Name: preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> مقدمة لمعدات </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الأنسجة بلطف ، وذلك باستخدام أنابيب البنفسج C إلى تعليق وحيد الخلية قادرة على البقاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يستخدم EDTA العازلة PBS / جيش صرب البوسنة لفصل الخلايا. مستعدة العازلة إضافة 1 جزء من الحل للسهم BSA إلى 20 أجزاء من autoMACS الشطف محلول يحتوي على EDTA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتستخدم في فصل تمهيدي MACS مرشحات بحيث ينفصل عينات الأنسجة خالية من جميع كتل الخلية ، وتعزيز نجاح MACS الانفصال وتحليل لاحقة. </li></ol><p class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> عدم الربط بين خلايا الطحال </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> والطحال disscociated كله الى وحيد الخلية من معلقات splenocytes باستخدام Dissociator gentleMACS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للبدء في الإجراءات ، تحميل أنبوب C مع حجم المخزن المؤقت وفقا لكتلة الطحال. والطحال السليم للماوس الكبار BALB / ج الشابات يزن حوالي 80-120 ملغ. كل الطحال 1 إلى 2 من هذه الكتلة يتطلب 3 مل من العازلة. الطحال من الحيوانات القديمة أو الحيوانات مع الالتهابات غالبا ما تكون أكبر ويجب أن يوزن العازلة. ويجب توسيع وحدات التخزين العازلة وفقا لذلك. لا يتجاوز حجم المخزن ما مجموعه 10 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الطحال إضافة إلى أنبوب C تحتوي على 3 مل من العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن غطاء الأنبوبة C ضيق ونعلق أنبوب جيم للdissociator مع الغطاء لأسفل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السلطة حتى dissociator. لمدة 1-2 الطحال ، حدد m_spleen_01 البرنامج. البرنامج سوف يستغرق 56 ثانية لإكمال. إذا كان عدد الطحال هو أكبر ، واستخدام برنامج m_spleen_04 ، ويمكن استخدام هذا البرنامج لمدة تصل إلى 720 ملغ من نسيج الطحال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الانتهاء من برنامج نسيج الطحال الأم هي نأت الى تعليق خلية طحالية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور باستمرار تعليق خلية كاملة في 300xg في درجة حرارة الغرفة لمدة حوالي 30 ثانية. وهذا ضمان الافراج عن الدوار والجزء الثابت من كافة الخلايا التي يتم جمعها في الجزء السفلي من أنبوب C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة عينة عن طريق فتح الحاجز مختومة في سقف الأنبوبة باستخدام C pipetter ميكروليتر 1000. </li></ol><p class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> خطوة الترشيح </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء الخطوة الترشيح ، وتطبيق فصل الأنسجة إلى تصفية ما قبل الانفصال أو مصفاة مع حجم الخلية 30 ميكرومتر المسام. يجب أن تتناسب مع أنبوب مصفاة 15 مليلتر لمدة 1-2 الطحال أو أنبوب 50 مل لأكثر من 2 الطحال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك التعليق الخلية بالمرور. ثم يغسل التصفية من خلال تطبيق 5 مل من العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الآن ، وأجهزة الطرد المركزي في أنبوب مع تعليق خلية في 300xg ، في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة لجمع كل splenocytes في الطحال بيليه الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الآن ، ان لدينا من بيليه splenocytes فصلها ، يجب علينا أن نضح في وطاف بيليه resuspend في خلية في مبلغ مناسب للالعازلة. </li></ol><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> سوف تفارق الطحال باستخدام Dissociator gentleMACS العائد على نسبة عالية من splenocytes قابلة للحياة ، وهو ما يتضح من التدفق الخلوي باستخدام محلل MACSQuant. هي ملطخة الخلايا الميتة التي يوديد propidium. في المثال المقدمة ، مبعثر الجانب قدما مؤامرة نقطة يبين splenocytes المعدة. </p>

كافة البروتوكولات وصحائف البيانات متوفرة في<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> لتجنب dissociations دليل شاقة ومؤلمة في كثير من الأحيان ، وDissociator gentleMACS يسمح احد لفصل الأنسجة بكفاءة عالية في ظل ظروف رقابة واستنساخه. الإجراء تفارق مهادنا لأنسجة الخلايا والخلايا تعليق الغلة مع بقاء معدل مرتفع. تم تصميم Dissociator gentleMACS بالاشتراك مع جيم أنابيب لإعداد وحيدة الخلية تعليق من الأنسجة المختلفة. وقد تم تجهيز هذا الصك مع عدد من قبل مجموعة برامج لفصل الماوس الطحال والكبد والرئة ، أو الأنسجة العصبية. ستكون مجموعة من البرامج والبروتوكولات يتوسع ليشمل الأنسجة الإضافية. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>13 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-596</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Separation Filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-041-407</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSQuant Analyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-092-197</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">وحيدة الخلية المعلقات هي شرط مسبق لإجراء التجارب في فصل الخلايا ، خلية التحليل والثقافة الخلية. لتجنب dissociations دليل شاقة ومؤلمة في كثير من الأحيان Dissociator gentleMACS يسمح احد لفصل الأنسجة بكفاءة عالية في ظل ظروف رقابة واستنساخه. يمكن أن تنأى Dissociator gentleMACS الأمثل الماوس الطحال ، والجمع والتوحيد للوقت مع السلامة مستخدم. هذا الفيديو يصف كيفية فصل الطحال باستخدام الماوس Dissociator gentleMACS ، وهو المقعد الآلي قمة الجهاز الذي يمكن أن يحدث خللا ميكانيكيا الأنسجة باستخدام أنابيب خاصة لانتاج معلقات خلية قابلة للحياة. بعد تفكك ، يتم تصفية الطحال ، طرد ، ومعلق لمزيد من الطلبات.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">هذا الفيديو يصف بسيطة ، لتوفير الوقت للتقنية تفارق نسيج الآلي باستخدام Dissociator gentleMACS لإعداد وحيدة الخلية تعليق splenocytes من الماوس.</p>

إعداد وحيدة الخلية معلقات من الطحال ماوس مع Dissociator gentleMACS

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

<p>


<a class="grey_button" href="/video/1045">
&#x4E2D;&#x6587;
</a>


<a class="grey_button" href="/video/1102">
JapaneseVersion
</a>

</p>

Research

JoVE Journal

Biology

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

إعداد موحدة وحيدة الخلية معلقات من أنسجة الرئة باستخدام الماوس Dissociator gentleMACS

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

جيل وحيدة الخلية معلقات من الأنسجة العصبية ماوس

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

تسجيلات شفط وحيدة الخلية المستقبلة من المخروط ماوس

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

جيل من الفئران المستمدة من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

تقنيات بسيطة وفعالة لإعداد تعليق خلية الخصية

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

عزل الخلايا البطانية عن تجويف الشرايين السباتية للفئران لإجراء تجارب متعددة الخلايا أحادية الخلية

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

الكشف في الوقت الحقيقي عن إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في الاستجابة المناعية في الأرز باستخدام مقايسة التلألؤ الكيميائي

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

تحضير معلق أحادي الخلية من أمعاء البلطي النيلي لتسلسل الخلية الواحدة

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...

Isolation and Transcriptome Analysis of Plant Cell Types

عزل وتحليل النسخ لأنواع الخلايا النباتية

In multicellular organisms, developmental programming and environmental responses can be highly divergent in different cell types or even within cells, ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

عزل شبه آلي للجزء الوعائي اللحمي من الأنسجة الدهنية البيضاء باستخدام مفكك الأنسجة

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...