Name: analysis of physiologic e-selectin-mediated leukocyte rolling on microvascular endothelium
Uploaded: 2009-02-11T00:00:00
Duration: 14 min 16 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium at JoVE.com

<p class="jove_content"> Финансирование этого проекта была предоставлена ​​American Cancer Society исследований ученый премии (06-024-01-CSM, чтобы Чарльз Дж. Димитров), Национального института здоровья / Национальный институт рака грант (RO1CA118124 Чарльз Дж. Димитров), а также Национальных Институтов Здоровья / Национального института артритов и костно-мышечной и кожных заболеваний гранта (P30 AR042689 доктора Томаса С. Kupper; больницы Brigham и женщин, Бостон, Массачусетс). </p>

<ol>
	<li>Dimitroff, C. J., Kupper, T. S., Sackstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+leukocytic+migration+to+inflamed+skin+with+a+novel+fluorosugar+modifier+of+cutaneous+lymphocyte-associated+antigen.">Prevention of leukocytic migration to inflamed skin with a novel fluorosugar modifier of cutaneous lymphocyte-associated antigen.</a> <em style='font-style: italic'>J. Clin. Invest</em>. <b>112</b>, 1008-1018 .</li><li>Dimitroff, C. J., Lechpammer, M., Long-Woodward, D., Kutok, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rolling+of+human+bone-metastatic+prostate+tumor+cells+on+human+bone+marrow+endothelium+under+shear+flow+is+mediated+by+E-selectin.">Rolling of human bone-metastatic prostate tumor cells on human bone marrow endothelium under shear flow is mediated by E-selectin.</a> <em style='font-style: italic'>Cancer Res</em>. <b>64</b>, 5261-5269 (2004).</li><li>Dimitroff, C. J., Descheny, L., Trujillo, N., Kim, R., Nguyen, V., Huang, W., Pienta, K. J., Kutok, J. L., Rubin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+leukocyte+E-selectin+ligands,+P-selectin+glycoprotein+ligand-1+and+E-selectin+ligand-1,+on+human+metastatic+prostate+tumor+cells.">Identification of leukocyte E-selectin ligands, P-selectin glycoprotein ligand-1 and E-selectin ligand-1, on human metastatic prostate tumor cells.</a> <em style='font-style: italic'>Cancer Res</em>. <b>65</b>, 5750-5760 (2005).</li><li>Descheny, L., Gainers, M. E., Walcheck, B., Dimitroff, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ameliorating+Skin-Homing+Receptors+on+Malignant+T+cells+with+a+Fluorosugar+Analog+of+N-acetylglucosamine:+P-selectin+Ligand+is+a+More+Sensitive+Target+than+E-selectin+Ligand.">Ameliorating Skin-Homing Receptors on Malignant T cells with a Fluorosugar Analog of N-acetylglucosamine: P-selectin Ligand is a More Sensitive Target than E-selectin Ligand.</a> <em style='font-style: italic'>J Invest Dermatol</em>. <b>126</b> (9), 2065-2073 (2006).</li><li>Gainers, M. E., Descheny, L., Barthel, S. B., Liu, L., Wurbel, M., Dimitroff, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin-homing+receptors+on+effector+leukocytes+are+differentially+sensitive+to+glyco-metabolic+antagonism+in+allergic+contact+dermatitis.">Skin-homing receptors on effector leukocytes are differentially sensitive to glyco-metabolic antagonism in allergic contact dermatitis.</a> <em style='font-style: italic'>J. Immunology</em>. <b>179</b> (12), 8509-8518 (2007).</li><li>Rood, P. M., Calafat, J., von dem Borne, A. E., Gerritsen, W. R., van der Schoot, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+of+human+bone+marrow+endothelial+cells:+characterisation+of+new+cell+lines.">Immortalization of human bone marrow endothelial cells: characterisation of new cell lines.</a> <em style='font-style: italic'>Eur J Clin Invest</em>. <b>30</b> (7), 618-629 (2000).</li></ol>

Авторы не имеют конфликта интересов или раскрытия информации.

<p class="jove_content"> Параллельные пластины проточную камеру анализа, специализирующаяся на анализе системы пробирке использованы для изучения лейкоцитов - эндотелиальных взаимодействий клея при сдвиге условиях стресса аналогичных тем, передал на поверхности после капиллярной венулы. Как показано здесь, в нашей визуальной презентации, мы демонстрируем ценность этой системы для исследования роли Е-селектина - E-селектина лигандов в посредничестве лейкоцитов привязывать и катались по поверхности активированного эндотелия капилляров. Мы также выявить применения протеаз, гликозидазы и блокирования антител лечения для выяснения роли Е-селектина и его лигандов в этой системе. Эти анализы высокой воспроизводимостью и помочь сформировать экспериментальную базу для изучения E-селектина - E-селектина лиганд функции в живом организме. </p><p class="jove_content"> В дополнение к изучению клеточной адгезии с монослоев цитокина активированных клеток эндотелия капилляров (hBMEC или человеческой вену пуповины или кожных капилляров эндотелиальных клеток), тесты могут быть выполнены с использованием очищенного рекомбинантного человеческого E-селектина или E-селектина-Ig химерные молекулы в качестве субстрата для клеточной адгезии. Другие взаимодействия клея опосредовано лейкоцитов (L-)-селектина и тромбоцитов (Р)-селектина могут быть проанализированы с использованием параллельных пластин проточную камеру технологии. Изменяя тип клеток монослоя / белок субстрат или лейкоцитов ввода / селектина-трансфектанта модели клетки, исследователи могут изучать роль этих взаимодействий в физиологических условиях напряжение сдвига. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>SIGMA</td>
<td>F6178-500ML</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DPBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>14190</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.5 M EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15575-038</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1M HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parallel-Plate Flow Chamber Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GlycoTech</td>
<td>31-001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PHD2000 Programmable Syringe Pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>PHD 2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>35x10mm Tissue Culture Dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD FALCON</td>
<td>353001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibronectin , from human plasma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>SIGMA</td>
<td>86088-83-7 F2006-2MG</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Interleukin-1_, Human; Recombinant</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>SIGMA</td>
<td>I9401-5UG</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HBSS (Hank s Buffered Saline Solution)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>14170</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Medium 199 w/ HEPES & Glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>12320-039</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Human Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Innovative Research, Inc.</td>
<td>IPLA-SER1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heparin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Abraxis Pharmaceutical Products</td>
<td>504011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Recombinant human fibroblast growth factor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&D Systems</td>
<td>233-FB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Test tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>352008</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anti-human E-selectin clone BBIG-E4(5D11)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&D Systems	</td>
<td>BBA16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bromelain</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>SIGMA</td>
<td>B-4882</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
				                                                                                      	
	

		</div>
		

analysis of physiologic e-selectin-mediated leukocyte rolling on microvascular endothelium

<p class="jove_content">E-селектина является одним из видов-1 мембранного белка на микрососудистых эндотелиальных клеток, которые помогают начать вербовку циркулирующих лейкоцитов к кожной, костной и воспаленных тканей. E-селектина выражение учредительных на кожных и костных микрососудов и индуцибельной по провоспалительных цитокинов, таких как ИЛ-1α / и ФНО-α, на микрососуды в воспаленных тканях. Это лектина рецепторов опосредует слабой связи взаимодействия с углеводами контр-рецепторов лигандами на циркулирующие лейкоциты, что приводит к характерным подвижного поведения. Потому что эти взаимодействия предшествовать более стабильной клей событий и диапедез деятельности, характеристика лейкоцитов подвижной активности и выявление лейкоцитов E-селектина лигандами основных целей при исследовании лейкоцитов торговли и воспаление и в развитии противовоспалительные терапии (1-5) . Цель данного доклада заключается в предоставлении визуальных, подробное описание наиболее широко используемых технологий для изучения E-селектина Е-селектина взаимодействия лигандов в физиологических условиях кровотока. Наша лаборатория совместно с болезнями Гарвардского исследовательского центра кожи использует состоянии современных плоского потока камера аппарата сопровождается цифровой визуализации и новое программное обеспечение записи NIS-Elements. Эта технология позволяет анализировать сцепление событий в реальном времени на экране визуализации, а также записи подвижного деятельность в видео формате. Адгезия клеток параметров, таких как прокатка частота, сопротивление сдвигу и обязательным / привязывать эффективности, рассчитываются с NIS-Elements программное обеспечение, экспортировать в таблицу Excel и подвергается статистическому анализу. В демонстрации, представленные здесь, мы использовали плоского потока камера для исследования E-селектина зависит от лейкоцитов подвижной активности на живые костного мозга человека эндотелиальных клеток (hBMEC). Человек гемопоэтических предшественников KG1a клетки, которые экспрессируют высокий уровень E-селектина лиганд, были использованы в качестве наших лейкоцитов модели, а увековечили линии hBMEC клетки, HBMEC-60 клеток, была использована в качестве нашей модели клетки эндотелия (6). Для стимулирования и имитировать родную E-селектина выражение в проточную камеру, HBMEC-60 клетки впервые были активированы с IL-1. Наши видео-презентации показали, что плоский анализа потока является подходящим методом для изучения физиологических E-селектин-опосредованной лейкоцитов подвижной деятельности, и что функциональная характеристика лейкоцитов E-селектина лиганд (ы) в проточную камеру может быть установлено путем реализации протеазы или гликозидазы пищеварения.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium at JoVE.com

Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium

<p class="jove_content">В настоящем докладе содержится визуальное изображение плоского анализ камеру поток для изучения взаимодействий лейкоцитов эндотелия в физиологических напряжения сдвига. Этот метод особенно полезен для исследования роли эндотелия (Е)-селектина и лейкоцитов E-селектина лигандов, которые вызывают лейкоцитов прокатки на поверхности эндотелиальных клеток.</p>

Анализ Физиологические E-селектин-опосредованной лейкоцитов Роллинг на микрососудистой эндотелия

E-selectin is a type-1 membrane protein on microvascular endothelial cells that helps initiate recruitment of circulating leukocytes to cutaneous, bone ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Нейронов и астроцитов сотрудничеству культуры Пробирной высоких Анализ содержания Нейротоксичность

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Bioengineering Human Microvascular Networks in Immunodeficient Mice

Биоинженерия правам микрососудистой сети в иммунодефицитных мышей

The future of tissue engineering and cell-based therapies for tissue regeneration will likely rely on our ability to generate functional vascular networks ...

RNA-seq Analysis of Transcriptomes in Thrombin-treated and Control Human Pulmonary Microvascular Endothelial Cells

РНК-след Анализ Transcriptomes в тромбин обращению и контролю человека легочной микрососудистой эндотелиальных клеток

The characterization of gene expression in cells via measurement of mRNA levels is a useful tool in determining how the transcriptional machinery of the ...

Isolation of Microvascular Endothelial Tubes from Mouse Resistance Arteries

Выделение микрососудистой эндотелиальных трубок от сопротивления мышь автомагистралях

The control of blood flow by the resistance vasculature regulates the supply of oxygen and nutrients concomitant with the removal of metabolic ...

A Standardized Method for the Analysis of Liver Sinusoidal Endothelial Cells and Their Fenestrations by Scanning Electron Microscopy

Стандартизованный метод для анализа печени Синусоидальная эндотелиальных клеток и их фенестраций по сканирующей электронной микроскопии

Liver sinusoidal endothelial cells are the gateway to the liver, their transcellular fenestrations allow the unimpeded transfer of small and dissolved ...

Measurement and Analysis of Extracellular Acid Production to Determine Glycolytic Rate

Измерение и анализ внеклеточной кислоты производства, чтобы определить гликолитических Оценить

Extracellular measurement of oxygen consumption and acid production is a simple and powerful way to monitor rates of respiration and glycolysis1. Both ...

Improved Swiss-rolling Technique for Intestinal Tissue Preparation for Immunohistochemical and Immunofluorescent Analyses

Улучшенная техника швейцарско-прокатка для Кишечные Подготовка ткани для иммуногистохимического и иммунофлуоресцентного анализов

Understanding the role of factors that regulate intestinal epithelial homeostasis and response to injury and regeneration is important. The current ...

Quantification of Site-specific Protein Lysine Acetylation and Succinylation Stoichiometry Using Data-independent Acquisition Mass Spectrometry

Количественная оценка конкретных участков белка лизин ацетилирования и стехиометрии Succinylation с помощью приобретения данных независимые масс-спектрометрия

Post-translational modification (PTM) of protein lysine residues by N&#400;-acylation induces structural changes that can dynamically regulate protein ...

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

Выражение флуоресцентные синтез белков в мышиных костного мозга-производные дендритные клетки и макрофаги

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...

Simultaneous Measurements of Intracellular Calcium and Membrane Potential in Freshly Isolated and Intact Mouse Cerebral Endothelium

Одновременного измерения внутриклеточного кальция и мембранный потенциал в свеже изолированных и нетронутыми мыши мозгового эндотелия

Cerebral arteries and their respective microcirculation deliver oxygen and nutrients to the brain via blood flow regulation. Endothelial cells line the ...