Başlamak için, uygun antikorlarla boyandıktan sonra endometriyal doku kesitlerini görüntüleyin. Multispektral görüntüleri içe aktarmak için, yazılım arayüzünde Dosya'ya ve ardından Görüntüyü aç'a gidin. Floroforları Seç'e tıklayın ve floroforları karıştırmak için uygun spektral kitaplığı seçin ve onaylamak için Tamam'a tıklayın.
AF görüntüsünden temsili bir doku alanını örneklemek için AF damlalık aracını kullanarak otofloresan spektrumunu izole edin ve dört hücre yüzeyi işaretleyicisini etiketleyin ve tanımlama için belirli renkler atayın. Hazırlığı tamamlamak için Görüntüyü Hazırla veya Tümünü Hazırla'ya tıklayın. Doku segmentasyonu için, epitelyal, stromal ve boş alanlar dahil olmak üzere doku tipi başına üç ila beş bölgeyi manuel olarak tanımlayın.
Eğitim veri kümesini iyileştirmek için bölgeleri ve parametreleri gerektiği gibi ayarlayın ve yazılımın doku yapılarını tanımlamadaki doğruluğunu artırın. Segment hücreleri altında, Çekirdek ve Zar'ı seçin. Hücre çekirdeklerini tanımlamak için DAPI'yi seçin ve arka plan gürültüsü olmadan tüm hücre çekirdeklerini algılamak için yoğunluk ayarını yapın.
Membranı bulmak ve nükleer bölünmeye yardımcı olmak için CD16, CD49A ve CD56 sinyallerini seçin. Yakın konumdaki çekirdekleri ayırt etmek için nükleer bileşen bölme özelliğini kullanın. Fenotipleme şemasında, hücre fenotiplemesi için CD56, CD49A, CXCR4 ve CD16 belirteçlerini benimseyin.
Hücreleri her bir işaretçiyi pozitif veya negatif olarak ifade edecek şekilde kategorilere ayırmak için Ekle düğmesini kullanın. Eğitim işlemi sırasında her fenotip için en az beş hücreyi manuel olarak etiketleyin. Hücre fenotiplemesini yapılandırdıktan sonra, yazılım her hücre için yüzey işaretleyicilerinin ifadesini gösterecektir.
Daha fazla analiz için verileri bir elektronik tabloya aktarın. Yeni sınıflandırma stratejisi, CD49A ve CXCR4'ün ekspresyonuna dayalı olarak dört NK hücre alt tipini tanımladı.