Murin Subventriküler Zon Kaynaklı Nöral Kök Hücrelerden Elde Edilen Nörosfer Kültürlerinin Nükleofeksiyonu

Önerilen kiti kullanarak, istenen her nükleofeksiyon koşulu için 1,5 mililitrelik bir tüpte 95 mikrolitre nükleofeksiyon solüsyonu hazırlamaya devam edin. Ayrıca, her koşulda dört mililitre önceden ısıtılmış tam ortam ile doldurulmuş bir T25 şişesi hazırlayın ve kullanıma kadar inkübatörde tutun. Nükleofeksiyon gerçekleştirmek için, süpernatanı çıkarmadan önce istenen sayıda hücreyi 300 G'de beş dakika boyunca santrifüjleyin.

Bir mililitre DPBS ekleyin ve peleti 10 kez yukarı ve aşağı pipetleyerek homojen bir şekilde yeniden süspanse edin. Santrifüjlemeyi tekrarladıktan sonra, peleti 95 mikrolitre nükleofeksiyon çözeltisinde tekrar süspanse edin. 95 mikrolitre hücreyi, nükleofeksiyon için seçilen her bir plazmitten beş mikrolitre içeren önceden karıştırılmış bir çözelti ile birleştirin.

Bu çözeltiyi bir küvete aktardıktan sonra, nükleofektör sisteminin optimize edilmiş nöral kök hücre programını kullanarak hücreleri plazmitlerle nükleofect etmek için nükleofektör cihazına yerleştirin. Elektroporasyonu tamamladıktan sonra, kitte verilen Pasteur pipetini kullanarak, sıcak tam ortamı küvete dikkatlice yerleştirin. Küvetin içeriğini, önceden ısıtılmış tam ortam içeren önceden hazırlanmış T25 şişesine aktarın.

Nükleofect edilmiş hücreleri nemlendirilmiş bir inkübatörde 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte üç ila beş gün boyunca inkübe edin ve nükleofecte edilmiş nörosferleri görselleştirin.