Name: analysis of physiologic e-selectin-mediated leukocyte rolling on microvascular endothelium
Uploaded: 2009-02-11T00:00:00
Duration: 14 min 16 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> تم توفير التمويل لهذا المشروع من قبل الجمعية الأميركية للسرطان جائزة باحث ، (06 - 024 - 01 - CSM لتشارلز J. Dimitroff) ، والمعاهد الوطنية للصحة / منح المعهد الوطني للسرطان (RO1CA118124 لتشارلز J. Dimitroff) ، و على المركز الوطني للصحة / المعهد الوطني لالتهاب المفاصل والعضلات والعظام وأمراض الجلد المنح (P30 AR042689 إلى S. الدكتور توماس Kupper ؛ مستشفى بريغهام والنساء في بوسطن ، ماساتشوستس). </p>

<ol>
	<li>Dimitroff, C. J., Kupper, T. S., Sackstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+leukocytic+migration+to+inflamed+skin+with+a+novel+fluorosugar+modifier+of+cutaneous+lymphocyte-associated+antigen.">Prevention of leukocytic migration to inflamed skin with a novel fluorosugar modifier of cutaneous lymphocyte-associated antigen.</a> <em style='font-style: italic'>J. Clin. Invest</em>. <b>112</b>, 1008-1018 .</li><li>Dimitroff, C. J., Lechpammer, M., Long-Woodward, D., Kutok, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rolling+of+human+bone-metastatic+prostate+tumor+cells+on+human+bone+marrow+endothelium+under+shear+flow+is+mediated+by+E-selectin.">Rolling of human bone-metastatic prostate tumor cells on human bone marrow endothelium under shear flow is mediated by E-selectin.</a> <em style='font-style: italic'>Cancer Res</em>. <b>64</b>, 5261-5269 (2004).</li><li>Dimitroff, C. J., Descheny, L., Trujillo, N., Kim, R., Nguyen, V., Huang, W., Pienta, K. J., Kutok, J. L., Rubin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+leukocyte+E-selectin+ligands,+P-selectin+glycoprotein+ligand-1+and+E-selectin+ligand-1,+on+human+metastatic+prostate+tumor+cells.">Identification of leukocyte E-selectin ligands, P-selectin glycoprotein ligand-1 and E-selectin ligand-1, on human metastatic prostate tumor cells.</a> <em style='font-style: italic'>Cancer Res</em>. <b>65</b>, 5750-5760 (2005).</li><li>Descheny, L., Gainers, M. E., Walcheck, B., Dimitroff, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ameliorating+Skin-Homing+Receptors+on+Malignant+T+cells+with+a+Fluorosugar+Analog+of+N-acetylglucosamine:+P-selectin+Ligand+is+a+More+Sensitive+Target+than+E-selectin+Ligand.">Ameliorating Skin-Homing Receptors on Malignant T cells with a Fluorosugar Analog of N-acetylglucosamine: P-selectin Ligand is a More Sensitive Target than E-selectin Ligand.</a> <em style='font-style: italic'>J Invest Dermatol</em>. <b>126</b> (9), 2065-2073 (2006).</li><li>Gainers, M. E., Descheny, L., Barthel, S. B., Liu, L., Wurbel, M., Dimitroff, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin-homing+receptors+on+effector+leukocytes+are+differentially+sensitive+to+glyco-metabolic+antagonism+in+allergic+contact+dermatitis.">Skin-homing receptors on effector leukocytes are differentially sensitive to glyco-metabolic antagonism in allergic contact dermatitis.</a> <em style='font-style: italic'>J. Immunology</em>. <b>179</b> (12), 8509-8518 (2007).</li><li>Rood, P. M., Calafat, J., von dem Borne, A. E., Gerritsen, W. R., van der Schoot, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+of+human+bone+marrow+endothelial+cells:+characterisation+of+new+cell+lines.">Immortalization of human bone marrow endothelial cells: characterisation of new cell lines.</a> <em style='font-style: italic'>Eur J Clin Invest</em>. <b>30</b> (7), 618-629 (2000).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم تعارض في المصالح أو الكشف.

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> موازية لوحة تحليل تدفق الغرفة هي وكالة متخصصة في منظومة فحص المختبر تستخدم لدراسة الكريات البيض -- لاصقة البطانية التفاعلات تحت ظروف إجهاد القص تشبه تلك المنقولة على سطح الوريد بعد شعري. كما هو مبين هنا في العرض الذي قدمناه البصرية ، ونحن في توضيح قيمة هذا النظام عن التحقيق في دور E - selectin -- E - selectin يغاندس في التوسط الربط الكريات البيض والمتداول على سطح بطانة الاوعية الدموية الدقيقة تفعيلها. نحن تكشف أيضا عن تطبيق غليكوزيداز ، البروتيني والعلاجات الضد لحجب توضيح دور selectin الإلكترونية ويغاندس في هذا النظام. هذه التحليلات هي تكرار للغاية وتساعد على تشكيل أساس تجريبي لدراسة E - selectin -- E - selectin يجند وظيفة في الجسم الحي. </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> بالإضافة إلى دراسة التصاق الخلية مع monolayers من الخلايا البطانية خلوى تنشيط الاوعية الدموية الدقيقة (hBMEC أو البشرية أو الوريد السري الجلدي الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة) ، يمكن إجراء فحوصات باستخدام تنقية المؤتلف الإنسان E - selectin أو E - selectin - الإيج جزيئات خيالية باعتبارها الركيزة لالتصاق الخلية. التفاعلات لاصقة أخرى توسطت من خلال الكريات البيض (L) ، والصفائح الدموية selectin (P) ، كما يمكن selectin يعاير به موازية لوحة غرفة تدفق التكنولوجيا. من خلال تغيير نوع أحادي الطبقة الركيزة / بروتين الخلية أو من الكريات البيض الإدخال / نماذج خلية selectin - transfectant ، يمكن المحققين دراسة دور هذه التفاعلات تحت ظروف الإجهاد الفسيولوجية القص. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>SIGMA</td>
<td>F6178-500ML</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DPBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>14190</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.5 M EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15575-038</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1M HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parallel-Plate Flow Chamber Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GlycoTech</td>
<td>31-001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PHD2000 Programmable Syringe Pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>PHD 2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>35x10mm Tissue Culture Dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD FALCON</td>
<td>353001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibronectin , from human plasma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>SIGMA</td>
<td>86088-83-7 F2006-2MG</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Interleukin-1_, Human; Recombinant</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>SIGMA</td>
<td>I9401-5UG</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HBSS (Hank s Buffered Saline Solution)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>14170</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Medium 199 w/ HEPES & Glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>12320-039</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Human Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Innovative Research, Inc.</td>
<td>IPLA-SER1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heparin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Abraxis Pharmaceutical Products</td>
<td>504011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Recombinant human fibroblast growth factor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&D Systems</td>
<td>233-FB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Test tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>352008</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anti-human E-selectin clone BBIG-E4(5D11)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&D Systems	</td>
<td>BBA16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bromelain</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>SIGMA</td>
<td>B-4882</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
				                                                                                      	
	

		</div>
		

analysis of physiologic e-selectin-mediated leukocyte rolling on microvascular endothelium

<p class="jove_content">E - selectin هو نوع من البروتين - 1 على غشاء الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة التي تساعد على بدء توظيف تعميم الكريات البيضاء إلى الأنسجة الجلدية والعظام والملتهبة. E - selectin التعبير التأسيسية microvessels على الجلد والعظام ومحرض المؤيدة للالتهابات السيتوكينات ، مثل IL - 1α و / TNF - α ، على microvessels في الأنسجة الملتهبة. هذا مستقبلات يتوسط lectin ملزمة التفاعلات الضعيفة مع يغاندس مكافحة مستقبلات الكربوهيدرات على تعميم الكريات البيض ، والذي ينتج في سلوك مميزة المتداول. لأن هذه التفاعلات تسبق الأحداث لاصقة أكثر استقرارا والنشاط انسلال ، توصيف نشاط الكريات البيض المتداول وتحديد يغاندس E - selectin الكريات البيض قد تم تحقيق الأهداف الرئيسية في دراسات الاتجار الكريات البيض والتهاب وتطوير العلاجات المضادة للالتهابات (1-5) . القصد من هذا التقرير هو تقديم البصرية ، وصفا شاملا لهذه التكنولوجيا الأكثر استعمالا لدراسة التفاعلات selectin E - E - يجند selectin تحت الظروف الفسيولوجية تدفق الدم. مختبرنا بالتعاون مع مركز بحوث الأمراض الجلدية في جامعة هارفارد يستخدم للدولة من بين الفن غرفة تدفق موازية لوحة أجهزة يرافقه التصور الرقمي وتسجيل برامج جديدة ، NIS - الأركان. هذه التكنولوجيا تتيح لنا تحليل الأحداث التصاق في الوقت الحقيقي لرؤية الشاشة ، فضلا عن النشاط سجل المتداول في شكل الفيديو. وتحسب المعلمات التصاق الخلية ، مثل المتداول تردد ، مقاومة القص وملزم / الربط الكفاءة ، مع عناصر شيكل ، البرمجيات ، وتصديرها إلى جدول بيانات Excel وتخضع للتحليل الإحصائي. مظاهرة في المقدمة هنا ، قمنا بتوظيف غرفة تدفق موازية لوحة للتحقيق E - selectin التي تعتمد على نشاط الكريات البيض المتداول على العيش خلايا نخاع العظم البطانية (hBMEC). واستخدمت الإنسان KG1a الخلايا المكونة للدم السلف ، التي تعبر عن مستوى عال من E - selectin يجند ، ونموذجنا الكريات البيض ، في حين تم استخدام خلية hBMEC خلدت الخط ، HBMEC - 60 الخلايا ، ونموذجنا الخلية البطانية (6). للحث على وتحاكي الأصلية E - selectin التعبير في غرفة التدفق ، HBMEC - 60. تم تنشيط الخلايا مع first IL - 1 وأظهر الفيديو الذي عرض لدينا موازية لوحة تحليل تدفق هي طريقة مناسبة لدراسة E - selectin بوساطة فيزيولوجي الكريات البيض الأنشطة المتداول وهذا الوصف الوظيفي ليجند E - selectin الكريات البيض (s) في غرفة تدفق يمكن التأكد من خلال تنفيذ البروتيني أو غليكوزيداز الهضم.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium at JoVE.com

Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium

<p class="jove_content">يقدم هذا التقرير تصوير مرئي مواز لوحة تحليل تدفق الغرفة لدراسة التفاعلات البطانية الكريات البيض تحت إجهاد القص فيزيولوجي. هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص للتحقيق في دور يغاندس E - selectin البطانية (E) - selectin الكريات البيض والكريات البيض التي تؤدي المتداول على سطوح الخلايا البطانية.</p>

تحليل فسلجي المتداول كريات بيضاء E - Selectin بوساطة بطانة الاوعية الدموية الدقيقة في

E-selectin is a type-1 membrane protein on microvascular endothelial cells that helps initiate recruitment of circulating leukocytes to cutaneous, bone ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

والخلايا العصبية ونجمية المشارك الثقافة الفحص لتحليل محتوى عال من العصبية

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Bioengineering Human Microvascular Networks in Immunodeficient Mice

الهندسة الحيوية شبكات الاوعية الدموية الدقيقة الإنسان في الفئران العوز المناعي

The future of tissue engineering and cell-based therapies for tissue regeneration will likely rely on our ability to generate functional vascular networks ...

RNA-seq Analysis of Transcriptomes in Thrombin-treated and Control Human Pulmonary Microvascular Endothelial Cells

RNA-يليها تحليل Transcriptomes في المعاملة والثرومبين الإنسان الرئوي مراقبة الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة

The characterization of gene expression in cells via measurement of mRNA levels is a useful tool in determining how the transcriptional machinery of the ...

Isolation of Microvascular Endothelial Tubes from Mouse Resistance Arteries

عزل الاوعية الدموية الدقيقة البطانية أنابيب الشرايين ماوس المقاومة

The control of blood flow by the resistance vasculature regulates the supply of oxygen and nutrients concomitant with the removal of metabolic ...

A Standardized Method for the Analysis of Liver Sinusoidal Endothelial Cells and Their Fenestrations by Scanning Electron Microscopy

طريقة موحدة لتحليل خلايا الكبد خاص بالمنحنى البطانية وFenestrations من خلال المجهر الإلكتروني

Liver sinusoidal endothelial cells are the gateway to the liver, their transcellular fenestrations allow the unimpeded transfer of small and dissolved ...

Measurement and Analysis of Extracellular Acid Production to Determine Glycolytic Rate

قياس وتحليل حمض خارج الخلية الإنتاج لتحديد معدل حال السكر

Extracellular measurement of oxygen consumption and acid production is a simple and powerful way to monitor rates of respiration and glycolysis1. Both ...

Improved Swiss-rolling Technique for Intestinal Tissue Preparation for Immunohistochemical and Immunofluorescent Analyses

تحسين تقنيات السويسري المتداول لإعداد المعوية الأنسجة لالمناعى وتحليلات مناعي

Understanding the role of factors that regulate intestinal epithelial homeostasis and response to injury and regeneration is important. The current ...

Quantification of Site-specific Protein Lysine Acetylation and Succinylation Stoichiometry Using Data-independent Acquisition Mass Spectrometry

التحديد الكمي للبروتين خاصة بالموقع يسين Acetylation و Succinylation Stoichiometry الكتلي حيازة مستقلة عن البيانات باستخدام

Post-translational modification (PTM) of protein lysine residues by N&#400;-acylation induces structural changes that can dynamically regulate protein ...

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

تعبير البروتينات الفلورية الانصهار في مورين الخلايا الجذعية المشتقة من نخاع العظم والضامة

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...

Simultaneous Measurements of Intracellular Calcium and Membrane Potential in Freshly Isolated and Intact Mouse Cerebral Endothelium

قياسات متزامنة من الكالسيوم داخل الخلايا وإمكانات غشاء في البطانة الدماغي الماوس معزولة طازجة وسليمة

Cerebral arteries and their respective microcirculation deliver oxygen and nutrients to the brain via blood flow regulation. Endothelial cells line the ...