Bu yöntem, doku katmanlarının genel doku davranışına katkılarını izole edebilir ve doku mikroyapısına yeni bir bakış açısı sağlayabilir. Mikrodiseksiyon ve test çerçevemiz, kalp kapağı broşürlerinin mekanik ve mikroyapısal özelliklerini doğrudan kendi kompozit katmanlarıyla karşılaştırmamızı sağlar. Mikrodiseksiyonun ustalaşması zor olabilir, bu nedenle, çalışmanıza başlamadan önce mümkün olduğunca pratik yapmanız şiddetle tavsiye edilir.
İlk olarak, gerekli malzemeleri, balmumu tahtasını, DI suyunu, pipeti, neşter, mikro makasları, ince forsepsleri, kavisli forsepsleri, kalın forsepsleri ve pimleri toplayın. Dokuyu iki eksenli test cihazından çıkarın ve lazer yer değiştirme sensörünü kullanarak kalınlığını ölçün. Dokuyu balmumu tahtasına yerleştirin.
Büyük korda yerleştirmeleri için dokunun ventrikülis tarafını inceleyin. Referans için bir fotoğraf çekin. Dokuyu balmumu tahtasına düz bir şekilde atriyalis yukarı bakacak şekilde yayın.
Dokuyu tahtaya yapıştırmak için, her köşedeki dokudan uzağa açılı bir iğne yerleştirin, böylece dokuyu hafifçe gerin. Doku monte edilirken pimlerin çatallar tarafından oluşturulan deliklerin dışında olduğundan ve dokunun kare olduğundan ve tabaka mikrodiseksiyonu sırasında kaymadığından emin olun. Gerekirse, dokuyu daha fazla germek için diseksiyon sırasında dokunun yan tarafına pimler yerleştirin.
Cam boncuk referans işaretleyicilerini çıkarın. DI suyunu dokunun yüzeyine bir pipetle yerleştirin, böylece dokuyu kabarcık benzeri bir şekilde tamamen kaplar. İlk köşeyi yapmak için, sabitlenmiş numunenin bir köşesini seçin ve kırılgan alanlarda büyük akor yerleştirmelerinden kaçının.
Ardından, mekanik test için neşteri montaj delikleri boyunca doku yüzeyi üzerinde hafifçe sürükleyerek A / S tabakasını kesin. Kesimin kenarları birbirinden ayrılmaya başlar ve altındaki F / V tabakasını ortaya çıkarır. Künt, ince forsepslerle, kenarlarını daha da ayırmak için kesim boyunca sıkıca ovalayın.
A/S tabakasındaki kesik ayrılmaya başlamazsa, aynı kesim üzerinde bir neşterle tekrar hafifçe izleyin. İlk kesime dik ikinci bir kesim yapın. İki kesim birbirine bağlı değilse, ince cımbızı iki kesimi ayıran küçük doku alanının altında çalıştırın.
Ardından, dokuyu kesmek için makası dikkatlice kullanın. Doku F / V tabakasından ayrılana kadar köşenin kesikleri boyunca ince bir forseps ile ovalayın. Küçük bir doku parçası ayrılır ayrılmaz, büyük cımbızla tutun ve kompozit katmanları daha da ayırmak için yavaşça çekin.
A / S kompozit tabakasının istenmeyen şekilde yırtılmasını ve yırtılmasını önlemek için dokuyu daha büyük cımbızla kavrarken soymaya devam edin ve köşe için yapılan iki kesimin sonuna gelene kadar dikişi ovalayın. İlk köşede ayırmayla ilgili önemli sorunlar varsa, başlangıç noktası olarak farklı bir köşe deneyin. Daha sonra, ikinci bir köşe yapmak için, neşter ucunu her kesimin altına yerleştirerek ve doku yüzeyi boyunca hafifçe sürükleyerek ilk köşe için yapılan iki kesimi uzatın, böylece kesim uzantıları orijinal kesimlere bağlanır ve çatal veya dikiş deliklerini takip etmeye devam eder.
Kesimleri uzatmaya ve üst kompozit A/S tabakasını soymaya devam ederken bir taraf bitene kadar dikişi ovalayın. Dokunun bir kesim boyunca tamamen ayrılacağını gözlemleyin. Ardından, tamamen soyulmuş tarafın sonuna dik ikinci bir köşe oluşturun.
Büyük akor yerleştirmelerinden kaçınırken kalan kesimleri uzatın. Korda eklemelerini A/S ayırma alanından hariç tutun, ancak bu dışlama deneysel karakterizasyonlar için yeterince büyük bir A/S örneğine izin verdiğinde kullanın. İlk köşe için kullanılan sürtünme ve çekme tekniklerini kullanarak A/S ve F/V katmanlarını ayırmaya devam edin.
Bir yırtılma veya delik oluşursa dokuyu ayırmayı hemen bırakın. Cımbızların yakalanmasını önlemek için, makası oluşan herhangi bir deliğe yerleştirin ve dokuyu merkezden uzağa kesin. Kusur ayırma dikişi boyunca oluşursa, dokuyu başka bir kenar boyunca ayırmaya başlayın.
Dokuyu ayırırken ortaya çıkabilecek ara katman bağlantılarını arayın ve daha fazla doku ayrılmasını önleyin. Bunların makas kullanılarak dikkatlice kesilmesi gereken ince ama güçlü teller olduğunu gözlemleyin. A/S katmanında bir delik oluşturmaktan veya F/V katmanına doğru aşağı doğru kesmekten kaçının.
A/S katmanının mümkün olan en büyük örneği ayrılana kadar bu işleme devam edin. Cerrahi kalemi kullanarak numunenin yönünü işaretleyin. Son olarak, makasla kalan doku kenarı için ayırma dikişi boyunca kesin.
Ayrılmış A/S kompozit tabakasını kesme paspası üzerine düz bir şekilde yerleştirin. Gerekirse, dokunun kenarlarını düzeltmek ve iki eksenli mekanik test için uygun kare bir doku şekli oluşturmak için neşteri kullanın. A/S tabakasını test edilmeye hazır olana kadar DI suyuna yerleştirin.
Balmumu tahtasında kalan F/V tabakasının yönünü işaretleyin. A/S katmanının kaldırıldığı alandan mümkün olan en büyük kareyi kesin. Ardından, DI suyuna yerleştirin.
Bozulmamış broşürün ve iki disseke edilmiş tabakanın histolojik analizi, dokunun spongiosa ve fibroza arasındaki sınır boyunca doğru bir şekilde ayrılıp ayrılmadığını doğruladı. Histoloji mikrografları, ImageJ yazılımı kullanılarak doku tabakası kalınlığını ve kurucu kütle fraksiyonlarını belirlemek için kullanıldı. Deplasman kontrollü mekanik test ve son işlem, dokunun doğrusal olmayan mekanik davranışını tanımlayan triküspid kapak ön broşürünün, triküspid kapak posterior broşürünün ve triküspid kapak septal broşürünün gerilme verilerine karşı membran gerilimi üretti.
Polarize uzamsal frekans alanı görüntüleme verileri, kollajen lifi oryantasyonunun ve optik anizotropi derecesinin renk haritalarını verdi. Spesifik olarak, bu renk haritaları, tüm doku örneği boyunca kollajen lifi mimarisinin kapsamlı bir şekilde anlaşılmasını sağlamıştır. Kompozit tabakanın, sabitlenmiş dokudan ayrıldıktan sonra küçüldüğüne dikkat etmek önemlidir.
Sonraki testler için yeterli doku olduğundan emin olmak için mümkün olan en büyük örneği toplayın.
