Tirozin fosfatazın kemogenetik kontrolünü incelemek için RapR-SHP2'nin immünopresipitasyonu

Başlamak için, immünopresipitasyon için RapR-Shp2 eksprese eden HEK 293 T hücrelerini kültürleyin ve hazırlayın. Sepharose'u hazırlamak için, 1.5 mililitrelik bir tüpe yeniden süspanse edilmiş Protein G-Sepharose ekleyin. Lizis tamponunu ekledikten sonra, tüpü 2000 G'de bir dakika boyunca mikro santrifüj edin ve lizis tamponunu dikkatlice çıkarın.

Daha sonra tüpü birkaç kez ters çevirerek Sefarozu 380 mikrolitre lizis tamponunda yeniden süspanse edin. Sepharoz'u BSA ve antikor ile 1.5 saat boyunca dört santigrat derecede bir döndürücü üzerinde inkübe edin. Sepharose'u daha önce gösterildiği gibi yıkadıktan sonra, lizis tamponunda dikkatlice yeniden süspanse etmek için bir kesik uç kullanın.

RapR-Shp2'yi eksprese eden hazırlanmış HEK 293 T hücrelerinden süpernatanı, yeni bir 1.5 mililitrelik tüpte 50 mikrolitre süspanse Sefaroza ekleyin ve tüpü 1.5 ila iki saat boyunca dört santigrat derecede bir döndürücü üzerinde inkübe edin.