The authors thank Mona Chambers, Geoffrey Hidalgo and Maurissa Two Two for their technical assistance. We also thank Dr. Earl White for amino acid analysis, Dr. Roger Simonds for analysis of pollen for pesticides, and Drs. Stanley S. Schneider, Vanessa Corby-Harris and Kirk Anderson for their reviews and discussion of earlier versions of the manuscript and many helpful suggestions.

1. AHB ve EHB Kolonileri gelen beebread Alınması <ol><li> Bal arısı kolonilerinin üzerinde polen tuzakları yerleştirin ve polen toplamak. Bir kahve değirmeni kullanarak (anterlerden döken polen benzer) ince bir toz haline polen öğütün. </li><li> Arılar sadece verilen polen üzerinde yem böylece kapalı bir uçuş alanı (EFA) 5 koloni AHB ve EHB her kurulması. Arılar aralarında geçemez böylece EHB ve AHB koloniler arasında sürüklenen işçi önlemek için, ayrı bölüme EFA bölmek. 3,500-4,000 işçi arıların, EFA her bölümde nektar, bal, olgunlaşmamış kuluçka ve boş tarak ile balmumu tarak bireysel EHB veya AHB kolonileri yerleştirin. NOT: Kurulan zaman koloniler polen depolanmış yok. polen depolanır oranı koloniler bir döşeme kraliçe içermeyen artırılabilir. </li><li> EFA her bölümünde polen ile bir tepsi koyarak koloniler zemin polen besleyin. O foragin böylece her tepsi üzerinde polen yaklaşık 60 g Yayılmag arı o kadar corbicular yükleri toplamak ve beebread olarak kolonilerinde polen saklayabilirsiniz. 3 hafta boyunca her gün, her tepsi üzerinde taze polen sunmaya devam. </li><li> Avrupa beebread (EBB) olarak, ve Africanized beebread (ABB) olarak Africanized kolonilerin Avrupa kolonilerden beebread bakın. </li></ol> Kafeslerde 2. Beslenme Arılar <ol><li> Bir çevre odasında ayrı çıkması kafeslerde AHB ve EHB kolonilerden kapalı işçi damızlık Yeri çerçeveleri 32-34 ° C ve% 40 bağıl nemde set .. </li><li> İşçiler ortaya ve yaklaşık 24 saat eski olduğunda, 12 pleksiglas biyoanaliz kafesleri (boyutları = 11,5 x 7,5 x 16,5 cm 3) kurmak ve 100 yeni ortaya çıkan EHB veya her kafese 100 yeni ortaya çıkan AHB işçi arılar ya ekleyin. AHB beslenen ABB, EHB beslenen ABB, AHB beslenen EBB ve EHB beslenen EBB: Aşağıdaki tedavi kombinasyonları oluşturmak için her kafeste EBB veya ABB ya hücrelerin bilinen bir sayı (kafes başına 24-30 hücre) ile tarak bir bölümünü yerleştirin. (4 tedaviler, 6Tedavi başına kafesleri; Toplam 24 kafesler). </li><li> Her bir kafes hacimce formüle su şişeleri ve% 50 bal ve su solüsyonu ekleyin. 11 günlük bir çalışma dönemi için günlük bal ve su şişeleri tekrar doldurun. </li></ol> 3. Örnekleme İşçi Arılar ve beebread ve tahmin Tüketim <ol><li> Örnek 10 yeni önceki kafeslerde onları yerleştirerek EHB ve AHB işçileri ortaya çıktı. Gün 0 arılar gibi bunlara bakın ve onları hemolimf protein konsantrasyonları için temel olarak hizmet var. </li><li> Onlar 4, 7, ve 11 gün boyunca EBB veya ABB beslenen sonra her kafesten 10 arıları çıkarın. </li><li> Bireysel mikrosantrifüj tüpler canlı arılar koyun ve buz paketleri üzerinde ayarlayın. Hemolimf protein konsantrasyonu analizi için dört arı bir alt-numûnesinin seçin. </li><li> Gün-11 arılar örnekleme sonra, hala beebread ihtiva tarak hücrelerinin sayısını. Bu beebread tüketiminin bir nispi ölçüdür. </li><li> Her bir kafes içinde hücrelerden geri kalan beebread çıkarın ve Separ saklamakkafese göre mikrosantrifüj tüpleri yedi. PH, çözünür protein konsantrasyonu ve amino asit içeriği için analiz edilene kadar -80 ° C&#39;de beebread örnekleri tutun. </li></ol> 4. Polen ve beebread pH tahmin <ol><li> EFA arıların beslenen polen altı rastgele 0.3 g numune alın ve damıtılmış su, 300 ul içinde çözülür. 0,01 hassasiyetle bir su geçirmez çift kavşak pH mızrak kullanarak pH&#39;ı ölçün. </li><li> Her bir kafeste 11 günlük besleme döneminden sonra kalan beebread 0.3 g örneği alın. Polen (4.1) için tarif edildiği gibi saf su ve ölçü pH 300 ul beebread çözülür. </li></ol> 5. Protein Analizi <ol><li> Altı polen örnekleri ve her kafes EBB ve ABB bir örnek almak. -20 ° C&#39;de saklayın örnekleri çözünür protein konsantrasyonu açısından analiz edilene kadar. </li><li> 0.1 M fosfat tampon çözeltisi (PBS) 1000 ul polen ya da beebread ya 20 mg karıştırın. </li><li> Vo1 dakika boyunca 571,2 x g&#39;de 10 saniye ve santrifüj Karışımı rtex. </li><li> 96 gözlü düz tabanlı EIA / RIA polistiren bir levhanın gözleri içine yüzer tabakanın ve yerine bir 10 ul numune çıkarılmaktadır. Üç kuyu her örnek çoğaltın. </li><li> (Isıtıldı ve bir iğne sivri çekilmiş olan) kanatlı eklenme noktasının yakınında göğüs sağ yan kısmına, bir 20 ul kılcal tüp ekleyerek, herbir kafes toplanan arılar hemolimf çizin. Karın tergites arasındaki zarı içine aynı tüp takarak, gerekirse ek hemolimf toplayın. </li><li> 0.1 M PBS 9 ul hemolimf 1 ul ekle. Çözünür protein için analiz edilene kadar -20 ° C&#39;de hemolimf çözeltisi saklayın. </li><li> Ticari bir Bradford protein deneyi kiti kullanılarak toplam polen, beebread çözünür protein konsantrasyonlarını ve hemolimf örnekleri belirler. Üreticinin talimatlarını izleyin. </li><li> Çözünür protein c tahmin etmek bir standart eğri kurmakoncentration büyükbaş hayvan serum albumin (BSA) içinde bilinen bir protein konsantrasyonları, protein absorbans ölçülerek örneklerinde. Bir spektrofotometre kullanılarak 595 nm&#39;de protein absorbansı ölçülür. </li></ol> 6. Amino Asit Analizi <ol><li> Her koloninin tarak hücrelerinden Havuz bireysel analiz için numuneler EBB ve ABB temsilcisi örnek oluşturmak için. </li><li> 50 mg polen al ya beebread örnek örnekleme şişelerine konuldu ve d 4-alanin oluşan 50 ng / ml iç standart solüsyonu, 100 ul ile birlikte şişeye damıtılmış su, 1 ml ilave d 23 -lauric asit, 13 ° C 6 -glükoz d 39 -arachidiac asit elde edildi. </li><li> 5 dakika boyunca numune ve sonikasyon Cap. </li><li> Metanol, 1 ml ilave etmek suretiyle bir HLB KARTUŞU, beebread ve polen numune, 1 ml ilave edilir, damıtılmış suyun 1 mL eklenerek dengelenir. % 5.0 MeOH / H2O ve ELU 1 ml kartuş yıkayın% 80 MeOH / H2O 1 ml te </li><li> Bir azot akımı altında kuruyana kadar örnek buharlaştırın. Piridin ve 50 ul ve N, O-Bis (trimetilsilil) trifloroasetamid + Trimetilklorosilan (BSTFA + TMCS), 100 ul ile yeniden oluşturun. </li><li> Kapak 30 dakika süreyle 70 ° C&#39;de inkübe edilir ve örnek. </li><li> Örnek soğutmak ve temiz bir otomatik numune şişesine aktarmak için izin verin. </li><li> Bir Kütle Seçici Dedektör içine Cap ve numuneyi uçucu bileşikler ve organik asitler hem örnekleri analiz etmek için bir gaz kromatografa arabirim. BSTFA + TMCS 1.0 um film kalınlığı olan bir sütun (30 x 0.25 mm iç çap) kullanılarak TMS türetme aşağıdaki şeker ve organik asitler ayırın. </li><li> 2 dakika boyunca 50 ° C&#39;de sütun fırın ayarlayın, sonra 5 ° C / dakika ile 290 ° C&#39;ye kadar doğrusal olarak sıcaklık artışı. ve 7 dakika tutun. Sırasıyla, 250 ° C ve 290 ° C GC enjektörü ve GC / MS arayüzü ayarlayın. <ol><li> Bir flo bir taşıyıcı olarak Helyum kullanın1.0 ml / dak ağırlık oranı. 230 ° C MS kaynak sıcaklığını ayarlayın. </li></ol></li><li> Ayarlama ve perflorotirbütilamin (PptBA) günlük kütle spektrometresi kalibre. Varlığı ile ilgili veri ve amino asit konsantrasyonlarının elde edilmesi için tam tarama (35-700 amu) pozitif iyon modunda PptBA bir 1 ul enjeksiyon kullanın. </li></ol>

<ol>
	<li>Brodschneider, R., Crailsheim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutrition+and+health+in+honey+bees.">Nutrition and health in honey bees.</a> Apidologie. 41 (3), 278-294 (2010).</li><li>Spivak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relative+success+of+Africanized+and+European+honey-bees+over+a+range+of+life-zones+in+Costa+Rica.">The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica.</a> J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).</li><li>Schneider, S. S., McNally, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+foraging+patterns+and+colony+energy+status+in+the+African+honey+bee+Apis+mellifera+scutellata.">Spatial foraging patterns and colony energy status in the African honey bee Apis mellifera scutellata.</a> J. Insect Behav. 6 (2), 195-210 (1993).</li><li>Becerra-Guzman, F., Guzman-Novoa, E., Correa-Benitez, A., Zozaya-Rubio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Length+of+life,+age+at+first+foraging+and+foraging+life+of+Africanized+and+European+honey+bee+(Apis+mellifera)+workers,+during+conditions+of+resource+abundance.">Length of life, age at first foraging and foraging life of Africanized and European honey bee (Apis mellifera) workers, during conditions of resource abundance.</a> J. Api. Res. 44 (4), 151-156 (2005).</li><li>Saltykova, E. S., Lvov, A. V., Ben&#8217;kovskaya, G. V., Poskryakov, A. V., Nikolenko, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interracial+differences+in+expression+of+genes+of+antibacterial+peptides,+Abaecin,+Hymenoptaecin,+and+Defensin,+in+bees+Apis+mellifera+mellifera+and+Apis+mellifera+caucasica.">Interracial differences in expression of genes of antibacterial peptides, Abaecin, Hymenoptaecin, and Defensin, in bees Apis mellifera mellifera and Apis mellifera caucasica.</a> J. Evol. Biochem. Phys. 41 (5), 506-510 (2005).</li><li>Decanini, L. I., Collins, A. M., Evans, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+and+heritability+in+immune+gene+expression+by+diseased+honeybees.">Variation and heritability in immune gene expression by diseased honeybees.</a> J. Hered. 98 (3), 195-201 (2007).</li><li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiology+of+pollen+and+beebread:+the+genus+Bacillus.">Microbiology of pollen and beebread: the genus Bacillus.</a> Apidologie. 10 (3), 269-274 (1979).</li><li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiology+of+pollen+and+beebread:+the+yeasts.">Microbiology of pollen and beebread: the yeasts.</a> Apidologie. 10 (3), 43-53 (1979).</li><li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+roles+of+non-pathogenic+microflora+associated+with+honey+bees.">Identification and roles of non-pathogenic microflora associated with honey bees.</a> FEMS Microbiology Letters. 155 (1), 1-10 (1997).</li><li>Loper, G. M., Standifer, L. N., Thompson, M. J., Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+and+microbiology+of+bee-collected+almond+(Prunus+dulcis)+pollen+and+beebread.+I.+Fatty+acids,+sterols,+vitamins,+and+minerals.">Biochemistry and microbiology of bee-collected almond (Prunus dulcis) pollen and beebread. I. Fatty acids, sterols, vitamins, and minerals.</a> Apidologie. 11 (1), 63-73 (1980).</li><li>Khachatryan, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+role+of+host+genetics+in+controlling+the+composition+of+gut+microbiota.">Predominant role of host genetics in controlling the composition of gut microbiota.</a> PLoS ONE. 3 (8), e3064 (2008).</li><li>Turnbaugh, P. J., Ley, R. E., Mahowald, M. A., Magrini, V., Mardis, E. R., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+obesity+associated+gut+microbiome+with+increased+capacity+for+energy+harvest.">An obesity associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest.</a> Nature. 444 (7122), 1027-1031 (2006).</li><li>Ley, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+alters+gut+microbial+ecology.">Obesity alters gut microbial ecology.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 102 (31), 11070-11075 (2005).</li><li>Ley, R. E., Peterson, D. A., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecological+and+evolutionary+forces+shaping+microbial+diversity+in+the+human+intestine.">Ecological and evolutionary forces shaping microbial diversity in the human intestine.</a> Cell. 124 (4), 837-848 (2006).</li><li>Standifer, L. N., McCaughey, W. F., Dixon, S. E., Gilliam, M., Loper, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+and+microbiology+of+pollen+collected+by+honey+bees+(Apis+mellifera+L.)+from+almond,+Prunisdulcis.+II.+Protein,+amino+acids+and+enzymes.">Biochemistry and microbiology of pollen collected by honey bees (Apis mellifera L.) from almond, Prunisdulcis. II. Protein, amino acids and enzymes.</a> Apidologie. 11 (2), 163-171 (1980).</li><li>Human, H., Nicolson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+content+of+fresh,+bee-collected+and+stored+pollen+of+Aloe+greatheadii+var+davyana+(Asphodelaceae).">Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae).</a> Phytochem. 67 (14), 1486-1492 (2006).</li><li>Schneider, S. S., DeGrandi-Hoffman, G., Smith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+African+honeybee:+Factors+contributing+to+a+successful+biological+invasion.">The African honeybee: Factors contributing to a successful biological invasion.</a> Ann. Rev. Entomol. 49, 351-376 (2004).</li><li>Winston, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+and+management+of+Africanized+honey+bees.">The biology and management of Africanized honey bees.</a> Annu. Rev. Entomol. 37, 173-193 (1992).</li><li>Woyke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brood-rearing+ef&#64257;ciency+and+absconding+in+Indian+honeybees.">Brood-rearing ef&#64257;ciency and absconding in Indian honeybees.</a> J. Apic. Res. 15 (3/4), 133-143 (1976).</li><li>Woyke, J., Fletcher, D. J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brood+rearing+and+absconding+of+tropical+honey+bees.">Brood rearing and absconding of tropical honey bees.</a> African Bees. , 96-102 (1977).</li><li>Winston, M. L., Otis, G. W., Taylor, O. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absconding+behavior+of+the+Africanized+honey+bee+in.">Absconding behavior of the Africanized honey bee in.</a> South America. J. Api. Res. 18 (2), 85-94 (1979).</li><li>Schneider, S. S., McNally, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+in&#64258;uencing+seasonal+absconding+in+colonies+of+the+African+honey+bee,+Apis+mellifera+scutellata.">Factors in&#64258;uencing seasonal absconding in colonies of the African honey bee, Apis mellifera scutellata.</a> Insectes Soc. 39 (4), 402-423 (1992).</li><li>Hepburn, H. R., Reece, S. L., Neumann, P., Moritz, R. F. A., Radloff, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absconding+in+honeybees+(Apis+mellifera)+in+relation+to+queen+status+and+mode+of+worker+reproduction.">Absconding in honeybees (Apis mellifera) in relation to queen status and mode of worker reproduction.</a> Insectes Soc. 46 (4), 323-326 (1999).</li><li>Harrison, J. F., Fewell, J. H., Anderson, K. E., Loper, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+physiology+of+the+invasion+of+the+Americas+by+Africanized+honeybees.">Environmental physiology of the invasion of the Americas by Africanized honeybees.</a> Integr. Comp. Biol. 46 (6), 1110-1122 (2006).</li><li>DeGrandi-Hoffman, G., Eckholm, B. J., Huang, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+bee+bread+made+by+Africaized+and+European+honey+bees+(Apis+mellifera)+and+its+effects+on+hemolymph+protein+titers.">A comparison of bee bread made by Africaized and European honey bees (Apis mellifera) and its effects on hemolymph protein titers.</a> Apidologie. 44 (1), 52-63 (2013).</li><li>Cappelari, F. A., Turcatto, A. P., Morais, M. M., DeJong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Africanized+honey+bees+more+efficiently+convert+protein+diets+into+hemolymph+protein+than+do+Carniolan+bee+(Apis+melliferacarnica).">Africanized honey bees more efficiently convert protein diets into hemolymph protein than do Carniolan bee (Apis melliferacarnica).</a> Genet. Mol. Res. 8 (4), 1245-1249 (2009).</li><li>Human, H., Nicolson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+content+of+fresh,+bee-collected+and+stored+pollen+of+Aloe+greatheadii+var+davyana+(Asphodelaceae).">Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae).</a> Phytochem. 67, 1486-1492 (2006).</li><li>Bonvehi, J. S., Jorda, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutrient+composition+and+microbiological+quality+of+honeybee-collected+pollen+in+Spain.">Nutrient composition and microbiological quality of honeybee-collected pollen in Spain.</a> J. Agric. Food Chem. 45 (3), 725-732 (1997).</li><li>Anderson, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+ecology+of+the+hive+and+pollination+landscape:+Bacterial+associates+from+floral+nectar,+the+alimentary+tract+and+stored+food+of+honey+bees+(Apismellifera).">Microbial ecology of the hive and pollination landscape: Bacterial associates from floral nectar, the alimentary tract and stored food of honey bees (Apismellifera).</a> PLoS ONE. 8 (12), e83125 (2013).</li><li>Southwick, E. E., Roubik, D. W., Williams, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+energy+balance+in+groups+of+Africanized+and+European+honey+bees:+ecological+implications.">Comparative energy balance in groups of Africanized and European honey bees: ecological implications.</a> Comp. Biochem. Physiol. A. 97 (1), 1-7 (1990).</li><li>Spivak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relative+success+of+Africanized+and+European+honey-bees+over+a+range+of+life-zones+in+Costa+Rica.">The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica.</a> J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).</li><li>Francoy, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+and+genetic+changes+in+a+population+of+Apis+mellifera+after+34+years+of+Africanization.">Morphometric and genetic changes in a population of Apis mellifera after 34 years of Africanization.</a> Genet. Mol. Res. 8 (2), 709-717 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Yukarıda tarif edilen metotlar kullanılarak, AHB tarafından yapılan beebread AHB ve EHB hem daha büyük miktarlarda tüketilen olduğu bulunmuştur. EHB ve -AHB beebread her tür benzer miktarlarda tüketilen rağmen, -AHB yüksek hemolimf proteini titreleri bulunmaktaydı. AHB de Hemolimf protein düzeyleri aynı diyetler 26 beslenen olsa EHB daha yüksek olduğu nerede bizim yöntemlere dayalı bulgular daha önceki raporlara benzer. Hem EHB ve AHB tarafından farklı oranlarda tüketilen EBB ve ABB tüketimini ölçerek, her alttürde hemolimf protein konsantrasyonu artan gıda tüketimi tarafından gündeme olamayacağı belirlenmiştir. Hemşire arı yaş işçilerde hemolimf protein konsantrasyonu ve plato için ayar noktası EHB daha AHB yüksek olduğu bir plato gibi görünüyor. Polen depolama oranını optimize edecek beebread üretim için koloniler kurmak için birkaç önemli koşullar vardır. İlk olarak, kolonies açık yavrularıyla çerçeveleri gerekir. Beslemek açık damızlık olmadan, işçiler çok polen toplamak olmaz. Hiçbir ek yavru üretilir, böylece İkincisi, koloni queenless olmalıdır. Kuluçka yetiştirme polen büyük miktarlarda gerektirir ve sadece aşırı polen saklanır. EFA kurulan küçük koloniler halinde, koloniler queenless olması gerekir, böylece yavru alanları genişleyen sanki beebread olarak depolanır az polen olacaktır. Beebread yapılabilmesi için, son olarak, polen corbicular yükler olarak toplanır ve tarak hücrelerinde depolanmalıdır. Polen polen tuzakları toplanan ise, onlar corbicular yükler olarak toplamak, böylece arıların bunu sunmadan önce ince bir toz toprak olması gerekir. yöntemler beebread tüketimi yerine mutlak tahminlere göre nitel oluşturulan ölçmek için. Hücreler tamamen arı ekmek boşaltılması sırasında sayıldı tek tüketimi oldu. Toplam arı ekmek tüketiminin daha kesin bir tahmin arı br çıkararak elde edilebilirhücrelerden ead öncesi ve çalışma dönemi sonrasında tartılır olabilir bir börek içine yapım. Ancak, onlar bir koloni olur ve belki de çalışma dönemi sırasında işlemeye devam gibi arılar üzerinde yem diye hücrelerde arı ekmek tutmak istedim. Ağırlık artışı olabilir, çünkü arılar, bazı hücrelerde kendilerine beslenen seyreltilmiş bal koymak çünkü Çalışma öncesi ve sonrası tarak bölümlerinin ağırlık farkı tüketim tahmini olarak kullanılan değildi. İşçiler ayrıca arı ekmeği ile seyreltilmiş bal bazı eklemiş olabilir. Bu nedenlerden dolayı, besleme süresinden önce ve sonra arı ekmek yaklaşık olarak eşit miktarlarını ihtiva eden hücreler sayıldı ve niteliksel bir ölçüm elde edildi. Yine de, 11 gün sonra EBT kıyasla sayılır boş ABB hücrelerin sayısında beebread iki tür arasında çarpıcı bir farklılık yoktu. Saklanan polen beebread olur zaman belirleme olabilir diarılar sürekli hücrelere polen ekleyin çünkü fficult. arılar polen toplamak bu yüzden üretim beebread için kullanılan koloniler açık damızlık çerçeveler ile kurulmuştur. Koloni kurulduktan sonra larvalar yaklaşık 9 gün boyunca beslemek için vardı ancak, koloniler queenless edildi. 3 haftalık süre kalanı için kolonileri EFA, toplanan arılar depolanan ve beebread dönüştürülen polen içinde bulunduğumuz zaman. Kafeslerde arılar onu besleyen ek 11 gün süreyle tarak hücrelerinde depolanan polen tutulması da beebread için polen işleme devam etmiş olabilir. arı ekmek polen dönüşüm yaklaşık 7 gün 8 sürer. EHB ve AHB beslenen beebread düşük pH ve polen beslenen kıyasla daha düşük bir protein konsantrasyonları. Dönüşüm beebread sonra polen değişikliklerin benzer bulgular diğerleri 7,10,27 tarafından rapor edilmiştir. Bizim sonuçlar ancak önceki raporlardan farklı, ki konsantrasyonlarda farklılıklar o vardıbeebread ve polen ile f bazı amino asitler yer alır. hem protein ve amino asit konsantrasyonlarında değişiklikler proteolitik enzimlerin aktivitesi nedeniyle olabilir, kaynak arılar kendileri veya beebread 7,8,28,29 yılında kurulan mikrobiyal topluluklar olabilir. Protein konsantrasyonunun ölçülmesi için kullanılan yöntem daha önce Africanized ile diyet protein ve Avrupa arı 26 etkilerini belirlemek için tarif edilenlere benzerdir. Yöntemlerden bir uzantısı olarak, biz polen ve beebread çözünür protein tahmin başardık. Bu yöntemler, daha önceki raporlarda 7,10,27 benzer bulgular oluşturulur. Bulgularımız AHB daha verimli EHB fazla diyet protein asimile olduğunu, ve bu göç ve 30-32 kurulan haline gelmiştir çoğu bölgelerde AHB ekolojik hakimiyeti önemli bir faktör olabilir ek kanıtlar sunmaktadır.

Beslenme bal arısı kolonilerinin sağlık ve canlılığı ve nüfus olarak kendi işyerinde temel bir rol oynar. Gıda Besinler enerji ve kuluçka yetiştiriciliği, termoregülasyon için gerekli biyokimyasal bileşenleri, yiyecek arama ve immün yanıtı sağlamak. Bal arısı kolonilerinin için, besin koloni popülasyonları büyümek ve sağlık nektar ve polen gelen korumak için gerekli. Nektar karbonhidrat sağlar ve polen gibi protein, lipit, vitamin ve mineraller 1 olarak kalan beslenme gereksinimleri sağlamaktadır. Bal arılarının subspecies gibi işçi uzun ömürlü, yavru yetiştiriciliği ve sosyal dokunulmazlık 2-6 mekanizmaları gibi besin temelli koloni düzeyinde parametreleri farklı olabilir. Bu farklılıklar gıda, özellikle polen kolonisi tarafından işlenen ve bireylerde sindirilir nasıl bağlantılı olabilir. Polen kimyasal değişti tarak hücrelerinde ve mikrobik kaynaklı laktik asit fermantasyonu ile saklanır <sup&gt; 7-10. Fermente polen beebread olarak adlandırılır. Orada topladıkları polen ve mağaza besin elde etme yeteneği alttür arasındaki genotipik farklılıklar olabilir ve bu koloni büyüme ve hayatta kalma etkileyebilir. Gıda işleme ve besin edinimine genotipik etkileri aynı gıdalar 11-14 tüketirken bazı kişiler diğerlerinden daha fazla besin ve kalori elde etmek neden diğer organizmalarda belgelenmiştir. Burada bal arılarının değişik alttürü tarafından yapılan kompozisyon ve beebread tüketimini karşılaştırmak için kullanılan yöntemleri açıklar. Yöntem işçi arıların neden hemolimf protein titreleri de tarif edilmiştir ölçmek için. Beebread besin bileşimine Önceki çalışmalar Avrupa bal arıları (EHB) 10,15,16 ile yapıldı. Ancak, aynı polen yem bile farklı alttür arılar tarafından yapılan beebread farklılıklar olabilir. EHB ve AHB karşılaştırıldı bu denizaltılar, çünküPECIES gıda işleme ve besin satın 17 ile ilgili olabilecek farklı davranış ve fizyolojik farklılıklar var. En önemli farklılıkların bazıları AHB toplamak ve EHB daha fazla polen tüketmek ve kuluçka 18 içine daha kolay dönüştürmek gibi görünüyor vardır. AHB kolonileri EHB daha yüksek kaynaşma fiyat bilgisi ve gıda kaynaklarının kısıtlı 19-23 olduğunda abscond. Absconding EHB nadirdir. AHB de EHB 24 daha yüksek metabolik oranları var. EHB ve AHB arasındaki koloni düzeyi farklılıklarını beslenme temeli ve aynı zamanda besin içeriği o beebread dönüştürülür sonra (örneğin, amino asitler ve protein) için polen toplama oranı ile ilişkili olabilir. Beebread tüketimi ve ortaya çıkan protein edinimi de EHB ve AHB arasındaki koloni düzeyinde farklılıklar bir rol oynayabilir. Geliştirilen yöntemleri kullanarak, EHB ve AHB aynı polen kaynağı beebread yaptı. beebread sonra EAC arılar geri beslenmiştirh alttürü ve arılar kendi alttür veya beebread kaynağına özgü bir şekilde beebread proteini elde olmadığını belirleyebilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="792">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:308px;">Name of the Material/Equipment</td>
			<td style="width:153px;">Company</td>
			<td style="width:140px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:191px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">waterproof double junction pH spear&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td>Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Coffee Grinder</td>
			<td>Mr. Coffee&#160;</td>
			<td>model 1DS77</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dulbecco&#39;s phosphate buffer solution</td>
			<td>Emd-millipore</td>
			<td>BSS-1005-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EIA/RIA polystyrene plate</td>
			<td>Sigma-Aldrich-Corning</td>
			<td align="left">CLS3590-100EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">microcapillary pipets</td>
			<td>Kimble Glass Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quick Start Bradford Protein Assay Kit 2&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>#500-0202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td>Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>Biotek Synergy HT&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mass Selective Detector&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5973N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HLB cartridge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">gas chromatograph&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>6930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;gas chromatography column&#160;</td>
			<td>A J&#38;W Scientific&#160;</td>
			<td>DB-1701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">d4-alanine&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>488917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">d23-lauric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>451401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">13C6-glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>389374</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyridine&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>270970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N,O-Bis (trimethylsilyl)trifluoroacetamide +&#160;&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>33148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Perfluorotributylamine (PFTBA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>442747-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">d39-arachidiac acid</td>
			<td>Cambridge Isotope&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td>Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for comparing nutrients in beebread made by africanized and european honey bees and the effects on hemolymph protein titers

Bal arılarının beebread olarak kovanda topladıkları polen ve mağaza besinleri almak. Biz arıların toplamak ve özel olarak inşa edilmiş kapalı uçuş alanı koloniler koyarak beebread dönüştürmek polen kaynağını kontrol etmek yöntemler geliştirdi. Yöntem polen ve beebread protein ve amino asidi bileşimi analizi için geliştirilmiştir. Biz de beebread tüketimi ölçülen ve yöntemler ortaya çıkması sonrasında 4, 7 ve 11 gün süreyle beebread üzerinde beslendikten sonra yetişkin işçi arı hemolimf protein titreleri belirlemek için kullanılmıştır açıklar. Yöntem genotip beebread polen dönüştürmeyi ve arılar tüketir ve bu proteini elde oranını etkiler olup olmadığını belirlemek için kullanılmıştır. İki alttür (Avrupa ve Africanized bal arıları, sırasıyla EHB ve AHB) aynı polen kaynağı ile sağlandı. Gelişmiş yöntemlere dayanarak, her iki alt türü tarafından yapılan beebread polen daha düşük protein konsantrasyonu ve pH değerlerine sahiptirler. Genel olarak, asit con aminoya EHB veya AHB tarafından yapılan beebread olarak deùerleri benzerdir ve polen daha beebread yüksek seviyelerde gerçekleşmiştir. -AHB Ve EHB Hem EHB göre daha AHB yapılan beebread önemli ölçüde daha fazla tüketilmesi. EHB ve -AHB beebread her tür benzer miktarlarda tüketilen rağmen, AHB içinde hemolimf protein konsantreleri EHB daha yüksek bulunmuştur. AHB ve EHB arasındaki protein edinimi farklılıklar her alttür gelişti coğrafi bölge ile ilgili çevresel uyarlamalar yansıtıyor olabilir. Bu farklılıklar nedeniyle damızlık yetiştiriciliği ve koloni gelişimi üzerindeki etkileri Yeni Dünya AHB nüfus başarılı kurulmasına katkıda bulunabilir.

<html> Beebread pH ve protein konsantrasyonu için analiz edilmeden önce en az bir ay süreyle -80 ° C&#39;de saklanır ve amino asit analizi önce yaklaşık 4 ay süren. Beebread pH ve protein konsantrasyonu (Şekil 1) polen ile farklılaştığı keşfedildi. Protein konsantrasyonu olarak beebread pH polen daha düşüktür. EHB ve -AHB Hem EBT (Şekil 2) daha fazla ABB tüketti. AHB hemolimfi çözünür protein seviyeleri, tüketilen beebread tipine (Şekil 3) EHB önemli ölçüde daha yüksek idi. EHB ve -AHB beebread her tür benzer miktarlarda tüketilen halde hemolimf protein düzeylerinde bu farklılıklar meydana geldi. örnekleme sırasında arıların yaşı anlamlı hemolimfteki çözünür protein konsantrasyonları etkilemiştir. Protein konsantrasyonları farklı değildi gün-7 ya da 11 ile karşılaştırıldığında gün 4 arılar anlamlı olarak düşüktü. bal arıları için gerekli olan 10 amino asitlerden _content &quot;&gt;, histidin ama polen tespit edilmiştir. Bir çok durumda, beebread ölçülen amino asit konsantrasyonu (Şekil 4). Örneğin, konsantrasyon polen daha yüksekti lösin ve treonin poleni ile karşılaştırıldığında beebread yaklaşık% 60 daha yüksek olduğu, ve valin konsantrasyonları, yaklaşık% 25 daha yüksekti. Alanin, aspartik asit, glutamin, ve metiyonin düzeyleri de polen daha beebread yüksekti. Amino asitler konsantrasyonları arasında büyük farklılık fenilalanin ve sistein hariç ABB ve PDR. Fenilalanin seviyeleri EBT veya polen ya kıyasla ABB ile ilgili olarak iki kat daha yüksektir. Sistein konsantrasyonları ABB veya polen ile karşılaştırıldığında EBT düşüktü. Triptofan da daha yüksek konsantrasyonlarda, sadece amino asit mevcuttu EBB veya polen ve ABB prolin ABB. Konsantrasyonlu daha polen EBB daha yüksekti. Şekil 1: pH (A) ve polen çözünür protein konsantrasyonları (B) ve Avrupa (EHB) veya Africanized (AHB) bal arıları tarafından yapılan beebread karşılaştırılması. polen pH varyans analizi ile tespit edildiği üzere beebread önemli ölçüde daha yüksek (F 2,12 = 3725, p &lt;0.0001) bir Tukeys W-çoklu karşılaştırma testi ile gerçekleştirilmiştir. polen protein konsantrasyonu EHB (EBB) veya AHB (ABB) tarafından yapılan beebread göre anlamlı olarak yüksek bulundu (F 2,27 = 16.49; p &lt;0.0001). Aynı harfle takip edilen araçlar 0.05 düzeyinde önemli ölçüde farklı değildir. <img alt="Şekil 2," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig2highres.jpg" width="600" /> Şekil 2: cel ortalama yüzdesiTamamen kafesli arılar tarafından 11 günlük süre üzerinde tüketilen beebread içeren ls. beebread aynı polen kaynağı kullanılarak ya Avrupa (EHB) veya Africanized (AHB) arılar tarafından yapılmıştır. Araçlar, her tedavinin beş kafesleri tahmin edilmiştir; Bir tek yönlü varyans analizi (F 3,16 = 7.3, p = 0.003) ve Tukey B testi ile tespit edildiği üzere aynı harf olan 0.05 düzeyinde önemli ölçüde farklı değildir. Bu Şekil 25 modifiye edilmiştir. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig3highres.jpg" width="600" /> Şekil 3: 4, 7, ve 11 gün süreyle Avrupa (EBB) veya Africanized (ABB) arılar tarafından yapılan Avrupa (EHB) veya Africanized gelen hemolimfteki proteinin ortalama konsantrasyonu (AHB) bal arılarının beslenen beebread bir tekrarlı ölçümler analizi. Varyans 4 Akne tedavi edici arasında önemli farklılıklar belirtilentment grupları (F 3,20 = 19.7, p &lt;0.001). AHB beslenen ABB çözünür protein düzeyleri EHB beslenen ABB (p = 0.008) veya EBB (p = 0.018) anlamlı olarak yüksek bulunmuştur. örnekleme sırasında arıların yaşı anlamlı hemolimfteki çözünür protein konsantrasyonları etkilemiştir. Seviyeleri gün 7 (p &lt;0.0001) veya 11 (p = 0.001) ile karşılaştırıldığında gün-4 arı anlamlı olarak düşüktü. Gün 7 ve 11.Gün arılar (p = 0.149) farklılık yoktu. Bu rakam, 25 modifiye edilmiştir. <img alt="Şekil 4," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig4highres.jpg" width="600" /> Şekil 4:. Amino asitlerin konsantrasyonları (polen gramı başına ug veya beebread) polen ya da EBT yapılmış beebread Avrupa arıları tarafından yapılan beebread ve ABB Afrikalılaşmış arıları tarafından yapılmıştır. Triptofan, sistein, fenilalanin ve prolin ön açıklık amacıyla ayrı ayrı çizilmiştironların miktarda reyi. Bu rakam, 25 modifiye edilmiştir.

Watch this Scientific Journal Video about Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers at JoVE.com

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies.

Africanized ve Avrupa Bal Arısı Made by beebread besin tuzu karşılaştırılması yöntemleri ve Hemolenf Protein Titrelerin Etkileri

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

methods-for-comparing-nutrients-beebread-made-africanized-european

Research

JoVE Journal

Biology

10.6K Görüntüleme.  USDA-ARS. Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies. 

Video: Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Monitoring Acupuncture Effects on Human Brain by fMRI

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate that acupuncture mobilizes a limbic-paralimbic-neocortical network and its anti-correlated sensorimotor/paralimbic network at multiple levels of the brain and that the hemodynamic response is influenced by the psychophysical response.  Physiological monitoring may be performed to explore the peripheral response of the autonomic nerve function. This video describes the studies performed at LI4 (hegu), ST36 (zusanli) and LV3 (taichong), classical acupoints that are commonly used for modulatory and pain-reducing actions. Some issues that require attention in the applications of fMRI to acupuncture investigation are noted.

FMRI and physiological monitoring is used to study the effects of Acupuncture on the central and peripheral nervous systems. Acupuncture mobilizes a limbic-paralimbic-neocortical network, with great overlap with the default mode network, to modulate neurological activity, possibly related to its autonomic effect in the peripheral nervous system.

FMRI İnsan Beyninin izlenmesi Akupunktur Etkileri

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate ...

Biyoloji

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is believed to aid their search for suitable environments (1). This capability is conferred by the magnetosome, a subcellular organelle that consists of a linear-chain assembly of lipid vesicles each able to biomineralize and enclose a ~50-nm crystal of magnetite or greigite. A principle component of the magnetosome that was shown to be required for the formation of functional vesicles is MamA. MamA is a highly abundant magnetosome-associated protein which is one of the most characterized magnetosome-associated proteins in vivo (2-6). This article focuses on the purification of MamA, which despite being studied in vivo, no clear functional or structural details have been identified for it. Bioinformatics analysis suggested that MamA is a tetra-tricopeptide repeat (TPR) containing protein. TPR is a structural motif found as such or forming part of a bigger fold in a wide range of proteins, it serves as a template for protein-protein interactions and mediates multi-protein complexes (7). TPRs are involved in many crucial tasks in eukaryotic cell organelle processes and many bacterial pathways (8-14). In order to understand MamA, a unique TPR containing protein, highly purified protein is required as a first step. In this article, we present the purification protocol for a stable MamA deletion mutant (MamA&Delta;41) from M. magneticum AMB-1.

Purification of the &lt;em&gt;M. magneticum&lt;/em&gt; Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&amp;Delta;41

MamA is a unique Magnetosome associated protein which was shown to be involved in magnetosome activation. Here we present the purification protocol of MamA deletion mutant (MamA&Delta;41) from M. magneticum AMB-1.

Saflaştırılması M. magneticum Deformasyon AMB-1 Magnetosome İlişkili Protein MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Combining Single-molecule Manipulation and Imaging for the Study of Protein-DNA Interactions

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method offers the opportunity of investigating interactions occurring in solution (thus avoiding problems due to closeby surfaces as in other single molecule methods), controlling the DNA extension and tracking interaction dynamics as a function of both mechanical parameters and DNA sequence. The methods for establishing successful optical trapping and nanometer localization of single molecules are illustrated. We illustrate the experimental conditions allowing the study of interaction of lactose repressor (lacI), labeled with Atto532, with a DNA molecule containing specific target sequences (operators) for LacI binding. The method allows the observation of specific interactions at the operators, as well as one-dimensional diffusion of the protein during the process of target search. The method is broadly applicable to the study of protein-DNA interactions but also to molecular motors, where control of the tension applied to the partner track polymer (for example actin or microtubules) is desirable.

Here we describe the instrumentation and methods for detecting single fluorescently-labeled protein molecules interacting with a single DNA molecule suspended between two optically trapped microspheres.

Protein-DNA Etkileşiminin Çalışmaları Tek molekül Manipülasyon ve Görüntüleme birleştiren

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This occurs when endothelial cells, which line blood vessels, become adhesive to circulating immune cells such as monocytes. In vitro measurement of this adhesiveness has until now been done by quantifying the total number of monocytes that adhere to an endothelial layer either as a direct count or by indirect measurement of the fluorescence of adherent monocytes. While such measurements do indicate the average adhesiveness of the endothelial cell population, they are confounded by a number of factors, such as cell number, and do not reveal the proportion of endothelial cells that are actually adhesive. Here we describe and demonstrate a method which allows the enumeration of adhesive cells within a tested population of endothelial monolayer. Endothelial cells are grown on glass coverslips and following desired treatment are challenged with monocytes (that may be fluorescently labeled). After incubation, a rinsing procedure, involving multiple rounds of immersion and draining, the cells are fixed. Adhesive endothelial cells, which are surrounded by monocytes are readily identified and enumerated, giving an adhesion index that reveals the actual proportion of endothelial cells within the population that are adhesive.

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

We report an in vitro method that allows the quantitation of the actual number of adhesive cells within an endothelial cell monolayer.

Endotel Hücre yapışma miktarının belirlenmesi<em&gt; In Vitro</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction channels, which is a major intercellular process by which tissue homeostasis is maintained. Interruption of gap junctional intercellular communication (GJIC) by toxicants, toxins, drugs, etc. has been linked to numerous adverse health effects. Many genetic-based human diseases have been linked to mutations in gap junction genes. The SL-DT technique is a simple functional assay for the simultaneous assessment of GJIC in a large population of cells. The assay involves pre-loading cells with a fluorescent dye by briefly perturbing the cell membrane with a scalpel blade through a population of cells. The fluorescent dye is then allowed to traverse through gap junction channels to neighboring cells for a designated time. The assay is then terminated by the addition of formalin to the cells. The spread of the fluorescent dye through a population of cells is assessed with an epifluorescence microscope and the images are analyzed with any number of morphometric software packages that are available, including free software packages found on the public domain. This assay has also been adapted for in vivo studies using tissue slices from various organs from treated animals. Overall, the SL-DT assay can serve a broad range of in vitro pharmacological and toxicological needs, and can be potentially adapted for high throughput set-up systems with automated fluorescence microscopy imaging and analysis to elucidate more samples in a shorter time.

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer technique that measures intercellular communication through gap junction channels. Gap junctional intercellular communication is a major cellular process by which tissue homeostasis is maintained and disruption of this cell signaling has adverse health effects.

Gap Junctional Hücreler arası iletişim: Doğal Ürünler Toksikantların ve Toksinler Yan Etkileri değerlendirmek için Fonksiyonel Biyomarker ve Sağlık Faydaları

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

Comparison of Tobacco Host Cell Protein Removal Methods by Blanching Intact Plants or by Heat Treatment of Extracts

Plants not only provide food, feed and raw materials for humans, but have also been developed as an economical production system for biopharmaceutical proteins, such as antibodies, vaccine candidates and enzymes. These must be purified from the plant biomass but chromatography steps are hindered by the high concentrations of host cell proteins (HCPs) in plant extracts. However, most HCPs irreversibly aggregate at temperatures above 60 &#176;C facilitating subsequent purification of the target protein. Here, three methods are presented to achieve the heat precipitation of tobacco HCPs in either intact leaves or extracts. The blanching of intact leaves can easily be incorporated into existing processes but may have a negative impact on subsequent filtration steps. The opposite is true for heat precipitation of leaf extracts in a stirred vessel, which can improve the performance of downstream operations albeit with major changes in process equipment design, such as homogenizer geometry. Finally, a heat exchanger setup is well characterized in terms of heat transfer conditions and easy to scale, but cleaning can be difficult and there may be a negative impact on filter capacity. The design-of-experiments approach can be used to identify the most relevant process parameters affecting HCP removal and product recovery. This facilitates the application of each method in other expression platforms and the identification of the most suitable method for a given purification strategy.

Three heat precipitation methods are presented that effectively remove more than 90% of host cell proteins (HCPs) from tobacco extracts prior to any other purification step. The plant HCPs irreversibly aggregate at temperatures above 60 &#176;C.

Bozulmamış Bitkiler Ağartma veya Ekstraktlarının Isıl İşlem tarafından Tütün Ana Hücre Proteini Temizleme Yöntemlerinin Karşılaştırılması

Plants not only provide food, feed and raw materials for humans, but have also been developed as an economical production system for biopharmaceutical ...

Monitoring Colony-level Effects of Sublethal Pesticide Exposure on Honey Bees

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment methods. Here we describe methods to measure the quantities of adult bees, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, by photographing frames, and by installing hives on scales and with internal sensors. Data from these periodic evaluations are then combined with running average and daily detrended data on hive weight and internal hive temperature. The resulting datasets have been used to detect colony-level effects of imidacloprid applied in a sugar syrup as low as 5 parts per billion. The methods are objective, require little training, and provide permanent records in the form of sensor output and photographs.

Sublethal doses of pesticides may affect colonies in ways that are difficult to detect using only periodic or visual methods. Methods to measure total adult bee mass, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, photographing frames, and installing sensors, are provided. Data analysis is also addressed.

Bal arıları üzerinde Sublethal pestisit pozlama koloni düzeyi etkilerinin izlenmesi

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These age-associated disorders are characterized by the appearance of protein aggregates with fibrillary structure in the brains of these patients. Exactly why normally soluble proteins undergo an aggregation process remains poorly understood. The discovery that protein aggregation is not limited to disease processes and instead part of the normal aging process enables the study of the molecular and cellular mechanisms that regulate protein aggregation, without using ectopically expressed human disease-associated proteins. Here we describe methodologies to examine inherent protein aggregation in Caenorhabditis elegans through complementary approaches. First, we examine how to grow large numbers of age-synchronized C. elegans to obtain aged animals and we present the biochemical procedures to isolate highly-insoluble-large aggregates. In combination with a targeted genetic knockdown, it is possible to dissect the role of a gene of interest in promoting or preventing age-dependent protein aggregation by using either a comprehensive analysis with quantitative mass spectrometry or a candidate-based analysis with antibodies. These findings are then confirmed by in vivo analysis with transgenic animals expressing fluorescent-tagged aggregation-prone proteins. These methods should help clarify why certain proteins are prone to aggregate with age and ultimately how to keep these proteins fully functional.

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

The goal of the method presented here is to explore protein aggregation during normal aging in the model organism C. elegans. The protocol represents a powerful tool to study the highly insoluble large aggregates that form with age and to determine how changes in proteostasis impact protein aggregation.

Yöntemleri ile Caenorhabditis elegans çağda doğal Protein toplama çalışma değişikliklere

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

Quantification of Site-specific Protein Lysine Acetylation and Succinylation Stoichiometry Using Data-independent Acquisition Mass Spectrometry

Post-translational modification (PTM) of protein lysine residues by N&#400;-acylation induces structural changes that can dynamically regulate protein functions, for example, by changing enzymatic activity or by mediating interactions. Precise quantification of site-specific protein acylation occupancy, or stoichiometry, is essential for understanding the functional consequences of both global low-level stoichiometry and individual high-level acylation stoichiometry of specific lysine residues. Other groups have reported measurement of lysine acetylation stoichiometry by comparing the ratio of peptide precursor isotopes from endogenous, natural abundance acylation and exogenous, heavy isotope-labeled acylation introduced after quantitative chemical acetylation of proteins using stable isotope-labeled acetic anhydride. This protocol describes an optimized approach featuring several improvements, including: (1) increased chemical acylation efficiency, (2) the ability to measure protein succinylation in addition to acetylation, and (3) improved quantitative accuracy due to reduced interferences using fragment ion quantification from data-independent acquisitions (DIA) instead of precursor ion signal from data-dependent acquisition (DDA). The use of extracted peak areas from fragment ions for quantification also uniquely enables differentiation of site-level acylation stoichiometry from proteolytic peptides containing more than one lysine residue, which is not possible using precursor ion signals for quantification. Data visualization in Skyline, an open source quantitative proteomics environment, allows for convenient data inspection and review. Together, this workflow offers unbiased, precise, and accurate quantification of site-specific lysine acetylation and succinylation occupancy of an entire proteome, which may reveal and prioritize biologically relevant acylation sites.

Here, we present unbiased quantification of site-specific protein acetylation and/or succinylation occupancy (stoichiometry) of an entire proteome through a ratiometric analysis of endogenous modifications to modifications introduced after quantitative chemical acylation using stable isotope-labeled anhydrides. In combination with sensitive data-independent acquisition mass spectrometry, accurate site occupancy measurements are obtained.

Siteye özel Protein lizin asetilasyon ve Succinylation veri bağımsız edinme kütle spektrometresi kullanılarak Stoichiometry miktar

Post-translational modification (PTM) of protein lysine residues by N&#400;-acylation induces structural changes that can dynamically regulate protein ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm cell to penetrate the zona pellucida and fertilize the egg. It is therefore of great interest to test compounds (e.g., environmental chemicals or drug candidates) for their effect on Ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm either to examine the potential adverse effects on human sperm cell function or to investigate a possible role as a contraceptive. Here, two medium-throughput assays are described: 1) a fluorescence-based assay for assessment of effects on Ca2+-signaling in human sperm, and 2) an image cytometric assay for assessment of acrosome reaction in human sperm. These assays can be used to screen a large number of compounds for effects on Ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm. Furthermore, the assays can be used to generate highly specific dose-response curves of individual compounds, determine potential additivity/synergism for two or more compounds, and to study the pharmacological mode of action through competitive inhibition experiments with CatSper inhibitors.

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Here, two medium-throughput assays for assessment of effects on Ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm are described. These assays can be used to quickly and easily screen large amounts of compounds for effects on Ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm.

Orta-den geçerek deneyleri Ca2 +etkileri değerlendirilmesi için eleme-sinyal ve insan Sperm Acrosome reaksiyon

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...