Fibronektin kaplamaya başlamak için 12 ek ve 2 24 oyuklu plaka seçin. Ekleri bir kuyucuklu plakaya yerleştirin ve altılı iki sıra oluşturun. 1.5 mililitrelik bir tüpte 52 mikrolitre fibronektin stok çözeltisi ve 1.2 mililitre PBS'yi karıştırarak mililitre fibronektin çözeltisi başına bir mikrogram hazırlayın.
Her bir eke 100 mikrolitre fibronektin çözeltisi dağıtın. Ekleri kuyu plakasında üç saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. İnkübasyondan sonra, fazla fibronektin çözeltisini her bir parçadan çıkarın.
Her bir parçaya 100 mikrolitre steril damıtılmış su ekleyerek ekleri iki kez yıkayın. Uçlar arasında tutarlı yıkama süresi sağlamak için suyu eklendiği sırayla çıkarın. Şimdi ekleri 100 mikrolitre hücre kültürü ortamıyla yıkayın ve ardından ortamı eklerden çıkarın.
Daha sonra, eklere 200 mikrolitre A431 hücre süspansiyonu yerleştirin. Negatif kontrol için, eklere 200 mikrolitre hücre kültürü ortamı pipetleyin. Kalıcı bir işaretleyici kullanarak, ikinci kuyu plakasını üç kuyu genişliğinde iki sütuna bölen bir çizgi çizin.
Her sütunu satırlara ayırın. Kılavuzdaki her bölgeyi ilgili parametrelerle etiketleyin. Her oyuğa bir mililitre hücre kültürü ortamı ekleyin.
Ekleri hazırlık plakasından etiketli deney plakasındaki uygun yerlerine aktarın ve 37 santigrat derecede 12 saat inkübe edin.
