Başlamak için kolajen, sodyum hidroksit, steril ultra saf su, 10 kez PBS, bir mikro santrifüj tüpü, metakrillenmiş hyaluronik asit ve foto başlatıcıyı buzun üzerine yerleştirin. Daha sonra doku kültürü eklerini plakaya yerleştirin ve etiketleyin. Mililitre kollajen çözeltisi başına üç miligram hazırlamak için, yüksek konsantrasyonlu kollajen, bir normal sodyum hidroksit, ultra saf su ve 10 kez PBS'yi birleştirin.
Mikro santrifüj tüpüne bileşenler ekleyin ve kabarcık oluşumunu önlemek için karıştırırken pipet ucunu su altında tutun. Bundan sonra, hücreleri oda sıcaklığında beş dakika boyunca 200 G'de santrifüjleyin. Ardından, her bir hücre durumu çözeltisinin üstünden fazla ortamı nazikçe çıkarın ve durum için gereken ortam hacmini bırakın.
Bu çözeltileri buzun üzerine yerleştirin. Hesaplanan kollajen çözeltisi hacmini her hücre durumu çözeltisine ekleyin. Daha sonra, hesaplanan %1 metakrillenmiş hyaluronik asit hacmini ve ardından her hücre durumu çözeltisinde mililitre LAP başına 17 miligram ekleyin.
Kabarcık oluşumunu önlemek için pipet ucunu suya batırırken her koşul tüpünü birer birer karıştırın ve her doku kültürü ekine 100 ila 150 mikrolitre ekleyin. Şimdi 385 nanometre ultraviyole lambayı sabit bir akımda açın. Her bir jeli çapraz bağlamak için, her bir oyuğu birer birer 45 saniye boyunca ultraviyole ışığa maruz bırakın.
Ardından, kolajeni çapraz bağlamak için plakayı 30 ila 45 dakika boyunca 37 santigrat dereceye yerleştirin. A vitamini içermeyen% 0.5 ve hacimce iki hacim ve hacimce% 1 hacimce B27 olan bir astral bazal ortam kullanarak, sıvı basınç başlığını jellere uygulayın. Net sıfır akış için kuyu plakasına ve doku kültürü eklerine ortam ekleyin.
Plakayı en az 37 saat veya beş güne kadar %5 karbondioksit, 18 santigrat dereceye yerleştirin.
