Bu yöntem, prostat kanseri hücrelerinin kemik metastazının doğal ilerlemesini in vivo olarak yakından taklit eden ideal bir model üretmeye yardımcı olabilir. Bu teknik, kemik metastazı avantajına sahiptir ve in vivo prostat kanseri hücrelerinin doğal kemik metastazı sürecini temsil eder. Bu teknik, moleküler mekanizmaların araştırılmasına ve prostat kanseri kemik metastazı için in vivo terapötik etkilerin araştırılmasına fayda sağlar.
Enjeksiyon gününde, 10 santimetrelik bir hücre kültürü kabında kültürlenmiş% 80 ila% 90 oranında birleşen lusiferaz etiketli PC3 hücrelerini alın ve hücreleri soğuk steril PBS ile iki kez yıkayarak enjeksiyon için hazırlamaya başlayın. Yıkanmış hücreleri üç dakika boyunca 1.5 mililitre% 0.25 tripsin ile tripsin yapın, ardından% 10 serum içeren altı mililitre F12 ortamı ekleyerek tripsini söndürün ve hücreleri 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne toplayın. Toplanan hücre süspansiyonunun 20 mikrolitresini bir hücre sayma plakasına aktarın ve otomatik bir hücre sayacı kullanarak hücre konsantrasyonunu hesaplayın.
Daha sonra, hücreleri oda sıcaklığında 800 G'de beş dakika boyunca santrifüj edin.Bir pipet kullanarak süpernatantı atın ve istenen nihai hücre yoğunluğunu elde etmek için hücre peletini F12 ortamında yeniden askıya alın. Şimdi hücreleri ameliyathaneye taşıyın ve hücre enjeksiyonunu iki saat içinde gerçekleştirin. Enjeksiyona kadar hücreleri buz üzerinde tutun.
Ameliyata başlamak için, anestezi uygulanan fareyi sırtüstü pozisyona getirin ve her iki üst ekstremiteyi de orta hattan dik olarak uzatarak hareketsiz hale getirin. Cerrahi yapışkan bant kullanarak, sert bastırmadan ve iç organları yerinden oynatmadan fareyi karnından aşağı doğru hareketsiz hale getirin. Toraksın cildini% 70 etanol çubukla dezenfekte edin.
Daha sonra, orta sternumun en alt ucundaki depresyondaki fare ksifoid sürecini bulmak için ön göğüs duvarının ortasından palpe edin. Ksifoid işlemin en aşağı noktasını etiketleyin. Daha sonra ön göğüs duvarının ortasından palpe ederek, fare juguler çentiğini manubriumun üst sınırındaki merkezi depresyonda bulun ve juguler çentiğin en alt noktasını işaretleyin.
Şimdi önceki iki işaret arasındaki orta noktayı, hafifçe sağa doğru ve üçüncü interkostal alanda kalbin hemen üzerinde bulun ve işaretleyin. Bu enjeksiyon noktasıdır. Süspansiyonun 200 mikrolitresini 26 gauge iğne ile monte edilmiş bir mililitrelik bir şırıngaya yüklemeden önce hücre süspansiyonunu iyice karıştırın.
Enjeksiyon sırasında titreşen kanın girmesine izin vermek için piston ile süspansiyon arasındaki şırıngada biraz hava bırakın. Enjeksiyonu gerçekleştirmek için, iğneyi enjeksiyon bölgesinden dikey olarak yerleştirin. İğne ucu sol ventriküle doğru şekilde yerleştirilirse, iğne göbeğinde parlak kırmızı titreşen kan görünecektir.
Kan pulsasyonu görünmüyorsa veya kan pıhtılaşıyorsa enjekte etmeyi tekrar deneyin. İğne düzgün bir şekilde yerleştirildikten sonra, hücre süspansiyonunun 100 mikrolitresini sabit bir el ile 40 ila 60 saniye boyunca çok yavaş bir şekilde enjekte edin. Enjeksiyonun tamamlanmasından sonra, hemostazı sağlamak için enjeksiyon bölgesine kuru bir pamuklu çubukla 15 saniye boyunca basınç uygularken iğneyi geri çekin.
Fareyi temiz kafese geri döndürün ve anesteziden tamamen iyileşene kadar hayvanı izleyin. Lusiferaz etiketli PC3 hücrelerinin fareye enjekte edilmesinden 24 saat sonra yapılan biyolüminesans görüntüleme, hayvanın tüm vücudundan sistemik dolaşımda kanser hücrelerinin varlığını gösteren sinyaller gösterdi. Metastatik lezyonlar, enjeksiyondan iki hafta sonra farenin arka bacaklarında ortaya çıktı.
Metastatik lezyonlar zaman ilerledikçe büyüdü ve diğer bölgelerde görünmeye başladı. Kemiklerdeki prostat kanseri hücresi kaynaklı metastatik lezyonlar, hayvanın proksimal tibiasında kemik yıkımını gösteren x-ışını görüntüleme kullanılarak daha da tespit edildi. Aynı şey mikro BT taraması ile de doğrulandı.
Metastatik lezyonlar parafin gömülü dokularda hematin ve eozin boyaması ile daha da doğrulandı. Doğru enjeksiyon bölgesi, bu modelin başarı oranını sağlamak için çok önemlidir. Bu pratik ile başarılabilir.
