Başlamak için, monte edilmiş endometriyal doku bölümlerini istenen antikorlarla boyayın. Görüntüleyiciyi açın ve TSA boyalarına dayalı olarak uygun floroforları seçin. Slaytın her bir işaretçinin adil bir şekilde pozlandığını gösteren bir alanına manuel olarak odaklanın ve söz konusu floroforun pozlama süresini ayarlamak için otomatik pozlama özelliğini kullanın.
Tarafsız örneklemeyi sağlamak için, luminal epitel sınırına odaklanarak görüntü elde etmek için ilk alanı rastgele seçin. İlk alanı yakaladıktan sonra, sonraki alanları seçmek için bir alanı sola veya sağa hareket ettirin ve yakalanan her görüntü arasında bir alan atlayın. Yaklaşık 10.000 stromal hücre içerecek şekilde en az beş farklı alanı yakalamak için luminal epitel sınırını çerçeve içinde tutun.
TSA monopleks ve multipleks boyama, NK hücre belirteçlerinin net kolokalizasyonunu ortaya çıkardı ve farklı NK hücre popülasyonlarının tanımlanmasına izin verdi. Multipleks stratejisi, spektral örtüşmeyi önlemek ve net bir arka plan sağlamak için uzak dalga boylarına sahip floresan boyalar kullandı ve sinyal özgüllüğünü doğruladı.