JoVE Logo
Faculty Resource Center

Sign In

0:00

Overview

1:11

Principles of UV-Vis Spectroscopy

3:46

Absorbance Measurements with UV-Vis Spectroscopy

5:30

Kinetics Experiments with UV-Vis Spectroscopy

6:47

Applications

8:57

Summary

ספקטרוסקופיה אולטרה סגולה (UV-Vis)

מקור: המעבדה של ד"ר .B ג'יל וטון - אוניברסיטת וירג'יניה

ספקטרוסקופיה אולטרה סגולה (UV-Vis) היא אחת הטכניקות האנליטיות הפופולריות ביותר מכיוון שהיא רב-תכליתית מאוד ומסוגלת לזהות כמעט כל מולקולה. עם ספקטרוסקופיית UV-Vis, אור UV-Vis מועבר דרך מדגם והעברת האור על ידי מדגם נמדדת. מהמשדר (T), ניתן לחשב את הספיגה כ- A=-log (T). ספקטרום ספיגה מתקבל המציג את הספיגה של תרכובת אורכי גל שונים. כמות הספיגה בכל אורך גל נובעת מהמבנה הכימי של המולקולה.

UV-Vis יכול לשמש באופן איכותי, לזהות קבוצות פונקציונליות או לאשר את זהותו של תרכובת על ידי התאמת ספקטרום הספיגה. ניתן להשתמש בו גם באופן כמותי, שכן ריכוז הניתוח קשור לספיגה באמצעות חוק הבירה. ספקטרוסקופיית UV-Vis משמשת לכימות כמות הדנ"א או החלבון במדגם, לניתוח מים וכגלאי לסוגים רבים של כרומטוגרפיה. קינטיקה של תגובות כימיות נמדדת גם עם ספקטרוסקופיית UV-Vis על ידי לקיחת מדידות UV-Vis חוזרות לאורך זמן. מדידות UV-Vis נלקחות בדרך כלל עם ספקטרופוטומטר. UV-Vis הוא גם גלאי פופולרי מאוד עבור טכניקות אנליטיות אחרות, כגון כרומטוגרפיה, כי זה יכול לזהות תרכובות רבות.

בדרך כלל, UV-Vis אינה טכניקת הספקטרוסקופיה הרגישה ביותר, כי לא הרבה אור נספג על פני אורך נתיב קצר. טכניקות ספקטרוסקופיות אחרות כגון פלואורסצנטיות יש רגישות גבוהה יותר, אבל הם אינם ישימים בדרך כלל, כמו רוב המולקולות אינן פלואורסצנטיות. ל-UV-Vis רגישות דומה למדידות ספיגה אחרות, כגון ספקטרוסקופיית אינפרא-אדום.

1. כייל את הספקטרומטר

  1. הפעל את ספקטרומטר UV-Vis ואפשר למנורות להתחמם לפרק זמן מתאים (כ -20 דקות) כדי לייצב אותן.
  2. מלאו קובט בממס לדגימה וודאו שבחוץ נקי. זה ישמש ריק ולעזור להסביר הפסדים קלים עקב פיזור או ספיגה על ידי הממס.
  3. מניחים את הקובט בספקטרומטר. הקפד ליישר את cuvette כראוי, כמו לעתי...

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

UV-Vis יכול לשמש כדי להשיג ספקטרום של תרכובות צבעוניות. באיור 1Aמוצג ספקטרום הספיגה של צבע כחול. הרקע מציג את צבעי האור בספקטרום הנראה לעין. הצבע הכחול בעל ספיגהמקסימלית בכתום/אדום. איור 1B מציג ספקטרום של צבע אדום, עםמקסימום בירוק.

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

UV-Vis משמש ניתוחים כימיים רבים. הוא משמש כדי כמות כמות החלבון בתמיסה, כמו רוב החלבונים לספוג חזק ב 280 ננומטר. איור 3 מציג ספקטרום לדוגמה של ציטוכרום C, בעל ספיגה גבוהה ב-280 וגם ב-450 בגלל קבוצת heme. UV-Vis משמש גם טטכניקה סטנדרטית כדי לכמת את כמות ה- DNA במדגם, כמו כל הבסיסים לספוג חזק ב 260 ננומטר....

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tags

UV Vis Spectroscopy

-- Views

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved