO içeren kubbeleri açık alan modunda ışınlayın. Işınlamadan hemen sonra, Nagrigel kubbesi içeren her PDTO'yu iki mililitre zenginleştirilmiş DMEM F / 12 ortamı ile yıkayın.

Daha sonra bir P 1000 kullanarak, PDTO'yu ticari olarak elde edilen bir rekombinant enzimin bir ila üç mililitresinde yeniden süspanse edin. Hücre süspansiyonunu 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın ve 37 santigrat derecede beş dakika inkübe edin. Hücreleri peletlemek için tüpü santrifüjleyin ve tüpte yaklaşık bir mililitre rekombinant enzim bırakmak için süpernatanı aspire edin.

Daha sonra hücreleri zenginleştirilmiş DMEM F / 12 ortamı ile yıkayın ve hücre kümelerini ortadan kaldırmak için hücre süspansiyonunu 40 mikrometre gözenekli bir filtrede filtreleyin, filtrelenmiş hücrelerin küçük bir örneğini PBS'de% 10 tripin mavisi ile boyayın ve bunları otomatik bir hücre sayacında sayın. % 66 magrigel ile zenginleştirilmiş 50 mikrolitre ortamda 800 hücre yoğunluğu elde etmek için hücreleri yeniden askıya alın. Bir sonraki plaka, her bir kubbe görüntüleme uyumlu bir 48 kuyulu kültür plakasının ayrı kuyucuklarında ve magrigel'in katılaşmasına izin vermek için plakayı inkübe edin.

Son olarak, canlı görüntüleme için her bir kuyucuğa 0,5 ila bir mililitre zenginleştirilmiş DMEM F/12 ortamı ekleyin.