Bu protokol, DBS'yi çevreleyen gizemi çözmeye yardımcı olan sinir ağları üzerindeki stimülasyon sonuçlarını incelemeye izin verir. Ve bir stimülasyonun beyin dinamikleri üzerindeki etkisini belirlemek. Bir stimülasyon sırasında FD onarımını kullanmanın temel avantajı, akut stimülasyonun beyin dinamikleri üzerindeki in vivo sonuçlarını görselleştirebilmemiz ve daha sonra stimülasyon protokollerini in vivo olarak rafine edebilmemizdir.
Bu yöntem nöroloji ve psikiyatri alanlarında özellikle önemlidir. DBS'nin antroponotik bir strateji olarak büyük etkiye sahip olduğu bu tıbbi uzmanlıklarda olduğu gibi. Başlamak için, anestezi uygulanmış hayvan sırtüstü yatağını BT yatağına koyun.
BT görüntüleme için, yüz maskesini veya burun konisini sıçana sabitleyin. Kafayı BT tarayıcısının görüş alanının ortasına yerleştirin. Tarayıcının spesifikasyonlarına göre alma parametrelerini kullanarak BT görüntüsünü almaya devam edin.
MR Görüntüleme için, hayvan sırtüstü yatağını MRI yatağına koyun. MRG alımı sırasında hareketleri önlemek için, kafayı tarayıcı yatağına yerleştirilmiş stereotaktik bir çerçeveye sabitleyin. Ayrıca, sıçan gövdesinin geri kalanını ipek bantla sabitleyin.
Pozisyon doğru olduğunda, MRI görüntüsünü alın. Karşılıklı bilgilere dayalı otomatik bir katı kayıt algoritması kullanarak BT ve MRG'yi mekansal olarak normalleştirmek için bir görüntü işleme yazılımı kullanın. Ortak kayıtlı görüntüdeki bregma satırını yerelleştirin.
Paxinos ve Watson Sıçan Beyin Atlası'na göre bregma'dan medial prefrontal kortekse AP, ML ve DV erişimindeki mesafeyi ölçün. Kulaklar ve gözler arasındaki alanı tıraş edin. Hayvanı stereotaktik çerçevede eğilimli konuma getirin.
Sıçan kulak çubuklarını kullanarak başın hareketsizliğini sağlayın. Kulak çubuklarını çok derine sokmamaya dikkat edin, çünkü bu kulak zarına zarar verebilir. Ameliyat sırasında hayvanı doğru pozisyonda tutmak için sıçanlar için kafa tutma adaptörünü kullanın.
Ameliyat sırasında kuruluğu önlemek için sıçan gözlerine Amimik yağlama jeli uygulayın ve steril gazlı bezle örtün. Kulaklar arasındaki kafatasını kaplayan deride uzunlamasına bir kesi yapın. Lambda'dan bregma'ya 1,5 ila iki santimetre uzanır.
Kafatasını iki veya üç kelepçe yardımıyla ortaya çıkarın. Periosteumu makasla çıkarın ve kanı tuzlu su çözeltisi ile temizleyin Bregma ve sagital sütürleri açığa çıkarmak için. Fazla tuzlu su çözeltisini gazlı bezle çıkarın.
Elektrotları konumlandırmadan önce, ameliyat sırasında doğru yerleşimi sağlamak için plastik cımbızla düzeltin. Stereotaktik çerçevenin sağ kolunun tutucusuna bir elektrot yerleştirin. Elektrodu tutan sağ kolu stereotaktik çerçeve boyunca hareket ettirin.
Elektrodun ucunu tam olarak bregma üzerine yerleştirin. Elektrot ucunu dokunmadan kafatasına mümkün olduğunca yaklaştırmaya çalışın Elektrot deformasyonunu önlemek için. Stereotaksik çerçeve tarafından sağlanan bregma için ortaya çıkan koordinatlara dikkat edin.
Cerrahi bir kalem kullanarak, kafatasında elektrotun ilk konumunu gösteren bir işaret yapın. Tutucuyu daha önce elde edilen AP ve ML koordinatlarına taşıyın. Ve elektrot hedefinin konumunu gösteren cerrahi bir kalemle kafatasında bir işaret yapın.
Elektrodu tutan stereotaktik çerçevenin sağ kolunu çıkarın. Elektrotla hiçbir şeye dokunmamaya dikkat edin. Küçük bir elektrikli matkap kullanarak, dura görünene kadar kafatasından hedef konumda bir delik açın.
Kanamayı durdurmak için pamuklu bir tomurcuk kullanın. Dört vida yerleştirmek için kafatası boyunca dört delik açın. Diş çimentosu yüzey alanını arttırmak ve zemini bulmak.
Ardından vidaları takın. Stereotaktik çerçevenin sağ kolunu sağ elektrotla bulun. Kolu, delikle çakışması gereken hesaplanmış konuma getirin.
Daha sonra elektrodu dura mater'e dokunana kadar indirin. Bu pozisyon DV yönünde sıfır seviyesi olarak hizmet edecektir. Daha önce elde edilen DV koordinatlarını kullanarak, elektrotun ucunu DV yönüne yerleştirin.
Toprağı elektrota en yakın vidalardan birine takın ve elektrot ve vidaların etrafına diş çimentosu uygulayın. Beynin diğer yarımküresi için aynı elektrot yerleştirme prosedürünü tekrarlayın. Elektrodu örtmeden bir kapak oluşturmak için daha fazla diş çimentosu uygulayın ve sertleşene kadar bekleyin.
Cerrahi alanı dezenfekte etmek için iyodopovidon çözeltisi kullanın. Sıçanı stereotaktik çerçeveden çıkarın ve elektrotların doğru yerleşimini değerlendirmek için daha önce gösterildiği gibi BT görüntülemeye devam edin. Her PET taramasından önce sıçanı sekiz ila 12 saat boyunca hızlandırın.
27 gauge şırıngayı, bir aktivimetrede ölçüldüğü gibi mümkün olan en az hacimde yaklaşık 37 megabecquerel FDG çözeltisi ile doldurun. Hayvanın kuyruğunun altına bir ısıtma yastığı yerleştirin veya kuyruk damarlarını genişletmek için kızılötesi ışık kullanın. FDG çözeltisini yanal kuyruk damarlarından birinden enjekte edin.
Hayvanı tekrar kafese yerleştirin ve görüntü alma oturumunu başlatmadan önce radyo izleyici alımı için 45 dakika bekleyin. D2 çalışması için, FDG alım döneminde DBS teslim edildi. İzole edilmiş uyarıcıyı ve gerekli telleri, hayvan kafesleri için yeterli alana ve potansiyel olarak rahatsız edici uyaranların minimum etkisine sahip geniş ve sessiz bir odada hazırlayın.
Hayvanların kafesler içinde ve uyarıcıya serbestçe hareket etmelerini sağlamak için stimülasyon tellerini dönerlere bağlayın. Stimülasyon parametrelerini metin makalesinde açıklandığı gibi ayarlayın. Mevcut modu, frekansı ve darbe genişliğini kontrol etmek için bir osiloskop kullanın.
Bifazik dalga formunu dikdörtgen bir darbe şekli ile onaylayın. BT görüntüsü, sıçan beynine yerleştirilen elektrodu açıkça görselleştirdi. Bu çalışmada kullanılan görüntüleme yöntemi de iyi anatomik bilgiler sağlamış ve FDG-PET görüntülerinin kaydedilmesini kolaylaştırmıştır.
Aynı stereotaksik alana mekansal olarak kayıtlı aynı hayvanın kaynaşmış bir PET-BT görüntüsü. Beyin metabolik farklılıkları, referans BT görüntüsüne kayıtlı bir MRG'den sıralı bir milimetrelik beyin dilimleri üzerine bindirilen T-haritaları olarak PET seansları arasında gözlendi. Bu farklılıklar sırasıyla sıcak ve soğuk renkler olarak gösterilen FDG alımındaki artış ve azalışlardan oluşuyordu.
Analizden elde edilen istatistiksel sonuçların ayrıntılı bir özeti, modüle edilmiş beyin bölgesini ve modülasyonun gözlendiği beyin yarımküresini gösterdi. T istatistiği, küme boyutu, modülasyon yönü ve tepe ve küme seviyelerinde elde edilen P-değerleri. Ameliyat sırasında yeterli estetik seviyenin ve başın korunması çok önemlidir.
Ayrıca, koordinat hesaplaması ve elektrotların düzgünlüğü esastır. Yeni operatörlerin titiz olmaları ve tüm adımları izlemeleri önerilir. Tüm prosedürü tamamladıktan sonra hayvanlar, farklı bilişsel alanlar üzerindeki stimülasyon etkisini değerlendirmek için davranış testine tabi tutulabilir.
Ek olarak, DBS sonuçlarını hücresel düzeyde değerlendirmek için bir dizi görüntü çalışması yapılabilir.
