Bu protokol, bağlı alglerin fotosentetik aktivitesini, tıpkı doğada olduğu gibi hala planktona bağlanırken ölçer. Bu tekniğin temel avantajı, fotofizyolojinin ölçümünün numunenin dikkati dağılmadan gerçek zamanlı olarak yapılabilmesidir. Zooplankton bireylerinin temel floresan üzerindeki etkilerini incelemek için, yetişkin scapholeberis mucronata'yı kültürden herhangi bir organizmaya bağlı olmadan hazırlayın.
Şimdi FLW'deki bireyleri bağırsak içeriğinden floresan önlemek için en az 90 dakika boyunca 20 santigrat derecede aç bırakın. Bir küvete 1,5 mililitre FWL dökün. İstediğiniz s sayısını alın.
100 kat büyütmede optik mikroskop altında pipet kullanan mucronata bireyleri ve bunları küvete aktarır. Numune hacmini 2 mililitreye çıkarmak için FLW ekleyin ve hızlı tekrarlama hızı florometre ölçümünden 15 dakika önce 20 santigrat derecede düşük ışık altında alışmasına izin verin. Ardından, ölçümü başlatmak ve ölçümleri numune başına üç defadan fazla tekrarlamak için "çalıştırmak için harekete geç" düğmesine tıklayın.
Elde edilen grafikten F0 değerini okuyun. 100 kat büyütmede optik mikroskop altında bir pipet kullanarak erimiş bir karapaks ile kolakyum türlerini toplayın ve FLW ile yıkayın. AF-6 ortamındaki kolakyum türlerini temiz bir tezgahta 10 mililitrelik bir cam tüpte aseptik olarak aşılayın.
Kültürü, bir büyüme odasında NC2 sıcaklığında tutun, hücre yerleşimini önlemek için cam tüpü günde en az bir kez elle hafifçe sallayın. Zooplankton bireylerinin kolakyum türlerinden bir floresan klorofil üzerindeki etkilerini incelemek için, herhangi bir bağlı organizma olmadan yetişkin s. mucronata kullanın.
Bağırsak içeriğinden floresan önlemek için, FLW'deki bireyleri en az 90 dakika aç bırakın. Küvet tipi hızlı tekrarlama oranı florometresi kurun. Şimdi önceden kültürlenmiş kolakyum türlerinin 1,5 mililitrelik bir alt örneğini bir küvete dökün.
Daha sonra istenen sayıda s. mucronata bireyini bu küvetlere aktarın ve numune hacmini filtrelenmiş ortamla 2 mililitreye kadar getirin. Hızlı tekrarlama hızı florometre ölçümünü yapmadan önce bireyleri 20 santigrat derecede düşük ışık altında 15 dakika boyunca alıştırın.
Ölçümü başlatmak için "çalıştırmak için harekete geç" seçeneğine tıklayın, ölçümleri numune başına üç defadan fazla tekrarlayın. Elde edilen grafikten F0 ve FM değerlerini okuyun. Temel floresanı düzeltmek için, 0,2 mikrometrelik dökme boyutunda bir filtre kullanarak kültür ortamını filtreleyin ve floresanı ölçün.
Colacium türlerinin F0 ve FM'sinden taban çizgisi örneğinin F0'ını çıkarın veya seçenekler sekmesindeki ayarlardaki boş düzeltme değerini değiştirin.
Sonra FLW kullanarak s. mucronata'yı yıkayın. Transfer s.
100 mililitre FLW'ye mucronata ve açlık için 90 dakika boyunca NC2 sıcaklığında karanlık koşullar altında saklayın. Bir küvete 1,5 mililitre FLW dökün. Yaklaşık on s aktarın.
Colacium türlerine sahip mucronata bireyleri bir küvete ve numuneyi 2 mililitreye çıkarmak için FLW ekleyin. Bireyleri N2C sıcaklığında düşük ışık altında 15 dakika boyunca iklimlendirin ve metin yazısında belirtildiği gibi klorofil bir floresan ölçün. Bağlı hücrelerin sayısını numaralandırmak için, hızlı tekrarlama hızı florometre ölçümünü aldıktan sonra numuneyi% 2 glutaraldehit ile sabitleyin.
Daha sonra ışık mikroskobu altında s. mucronata'nın çeşitli odak derinliklerinde ve konumlarında fotoğraf çekin. Taban çizgisi floresansı veya klorofil a floresan üzerinde s ile anlamlı bir etki yoktu.
mililitre başına 5 kişiye kadar mukronata. Bununla birlikte, maksimum fotokimyasal verimlilik ve fotokimyasal olmayan söndürme, s. mucronata yoğunluğu mililitre başına 7.5 kişi olduğunda önemli ölçüde etkilenmiştir.
Bağlanma aşamasında kolakyum türlerinin fitofizyolojisindeki mevsimsel değişiklikler ve AF-6 ortamındaki durağan faz için planktonik aşama, benzer ortalama maksimum fotokimyasal verimlilik ve fotokimyasal olmayan söndürme göstermiştir. Karanlık koşullar altında kolakyum türlerinin ekli aşaması için, fotokimyasal olmayan söndürmenin üç saat sonra manganez için kalsiyumdan daha yüksek olması ve 21 saatte düşük ışık yoğunluğunda olması dışında, fotofizyolojik parametrelerde anlamlı bir fark yoktu. Planktonik aşama için, PS2 absorpsiyon kesiti manganezde üç saatte kalsiyum tedavisinden önemli ölçüde daha düşüktü.
Etkili fotokimyasal verimlilik önemli ölçüde daha yüksekti, ancak fotokimyasal olmayan söndürme, manganez tedavisinde 21 saatteki kontrolden daha düşüktü. Artan ışık altında, manganez, PS2 absorpsiyon kesitini üç saatte, fotokimyasal olmayan söndürmede 21 saatte azaltma eğilimindeyken, üç saatte etkili fotokimyasal verimliliği artırdı. Kalsiyum, artan ışık altında fotokimyasal olmayan söndürmeyi biraz geliştirdi.
Bununla birlikte, etkili fotokimyasal verimliliği üç saatte azalttı. En önemli şey, substrat organizmalarının etkisidir. Algler farklı türlere veya malzemelere bağlanırsa, etki farklı olabilir.
Bu protokole ek olarak, karbon fiksasyonunun veya oksijen üretim oranlarının ölçülmesi, kalsiyum verimliliğinin deneysel manipülasyonlara tepkisini açıklığa kavuşturmak için yararlıdır. Bu protokol, bağlı alglerin fotosentetik aktivitesinin çevresel değişikliklere nasıl tepki verdiğini açıklığa kavuşturmamızı sağlar.
