Bu çalışma Sağlık New York Dışişleri Bakanlığı (C026878) tarafından desteklenmiştir. MS New York Kök Hücre Vakfı-Druckenmiller Fellow idi. Dimes Vakfı Mart Araştırma Bursu No 5-FY11-571 Part desteklenir.

1. Besleyici Hücrelerinin Hazırlanması Aşağıda açıklanan tüm reaktifler (Tablo 1 ve 2) steril bir şekilde hazırlanması gerektiğini unutmayın. Bu protokol, erişkin fare somatik hücre testis dönüştürülmüş bir türevidir ve başka bir yerde 3 tarif edilmiştir besleyiciler JK1 hücre hattı (Hücre Biolabs, Inc, katalog # CBA-315) kullanılır. Bütün hayvan prosedürleri kurumsal kurallar ve düzenlemelere uygun olarak gerçekleştirilmesi gerektiğini de unutmayın. <ol><li> JK1 hücreler kültür korunur ve geçit 39 başarıyla besleyiciler kadar kullanılabilir. Filtre ile sterilize edilmiş besleyici büyüme ortamı 10 ml ile 100 mm&#39;lik bir hücre kültürü çanağı (BD Falcon, katalog # 353003) kültür içinde hücreleri JK1 (DMEM ile desteklenmiş% 10 fetal bovin serumu [FBS], 2 mM L-glutamin ve antibiyotikler). Kültür% 95 izdiham ulaştığı zaman, hücrelerin oranı 01:06 -1:10 ayrıldı. </li><li> Konfluent JK1 besleyici hücre mono ortamı çıkarınkatmanı. </li><li> Kalsiyum ve magnezyum olmadan bir kez PBS ile hücre tabakası yıkayın. </li><li> Önceden ısıtılmış tripsin / EDTA, 1x (% 0.05 trypsin/0.53 mM EDTA; Corning Cellgro, katalog # 25-051-CI) ekleyin ve 37 ° C&#39;de 5-10 dakika inkübe edilir. </li><li> Besleyici büyüme ortamında eşit hacmi ile tripsin inaktive eder. Hücreleri toplamak ve 5 dakika boyunca 300 xg&#39;de santrifüj. Besleyici büyüme ortamında hücreleri yeniden askıya. </li><li> Kuyu kapağı ve oda sıcaklığında 5 dakika sonra kaldırmak için yeterli% 0.4 jelatin solüsyonu ilave edilerek ön-kaplama, çok iyi hücre kültür plakaları. </li><li> Levha ~ jelatin kaplı hücre kültürü plaka mm 2 başına 250 hücre (örneğin 48-iyi ya da 6-biçimi). 16 ila 24 saat süre ile 37 ° C &#39;de kültür inkübe edin. </li><li> Kuyulardan kültür ortamı çıkarın. DİKKAT: hücre büyümesi inaktive etmek için DMEM içinde seyreltilmiş 10 ug / ml &#39;de mitomisin-C taze bir çözelti eklemek için, her bir kuyucuğa (örneğin, 200 ul / çukur bir 48 kuyulu plakanın için). Mitomisin-C toksiktir. Dikkatlice taşıyınız ve atın. Inkübe37 ° C&#39;de 4 saat için. </li><li> Hücrelerinden mitomisin-C çözüm çıkarın. Kaplama kök hücreler önce DMEM ile 3 kere yıkayın. </li><li> Besleyici hücreler kuyulardan DMEM çıkarın ve yeterince kök hücre, orta (100 ul / iyi bir 48 kuyulu plakanın; bkz. Tablo 3) ekleyin pasajı sırasında besleyiciler kuruma önlemek için. Besleyiciler içeren kuyuların belirtilen boyutlarda kullanarak, bölümler 3.1 veya 3.4 &#39;de aşağıda açıklandığı gibi, aynı gün DGM&#39;lerin ekleyin. </li></ol> 2. Fare Testis Doku Ayrılma Donör Germ Hücreleri Edinme <ol><li> Hasat yetişkin fare steril moda testis ve geçici bir kapalı Petri (herhangi bir sıvı olmadan eklenen) testislerde saklayın. Desikasyona önlemek ve hücre canlılığı korumak için çanak buz üzerinde hemen yerleştirilir gerekir. </li><li> ¾ mesafesi thr - steril ince forseps ve hücre kültürü kaputu ince bir makas kullanarak, tamamen testis (yani, kesme ~ ½ transecting olmadan tunika albuginea bir transvers kesi yapmakough) ve plaka bir köşeye seminifer tübüller sıkmak için forseps kullanın; ıskarta tunika ve ekli doku. Böylece onun bütünlüğünü korumak ve buharlaşmasını önleyen, doku soğutulmuş tutmak boyunca buz üzerinde plaka tutun. </li><li> Buz üzerinde plaka tutarak hızla, ince makas makas testis başına en az 3 dk tübüller kıyma. </li><li> 50 ml konik tüp tübül parçalarını toplamak ve albümin soğutulmuş PBS /% 1 sığır serum ~ 40 ml yıkayın. </li><li> Spermatozoa ve enkaz tübül parçalarını ayırmak için 10 dakika boyunca 60 xg&#39;de santrifüjleyin. Süpernatantı atın. </li><li> Bir 15 ml&#39;lik konik bir tüp içinde, önceden ısıtılmış ayrışma tampon testis başına 3 ml (DMEM,% 0.05 tripsin,% 0.03 collagenase tip I, 80 U / ml DNAz I ve% 0.5 sığır serum albümini olarak pelet tekrar süspansiyon; bak Tablo ayrışma tampon daha özel ayrıntıları için 2). </li><li> Bir üst düzeye çıkarmak için 15 dakika için 37 ° C &#39;de 150 rpm bir çalkalama kümesindeki bir raf yatay olarak konik boru yerleştiringitation. </li><li> Ayrışmamış parçalarını ayrı tek hücreler için 10 dakika boyunca 60 xg&#39;de aşağı spin. </li><li> Sonraki adıma kadar pelet içeren parçaları kaydedin. Adım 2,8 süpernatant toplayın ve disosiyasyon tamponu nötralize etmek için 3 ml DMEM/10% fetal sığır serumu ekleyin. Geçici buz üzerinde tüp yerleştirin. </li><li> Adım 2.9 &#39;dan kaydedilen pelet ile 2,6-2,7 adım adım 2.8 sonra kalan re-digest parçalar için tekrarlayın. </li><li> Disosiyasyon tampon nötralize etmek DMEM/10% FBS eşit hacimde ekleyin. </li><li> Adım 2.9 kaydedilen hücre süspansiyonu ile adım 2.11 dan recombine süspansiyon. 300 x g&#39;de 5 dakika boyunca santrifüjleyin. </li><li> Testisler çifti başına 16 ml&#39;lik bir hacme kök hücre ortam içinde yeniden süspanse pelet (bkz. Tablo 3). </li></ol> 3. Testis Hücre Süspansiyon Kaplama <ol><li> Hücre süspansiyonu Plaka 2 ml başına iyi bir 6-plaka içeren besleyici hücreler 37 &amp; bir hücre kültürü inkübatör mitomisin-C ve yer ile mitotik-inaktivedeg; C% 5 CO 2. </li><li> 48 saat, aspirat orta sonra 2 ml taze orta ekleyin ve inkübatör dönmek. </li><li> 48 saat sonra, her bir kuyunun 0.5 ml taze kök hücre orta ekleyebilir ve inkübatör dönmek. </li><li> 48 saat sonra, daha sonra hücrelerin haftada üç kez daha sonra gibi büyük, gizli koloniler (&gt; 50 hücreleri) (7 ile 21 gün içinde) görününceye kadar takip besleyebilir. Her hafta beslenme birinci ve ikinci (örneğin Pazartesi ve Çarşamba) için orta ~ 50% kaldırmak ve taze orta hacimce geri% 50 ekleyin. Üçüncü besleme için (örneğin Cuma), tüm orta aspirat ve 2 ml taze ortam ile değiştirin. Bu yaklaşım, tam bir ortam değişikliği kaçınma kültür ortamı içine salgılanan 9 parakrin sinyallerin konsantrasyonlarda dalgalanmaları en aza indirir mantık dayanmaktadır. </li></ol> 4. İlk Passage Colony Picking <ol><li> Geçişli olması kuyulardan içeren kolonilerden orta çıkarın ve taze kök hücre ortamı ekleyin. </li><li> 10x objektif kullanarak kolonileri tanımlayın. Mikroskop hafifçe de-odaklı ile iyice kenarında SSC koloniler hücreler bu yana, zor ya da tek bir hücre sınırlarının ayırt etmek mümkün olan pek çok 11-12 mikron çaplı hücreler, oluşan homojen parlak kümeleri gibi görünür (Şekil 1A) kaynaşarak görünür. Sigara SSC kolonileri gözle görülür sınırları (Şekil 1A, inset) ile, daha karanlık, daha taneli, az ya da çok homojen görünebilir. </li><li> 50 ul pipetteman seti ile, bir 200 ul pipet kullanarak, ilk kuyudan orta sürebilir ve ucu ıslatmaya sınırdışı. Sonra, yavaşça hızla ucu (Şekil 1B) içine emiş tarafından koloni çıkarmak için orta 50 ul çekmeden ucuyla koloni dürtmek. </li><li> Stem hücre ortamı (Şekil 1C) 100 ul ile inaktive edilmiş besleyici hücreleri ihtiva eden bir 48-kuyulu plakanın içine de bir koloni içeren ortam Expel. </li><li> Adımı tekrarlayınKuyu başına 500 ul aşmadan aynı zamanda 8 koloniler 4.3 ve ekleyebilirsiniz. </li><li> Geçit tek SSC kolonileri ile 48 plaka ek kuyuları hazırlamak için 4,3-4,5 adımları tekrarlayın. </li><li> Wells 7-14 gün veya 500 hücre (Şekil 1D) ortaya çıkmış büyük kümeleri sonra bölmek için hazır olacak. </li></ol> 5. Ufalama tarafından DGM&#39;lerin sonraki Genişleme ve Pasajlanması <ol><li> Geçit birinde Hücreleri 01:06 (her 7 gün) sonra aşağıdaki gibi ilk 3 pasajlar için 1:2 bölünmüş oranı ve ardından 01:04 14 gün sonra taze besleyiciler üzerine kadar pasajlandı edilmelidir. Yavaşça hücreler boyunca orta yıkama tarafından 1 ml pipet ile bir yarı-birleşik de kapalı koloniler (örn. ~ 300.000 DGM&#39;ler / iyi 6-plaka) çiğnemek. Koloniler ayırma görülebilir. Sıvı akışı ile çok fazla kuvvet istenmeyen besleyici hücreler çok çıkmasına sebep olacaktır. </li><li> Için 300 xg&#39;de konik bir tüp ve santrifüj tritüre hücreleri toplayın5 dk. Not: araştırmacı tarafından arzu edildiği takdirde, tripsinizasyonla adım burada güvenli bir şekilde ilave edilebilir. </li><li> Süpernatant aspire ve iyice koloniler bozmaya yukarı ve aşağı pipetleme taze kök hücre ortamda yeniden askıya. </li><li> Mitomisin-C ile inaktive taze hazırlanmış besleyici hücreler levhalar DGM&#39;ler gibi 1. bölümde anlatılan. </li><li> Hücreler haftada aşağıda üç kez besleyin. Birinci ve ikinci besleme için (örneğin, Pazartesi ve Çarşamba) taze orta hacimce% 50 ekleyin. Üçüncü besleme için (örneğin Cuma), tüm orta aspirat ve 2 ml taze ortam ile değiştirin. Tabaklar 7-10 gün içinde confluent olacak. Kültürler somatik hücreleri 10 germ hücreleri ayırt etmek için (örneğin fare germ hücre belirteci GCNA kullanarak) immünboyama esas 5-7 pasajlar sonra&gt;% 98 germ hücrelerinin (yani, &lt;% 1 kirlenmesine somatik hücre) oluşmalıdır. Not: Bu yöntemler Kurum tarafından belirlenen düzenlemeler ve gereksinimler ile uyum içinde geliştirilmiştirWeill Cornell Medical College arkadaşları Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi. </li></ol>

<ol>
	<li>Kanatsu-Shinohara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+proliferation+in+culture+and+germline+transmission+of+mouse+male+germline+stem+cells.">Long-term proliferation in culture and germline transmission of mouse male germline stem cells.</a> Biol. Reprod. 69, 612-616 (2003).</li><li>Seandel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+functional+multipotent+adult+stem+cells+from+GPR125++germline+progenitors.">Generation of functional multipotent adult stem cells from GPR125+ germline progenitors.</a> Nature. 449, 346-350 (2007).</li><li>Kim, J., Seandel, M., Falciatori, I., Wen, D., Rafii, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD34++testicular+stromal+cells+support+long-term+expansion+of+embryonic+and+adult+stem+and+progenitor+cells.">CD34+ testicular stromal cells support long-term expansion of embryonic and adult stem and progenitor cells.</a> Stem Cells. 26, 2516-2522 (2008).</li><li>Ogawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+and+morphological+characterization+of+mouse+spermatogonial+stem+cell+lines.">Derivation and morphological characterization of mouse spermatogonial stem cell lines.</a> Arch. Histol. Cytol. 67, 297-306 (2004).</li><li>Schmidt, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+and+in+vitro+aging+is+detrimental+to+mouse+spermatogonial+stem+cell+function.">In vivo and in vitro aging is detrimental to mouse spermatogonial stem cell function.</a> Biology of Reproduction. 84, 698-706 (2011).</li><li>Zhang, X., Ebata, K. T., Robaire, B., Nagano, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+of+male+germ+line+stem+cells+in+mice.">Aging of male germ line stem cells in mice.</a> Biology of Reproduction. 74, 119-124 (2006).</li><li>Hobbs, R. M., Seandel, M., Falciatori, I., Rafii, S., Pandolfi, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plzf+regulates+germline+progenitor+selfrenewal+by+opposing+mTORC1.">Plzf regulates germline progenitor selfrenewal by opposing mTORC1.</a> Cell. 142, 468-479 (2010).</li><li>Nagano, M., Ryu, B. Y., Brinster, C. J., Avarbock, M. R., Brinster, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+mouse+male+germ+line+stem+cells+in+vitro.">Maintenance of mouse male germ line stem cells in vitro.</a> Biol. Reprod. 68, 2207-2214 (2003).</li><li>Csaszar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+expansion+of+human+hematopoietic+stem+cells+by+automated+control+of+inhibitory+feedback+signaling.">Rapid expansion of human hematopoietic stem cells by automated control of inhibitory feedback signaling.</a> Cell Stem Cell. 10, 218-229 (2012).</li><li>Enders, G. C., May, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmentally+regulated+expression+of+a+mouse+germ+cell+nuclear+antigen+examined+from+embryonic+day+11+to+adult+in+male+and+female.">Developmentally regulated expression of a mouse germ cell nuclear antigen examined from embryonic day 11 to adult in male and female.</a> 163, 331-340 (1994).</li><li>Oatley, J. M., Brinster, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+spermatogonial+stem+cell+self-renewal+in+mammals.">Regulation of spermatogonial stem cell self-renewal in mammals.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 263-286 (2008).</li><li>Brinster, R. L., Zimmermann, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spermatogenesis+following+male+germ-cell+transplantation.">Spermatogenesis following male germ-cell transplantation.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 91, 11298-11302 (1994).</li><li>Tang, L., Rodriguez-Sosa, J. R., Dobrinski, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+Cell+Transplantation+and+Testis+Tissue+Xenografting+in+Mice.">Germ Cell Transplantation and Testis Tissue Xenografting in Mice.</a> J. Vis. Exp. (60), e3545 (2012).</li><li>Arnold, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox2(+)+adult+stem+and+progenitor+cells+are+important+for+tissue+regeneration+and+survival+of+mice.">Sox2(+) adult stem and progenitor cells are important for tissue regeneration and survival of mice.</a> Cell Stem Cell. 9, 317-329 (2011).</li><li>Yeh, J. R., Zhang, X., Nagano, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+short-term+in+vitro+assay+for+mouse+spermatogonial+stem+cells.">Establishment of a short-term in vitro assay for mouse spermatogonial stem cells.</a> Biology of Reproduction. 77, 897-904 (2007).</li></ol>

MS JK1 hücreleri dağıtmak Hücre Biolabs, Inc bir lisans ile Weill Cornell Tıp Koleji&#39;nden telif alır.

Erişkin testis kaynaklı besleyici hücreler kullanılarak erişkin DGM&#39;ler türetmek için bu yöntem sağlam ve ortak genetik kökenden (örneğin FVB, C57Bl6 ve karma 129SV/C57Bl/6) ve farklı mutant suşlar 2,3,7,14 istihdam edildiğinde başarmıştır. 7 Aslında, kültür sistemi tarafından oluşturulan in vivo mikroçevrede yetişkin DGM&#39;ler - (- / hayvan plzf durumunda olduğu gibi) sürdürülmesi için genetik duvarlar bazılarının üstes...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Malzeme Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Corning </td><td> 10-013 </td><td> Dissosiyasyon arabelleği için Seyreltici </td></tr><tr><td> Tripsin / EDTA </td><td> Mediatech </td><td> 25-051-CI </td><td></td></tr><tr><td> Kök hücre baz ortamı (StemPro-34) </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> 10639-011 </td><td> Shinohara ark başına takviyesi gerektirir. (2003) * </td></tr><tr><td> Hücre orta takviyeleri Kök </td><td> çeşitli </td><td> Tablo 3&#39;e bakınız </td><td> Shinohara ark başına takviyesi gerektirir. (2003) * </td></tr><tr><td> JK1 hücrelerin </td><td> Hücre Biolabs, Inc </td><td> CBA-315 </td><td> Başına Seandel ark erişkin testis stromal hücreleri ile ikame edebilir. (2007) </td></tr><tr><td> mitomisin-C (DİKKAT) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M4287 </td><td> Toksik; dikkatli olun. </td></tr><tr><td> Jelâtin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G1890 </td><td> Su içinde% 0.4 çözümü </td></tr><tr><td> EVOS xl dijital inverted mikroskop </td><td> Gelişmiş Mikroskopi Grubu </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tablo 1. Özel reaktifleri ve ekipmanları. * Çizelge 3&#39;e bakınız </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Corning </td><td> 10-013 </td><td> Dissosiyasyon arabelleği için Seyreltici </td></tr><tr><td> tripsin (1:250) </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> 27250-018 </td><td> Ayrılma tamponu: 0.05 Final% ağırlık / hacim </td></tr><tr><td> kollajenaz, 235 U / ml tip I </td><td> Worthington </td><td> CLS1 235 </td><td> Ayrılma tampon: Final% 0.03 ağırlık / hacim </td></tr><tr><td> DNAse I </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> DN25 </td><td> Ayrılma tampon: Final 80 U / ml </td></tr><tr><td> sığır serum albümin </td><td> ICP Bio </td><td> ABRE-100g </td><td> Ayrılma tampon: 0.5 Final% ağırlık / hacim </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tablo 2. Ayrışma tampon </td></tr><tr><td> StemPro-34 SFM </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> 10639-011 </td><td></td></tr><tr><td> StemPro-34 Besin takviyesi </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> 10639-011 </td><td></td></tr><tr><td> Ek takviyeleri ** </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Non-esansiyel amino asitler </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M7145 </td><td> 1X </td></tr><tr><td> MEM vitamini çözüm </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> 11120-052 </td><td> 1X </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Mediatech </td><td> 25-005 </td><td> 2 mM </td></tr><tr><td> sığır serum albümin </td><td> ICP Bio </td><td> ABRE </td><td> 0.50% </td></tr><tr><td> Antibiyotik-Antimikotik Çözümü </td><td> Mediatech </td><td> 30-004-CI </td><td> 1X </td></tr><tr><td> D (+) glikoz </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G8769 </td><td> 6 mg / ml &#39; </td></tr><tr><td> β-estradiol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E2758 </td><td> 30 ng / ml </td></tr><tr><td> progesteron </td><td> Calbiochem </td><td> 5341 </td><td> 60 ng / ml &#39; </td></tr><tr><td> fetal bovin serumu </td><td> değişken </td><td> n / a </td><td> % 1 </td></tr><tr><td> Sığır sanal-transferrin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T1283 </td><td> 100 ug / ml </td></tr><tr><td> ensülin </td><td> İkizler Bio-Ürünler </td><td> 700-112P </td><td> 25 ug / ml </td></tr><tr><td> İnsan GDNF </td><td> Yaşam Technologies </td><td> PHC7041 </td><td> 10 ng / ml &#39; </td></tr><tr><td> insan bFGF </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> PHG0023 </td><td> 10 ng / ml &#39; </td></tr><tr><td> fare EGF </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> PHG0313 </td><td> 20 ng / ml </td></tr><tr><td> putressin </td><td> Araştırma Organics </td><td> 0778P </td><td> 60 uM </td></tr><tr><td> sodyum selenit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S5261 </td><td> 30 nM </td></tr><tr><td> piruvik asit </td><td> Alfa Aesar </td><td> A13875 </td><td> 30 ug / ml </td></tr><tr><td> DL-laktik asit </td><td> JT Baker </td><td> 0196-04 </td><td> 1 ug / ml </td></tr><tr><td> β-merkaptoetanol </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> 21985-023 </td><td> 50 uM </td></tr><tr><td> askorbik asit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A4544 </td><td> 100 uM </td></tr><tr> &lt;td&gt; D-biotin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B4639 </td><td> 10 ug / ml </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tablo 3. Hücre orta Kök </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> * Not: orta kullanmadan önce aşağıdaki takviyeleri ekleyin. Filter 4 ° C&#39;de sterilize etmek ve tutmak Ortam, en az 2 hafta boyunca stabildir. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> ** Biz görünürde herhangi bir zararlı etki olmaksızın farklı üreticilerin, formülasyonları ve / veya bu reaktiflerin lot numaraları istihdam var. Genel olarak, hücre kültürü sınıf reaktifler kullanılmalıdır. </td></tr></tbody></table>

serial enrichment of spermatogonial stem and progenitor cells (sscs) in culture for derivation of long-term adult mouse ssc lines

Spermatogonial sapı ve testis progenitör hücreler (DGM&#39;ler) yetişkin memeli kök hücreler klasik bir örneği temsil ve hayvanın neredeyse ömür boyu fertilite. In vivo kendini yenileme ve farklılaşma yöneten kesin mekanizmalar çalışmaya zor olsa da, çeşitli sistemler özel kültür ortamı ve 1-3 besleyici hücreler bir arada kullanarak in vitro fare DGM&#39;ler yaymak için önce geliştirilmiştir. DGM&#39;lerin biyoloji içine vitro baskınlarınızda Çoğu yetişkin hücre hatları 4 temininde zorluk nedeniyle muhtemelen yenidoğanlarda, hücre hatları elde var. Ancak testis Birçok fare suşları yaş ~ 5 haftaya kadar olgun devam. Erken post-natal dönemde, dramatik değişiklikler testisin mimarisi ve somatik ve çok sayıda kök hücre ile ilgili ifade düzeylerinde değişikliklere dahil spermatojenik hücrelerde, hem de biyoloji meydanagenler. Bu nedenle, neonatally-türetilmiş SSC hatları tamamen erişkin testis kararlı bir duruma ulaşmıştır sonrasında da devam eden yetişkin DGM&#39;lerin biyoloji recapitulate olmayabilir. Çeşitli faktörler tarihsel yetişkin SSC hatlarının üretim engellemiştir. Birincisi, fonksiyonel kök hücrelerinin oranını intrinsik veya ekstrinsik faktörler 5,6 nedeniyle ya, yetişkinlik döneminde azalabilir. Ayrıca, diğer yetişkin kök hücreler gibi, bu immunoselection veya diğer sıralama stratejileri 7 bir arada kullanarak olmadan toplam erişkin testis hücreleri yeterince DGM&#39;ler zenginleştirmek için zor olmuştur. Yaygın olarak kullanılan stratejilere diğer hücre tipleri 8 için kök hücreleri, daha yüksek bir oranı nedeniyle donör hücrelerinin kaynağı olarak krip farelerin kullanımını içerir. İlk kültürden somatik hücre çıkarılması SSC hayatta kalmak için gerekli olan kök hücre niş ile etkileşimleri bozan hipotezini dayanarak, daha önce yetişkin l türetmek için yöntemler geliştirdiimmunoselection veya inmemiş bağış gerektiren ziyade kültür DGM&#39;lerin seri zenginleştirme istihdam yok ines, SESC 2,3 olarak bundan anılacaktır. Aşağıda açıklanan yöntem testiküler stromal hücre hattı (JK1) 3 oluşan besleyiciler üzerinde hücrelerin kaplama ardından yetişkin donör seminifer tübüller, dissociating erişkin SSC hatları türetmek için basit bir prosedür gerektirir. Seri Through olmayan germ hücreleri kirlenmesine, güçlü savunucusu pasajlanmasını DGM&#39;lerin beraberinde zenginleştirme ile kültürden tüketilmiştir. Bu şekilde üretilen Kültürler uzun süreli kendini yenileme kabiliyeti esas DGM&#39;lerden ihtiva eden çeşitli evrelerinde de spermatogonia bir karışımını içerir. SESC yöntemin en önemli noktası, bir kökten farklı mikroçevresindeki vitro uzun vadeli kendini yenileme in vivo kendini yenileme gelen zor geçiş yapmak için DGM&#39;ler sağlıyor olması, kirletici ücretsiz, uzun vadeli SSC çizgiler üretirsomatik hücre, ve böylece DGM&#39;lerin sonraki deneysel işleme sağlar.

Geçit sıfır vahşi tip görünümü, 7 gün sonra yetişkin SSC koloniler Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Üç-boyutlu koloniler üzerine artan DGM&#39;lerin çoklu katmanlar ile besleyiciler tarafından tevdi besleyiciler veya ast ekstraselüler matriks bağlanmış düz bir hücre tabakası oluşmaktadır. Sağlıklı DGM&#39;ler parlak refraktil ve tekdüze 11-12 mikron çaplı olmasına karşın, hücre kenarlıkları ayırt etmek zordur ve sömürgelerin büyüklüğü de içinde ve farklı f...

Watch this Scientific Journal Video about Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines at JoVE.com

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Erişkin farelerin spermatogoniumların ve progenitör hücre hatları türetmek ve korumak için basit bir yöntem sunulmuştur. Yöntemi yetişkin fare testis somatik hücre bölmesi kaynaklanan besleyici hücreler kullanır. Bu teknik transgenik, knock-out dahil, ortak fare suşları, uygulanabilir ve knock-fareler.

Uzun vadeli Yetişkin Fare SSC Hatları türetilmesi için Kültür Spermatogonial Kök ve progenitör hücrelerin Seri Zenginleştirme (DGM)

Spermatogonial stem and progenitor cells (SSCs) of the testis represent a classic example of adult mammalian stem cells and preserve fertility for nearly ...

serial-enrichment-spermatogonial-stem-progenitor-cells-sscs-culture

Research

JoVE Journal

Biology

Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells (SSCs) in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

13.7K Görüntüleme.  Weill Cornell Medical College. Erişkin farelerin spermatogoniumların ve progenitör hücre hatları türetmek ve korumak için basit bir yöntem sunulmuştur. Yöntemi yetişkin fare testis somatik hücre bölmesi kaynaklanan besleyici hücreler kullanır. Bu teknik transgenik, knock-out dahil, ortak fare suşları, uygulanabilir ve knock-fareler.

Video: Serial Enrichment of Spermatogonial Stem and Progenitor Cells SSCs in Culture for Derivation of Long-term Adult Mouse SSC Lines

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are derived from the blastocyst of the early embryo and are pluripotent in differentiative ability.  Their vast differentiative potential has made them the focus of much research centered on deducing how to coax them to generate clinically useful cell types.  The successful derivation of hematopoietic stem cells (HSC) from mouse ESC has recently been accomplished and can be visualized in this video protocol.  HSC, arguably the most clinically exploited cell population, are used to treat a myriad of hematopoietic malignancies and disorders.  However, many patients that might benefit from HSC therapy lack access to suitable donors.  ESC could provide an alternative source of HSC for these patients.  The following protocol establishes a baseline from which ESC-HSC can be studied and inform efforts to isolate HSC from human ESC.  In this protocol, ESC are differentiated as embryoid bodies (EBs) for 6 days in commercially available serum pre-screened for optimal hematopoietic differentiation.  EBs are then dissociated and infected with retroviral HoxB4.  Infected EB-derived cells are plated on OP9 stroma, a bone marrow stromal cell line derived from the calvaria of  M-CSF-/- mice, and co-cultured in the presence of hematopoiesis promoting cytokines for ten days.  During this co-culture, the infected cells expand greatly, resulting in the generation a heterogeneous pool of 100s of millions of cells.  These cells can then be used to rescue and reconstitute lethally irradiated mice.

This protocol details the derivation of transplantable hematopoietic stem cells from mouse embryonic stem cells (ESC) and their subsequent injection into lethally irradiated recipient mice. Briefly, ESC are differentiated as embryoid bodies, which are then infected with retroviral HoxB4 and co-cultured with OP9 stromal cells and hematopoietic cytokines.

Murin Embriyonik Kök Hücre Hematopoetik Kök Hücre türetilmesi

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Biyoloji

Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells

This paper introduces a novel recovery strategy for endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) from heparinized but otherwise unmanipulated adult human peripheral blood within a mean of 12 days. After large scale expansion &gt;1x108 ECFCs can be obtained for further tests. Advantageously by using pHPL the contact of human cells with bovine serum antigens can be excluded. By flow cytometry and immunohistochemistry the isolated cells can be characterized as ECFC and their in vitro functionality to form vascular like structures can be tested in a matrigel assay. Further these cells can be subcutaneously injected in a mouse model to form functional, perfused vessels in vivo. After long term expansion and cryopreservation proliferation, function and genomic stability appear to be preserved. 3,4
This animal-protein free isolation and expansion method is easily applicable to generate a large quantity of ECFCs.

Endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) are a promising tool to study vascular homeostasis and repair.1,2 This paper introduces a novel animal-serum free method for isolation and expansion of ECFC from heparinised adult human peripheral blood with pooled human platelet lysate (pHPL) diminishing the risk of anti-bovine immunisation.

İzolasyon ve Büyük Ölçekli Genişleme Yetişkin İnsan Endotel Koloni Oluşturan Progenitör Hücreler

This paper introduces a novel recovery strategy for endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) from heparinized but otherwise unmanipulated adult ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental stages is a perfect model to address our hypothesis about cancer and infertility. This protocol shows how to isolate primordial germinal cells from developing gonads in 10.5-11.5 days post coitum (dpc) mouse embryos.  Developing gonadal ridges from mouse embryos (C57BL6J) were dissociated by mechanical disruption with collagenase, then plated in a mouse embryo fibroblast feeder layer (MEF-CF1) that was previously mitotically inactivated with mitomycin C in the presence of knockout media and supplemented with Leukemia Inhibitor Factor (LIF), basic Fibroblast Growth Factor (bFGF), and Stem Cell Factor (SCF).  Using these optimized methods for PCG identification, isolation, and establishment of culture conditions permits long term cultures of EG cells for more than 40 days.  The embryonic germinal cell lines showed embryonic phenotype and expression of common used markers of the pluripotent state.  Isolation and derivation of germinal cells in culture provide a tool to understand their development in vitro and offer the opportunity to monitor cumulative damage at genetic and epigenetic levels after exposure to oxidative stress.

The ability of embryonic germinal cells to differentiate into primordial germinal cells during early development stages is a perfect model to address our hypothesis about cancer and infertility. This protocol shows how to isolate primordial germinal cells from developing gonads in 10.5-11.5 days post coitum mouse embryos.

Fare Embriyonik Germinal Hücreleri İzolasyon ve türetilmesi

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the trophectoderm mediates implantation and generates the fetal part of the placenta. As a result, the development of this lineage is essential for embryo survival. Derivation of trophoblast stem (TS) cells from mouse blastocysts was first described by Tanaka et al. 1998. The ability of TS cells to preserve the trophoblast specific property and their expression of stage- and cell type-specific markers after proper stimulation provides a valuable model system to investigate trophoblast lineage development whereby recapitulating early placentation events. Furthermore, trophoblast cells are one of the few somatic cell types undergoing natural genome amplification. Although the molecular pathways underlying trophoblast polyploidization have begun to unravel, the physiological role and advantage of trophoblast genome amplification remains largely elusive. The development of diploid stem cells into polyploid trophoblast cells in culture makes this ex vivo system an excellent tool for elucidating the regulatory mechanism of genome replication and instability in health and disease. Here we describe a protocol based on previous reports with modification published in Chiu et al. 2008.

In this video, we demonstrate the isolation of mouse blastocysts and the derivation of trophoblast stem cells from blastocysts. We also describe conditions for maintenance of the stem cell property as well as induction of differentiation in culture.

Blastosist Fare trofoblast Kök Hücre türetilmesi

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate daughter cells that retain the stem cell phenotype and transit-amplifying cells (TA cells) that migrate from the stem cell niche, undergo rapid proliferation and terminally differentiate to repopulate the tissue.
Epithelial stem cells have been identified in the epidermis, hair follicle, and intestine as cells with a high in vitro proliferative potential and as slow-cycling label-retaining cells in vivo 1-3. Adult, tissue-specific stem cells are responsible for the regeneration of the tissues in which they reside during normal physiologic turnover as well as during times of stress 4-5. Moreover, stem cells are generally considered to be multi-potent, possessing the capacity to give rise to multiple cell types within the tissue 6. For example, rodent hair follicle stem cells can generate epidermis, sebaceous glands, and hair follicles 7-9. We have shown that stem cells from the human hair follicle bulge region exhibit multi-potentiality 10.
Stem cells have become a valuable tool in biomedical research, due to their utility as an in vitro system for studying developmental biology, differentiation, tumorigenesis and for their possible therapeutic utility. It is likely that adult epithelial stem cells will be useful in the treatment of diseases such as ectodermal dysplasias, monilethrix, Netherton syndrome, Menkes disease, hereditary epidermolysis bullosa and alopecias 11-13. Additionally, other skin problems such as burn wounds, chronic wounds and ulcers will benefit from stem cell related therapies 14,15. Given the potential for reprogramming of adult cells into a pluripotent state (iPS cells)16,17, the readily accessible and expandable adult stem cells in human skin may provide a valuable source of cells for induction and downstream therapy for a wide range of disease including diabetes and Parkinson's disease.

A rapid, robust way of isolating viable adult epithelial stem cells from human skin is described. The method utilizes enzymatic digestion of skin collagen matrix , followed by plucking of hair follicles and isolation of single cell suspensions or tissue fragments for cell culture.

İnsan Cilt Yetişkin Epitel Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish water and sediment. The choice of biological indicators must be based on reliable scientific knowledge and, possibly, on the availability of standardized procedures. In this article, we present a standardized protocol that used the marine crustacean Artemia to evaluate the toxicity of chemicals and/or of marine environmental matrices. Scientists propose that the brine shrimp (Artemia) is a suitable candidate for the development of a standard bioassay for worldwide utilization. A number of papers have been published on the toxic effects of various chemicals and toxicants on brine shrimp (Artemia). The major advantage of this crustacean for toxicity studies is the overall availability of the dry cysts; these can be immediately used in testing and difficult cultivation is not demanded1,2. Cyst-based toxicity assays are cheap, continuously available, simple and reliable and are thus an important answer to routine needs of toxicity screening, for industrial monitoring requirements or for regulatory purposes3. The proposed method involves the mortality as an endpoint. The numbers of survivors were counted and percentage of deaths were calculated. Larvae were considered dead if they did not exhibit any internal or external movement during several seconds of observation4. This procedure was standardized testing a reference substance (Sodium Dodecyl Sulfate); some results are reported in this work. This article accompanies a video that describes the performance of procedural toxicity testing, showing all the steps related to the protocol.

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

This study concerns the development and standardization of a valuable methodological protocol to determine long-term (14 days) lethal toxicity exerted by chemical substances, industrial wastewater or sewage and liquid environmental samples on the saltwater crustacean, Artemia franciscana.

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Muscle regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite cells. Satellite cells are defined by their position between the basal lamina and the sarcolemma of each myofiber. Current knowledge of their behavior heavily relies on the use of the single myofiber isolation protocol. In 1985, Bischoff described a protocol to isolate single live fibers from the Flexor Digitorum Brevis (FDB) of adult rats with the goal to create an in vitro system in which the physical association between the myofiber and its stem cells is preserved 1. In 1995, Rosenblattmodified the Bischoff protocol such that myofibers are singly picked and handled separately after collagenase digestion instead of being isolated by gravity sedimentation 2, 3. The Rosenblatt or Bischoff protocol has since been adapted to different muscles, age or conditions 3-6. The single myofiber isolation technique is an indispensable tool due its unique advantages. First, in the single myofiber protocol, satellite cells are maintained beneath the basal lamina. This is a unique feature of the protocol as other techniques such as Fluorescence Activated Cell Sorting require chemical and mechanical tissue dissociation 7. Although the myofiber culture system cannot substitute for in vivo studies, it does offer an excellent platform to address relevant biological properties of muscle stem cells. Single myofibers can be cultured in standard plating conditions or in floating conditions. Satellite cells on floating myofibers are subjected to virtually no other influence than the myofiber environment. Substrate stiffness and coating have been shown to influence satellite cells' ability to regenerate muscles 8, 9 so being able to control each of these factors independently allows discrimination between niche-dependent and -independent responses. Different concentrations of serum have also been shown to have an effect on the transition from quiescence to activation. To preserve the quiescence state of its associated satellite cells, fibers should be kept in low serum medium 1-3. This is particularly useful when studying genes involved in the quiescence state. In serum rich medium, satellite cells quickly activate, proliferate, migrate and differentiate, thus mimicking the in vivo regenerative process 1-3. The system can be used to perform a variety of assays such as the testing of chemical inhibitors; ectopic expression of genes by virus delivery; oligonucleotide based gene knock-down or live imaging. This video article describes the protocol currently used in our laboratory to isolate single myofibers from the Extensor Digitorum Longus (EDL) muscle of adult mice (6-8 weeks old).

Isolation and culture of myofibers is the gold standard in vitro system to study the transition of satellite cells through quiescence, activation and differentiation. Importantly, the single myofiber culture system preserves the myofiber/stem cell association, which is an essential component of the muscle stem cell niche.

Yetişkin İskelet Kası gelen bireysel Myofibers ve Uydu Hücre İzolasyonu ve Kültür

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse incisor provides a model for these processes. This remarkable organ grows continuously throughout the animal&#39;s life and generates all the necessary cell types from active pools of adult stem cells housed in the labial (toward the lip) and lingual (toward the tongue) cervical loop (CL) regions. Only the dental stem cells from the labial CL give rise to ameloblasts that generate enamel, the outer covering of teeth, on the labial surface. This asymmetric enamel formation allows abrasion at the incisor tip, and progenitors and stem cells in the proximal incisor ensure that the dental tissues are constantly replenished. The ability to isolate and grow these progenitor or stem cells in vitro allows their expansion and opens doors to numerous experiments not achievable in vivo, such as high throughput testing of potential stem cell regulatory factors. Here, we describe and demonstrate a reliable and consistent method to culture cells from the labial CL of the mouse incisor.

The continuously growing mouse incisor provides a model for studying renewal of dental tissues from dental epithelial stem cells (DESCs). A robust system for consistently and reliably obtaining these cells from the incisor and expanding them in vitro is reported here.

Yetişkin Fare insizör Diş Epitel Kök Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) maintain the turnover of all mature blood cell lineages. The coordination of the complex signals leading to specific HSC fates relies upon the interaction between HSCs and the intricate bone marrow microenvironment, which is still poorly understood[1-2].
We describe how by combining a newly developed specimen holder for stable animal positioning with multi-step confocal and two-photon in vivo imaging techniques, it is possible to obtain high-resolution 3D stacks containing HSPCs and their surrounding niches and to monitor them over time through multi-point time-lapse imaging. High definition imaging allows detecting ex vivo labeled hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) residing within the bone marrow. Moreover, multi-point time-lapse 3D imaging, obtained with faster acquisition settings, provides accurate information about HSPC movement and the reciprocal interactions between HSPCs and stroma cells.
Tracking of HSPCs in relation to GFP positive osteoblastic cells is shown as an exemplary application of this method. This technique can be utilized to track any appropriately labeled hematopoietic or stromal cell of interest within the mouse calvarium bone marrow space.

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

The nature of the interactions between hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) and bone marrow niches is poorly understood. Custom hardware modifications and a multi-step acquisition protocol allow the use of two-photon and confocal microscopy to image ex vivo labeled HSPCs homed within bone marrow areas, tracking interactions and movement.

Yetişkin Fare Kalvaryal Kemik İliği içinde Hematopoietik kök hücrelerin Vivo 4-Boyutlu Takip

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Osteoclast Derivation from Mouse Bone Marrow

Osteoclasts are highly specialized cells that are derived from the monocyte/macrophage lineage of the bone marrow. Their unique ability to resorb both the organic and inorganic matrices of bone means that they play a key role in regulating skeletal remodeling. Together, osteoblasts and osteoclasts are responsible for the dynamic coupling process that involves both bone resorption and bone formation acting together to maintain the normal skeleton during health and disease.
As the principal bone-resorbing cell in the body, changes in osteoclast differentiation or function can result in profound effects in the body. Diseases associated with altered osteoclast function can range in severity from lethal neonatal disease due to failure to form a marrow space for hematopoiesis, to more commonly observed pathologies such as osteoporosis, in which excessive osteoclastic bone resorption predisposes to fracture formation.
An ability to isolate osteoclasts in high numbers in vitro has allowed for significant advances in the understanding of the bone remodeling cycle and has paved the way for the discovery of novel therapeutic strategies that combat these diseases. 
Here, we describe a protocol to isolate and cultivate osteoclasts from mouse bone marrow that will yield large numbers of osteoclasts.

Osteoclasts are the principal bone-resorbing cell in the body. An ability to isolate osteoclasts in large numbers has resulted in significant advances in the understanding of osteoclast biology. In this protocol, we describe a method for isolation, cultivating and quantifying osteoclast activity in vitro.

Fare Kemik İliği osteoklast türetilmesi

Osteoclasts are highly specialized cells that are derived from the monocyte/macrophage lineage of the bone marrow. Their unique ability to resorb both the ...