Başlamak için, serum ve enzim karışımlarını ilgili kontrolleriyle birlikte hazırlayın. Mikroplaka okuyucuda, 30 dakika boyunca en kısa okuma aralığı ile 260 nanometrede absorbansı ölçmek için bir kinetik okuma protokolü ayarlayın. Daha sonra, tüm donmuş numuneleri buz üzerinde çözün ve çözülen her numuneyi 1 ila 10 arasında, LoBind mikrosantrifüj tüplerinde 37 santigrat dereceye kadar önceden ısıtılmış 1x PBS ile seyreltin.
Beş milimolar adenozin stoğu hazırlamak için, 50 mililitre 1x PBS'ye 66.8 miligram adenosin ekleyin. 250 mikromolar çözeltiye seyrelttikten sonra, adenozini bir inkübatörde 37 santigrat dereceye ısıtın. 96 oyuklu ultraviyole uyumlu bir mikroplakaya, 160 mikrolitre adenosin ve ardından üçlü olarak her seyreltilmiş protein örneğinden 40 mikrolitre ekleyin.
Her bir kuyucuğun emilimini 260 nanometrede 30 santigrat derecede 37 dakika boyunca ölçün. Veri analizi için, verileri bir elektronik tabloya aktarın, ardından ilk birkaç dakika için zamanın bir fonksiyonu olarak absorbans verilerinin doğrusal bölgesinin eğimini belirleyin. Havuzlanmış insan serumu veya PBS'den oluşan negatif kontrolün eğimini, sırasıyla enzim artı serum karışımlarının ve enzim artı PBS karışımlarının eğimlerinden çıkarın.
Son olarak, denklemi kullanarak kalan aktivite fraksiyonunu elde etmek için ayarlanan tüm eğimleri sıfır saat zaman noktasında orijinal eğime normalleştirin ve zamana karşı kalan aktivite fraksiyonunu çizin. Wildtype HsADA1 aktivitesi, havuzlanmış insan serumunda beş gün boyunca 1x PBS'ye kıyasla daha hızlı azaldı. Vahşi tip HsADA1 için absorbans düşüş eğrileri, beşinci güne kıyasla sıfırıncı günde daha dik bir başlangıç eğimi gösterdi.
Negatif kontrol numuneleri, enzim numunelerine kıyasla ihmal edilebilir absorbans değişikliği gösterdi.
