Name: preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_step"> Inleiding tot Equipment </p><ol><li> Weefsel is zacht gedissocieerd, met behulp van violet C Buizen in levensvatbare eencellige suspensies. </li><li> De PBS / BSA EDTA buffer wordt gebruikt om de cellen te scheiden. De buffer is bereid door toevoeging van een onderdeel van BSA Stock oplossing voor de 20 delen van autoMACS spoeloplossing met EDTA. </li><li> De MACS Pre-Scheiding Filters worden gebruikt, zodat de gedissocieerde weefselmonsters zijn vrij van alle cel klonten, het bevorderen van een succesvolle MACS scheiding en daaropvolgende analyse. </li></ol><p class="jove_step"> Dissociatie de milt-cellen </p><ol><li> Hele milt worden disscociated in single-cell suspensies van splenocyten het gebruik van de gentleMACS Dissociator. </li><li> Om te beginnen van de procedure, laad de C Tube met een volume van buffer op basis van de massa van de milt. Een gezonde milt van een jonge volwassen vrouw BALB / c muis weegt ongeveer 80 tot 120 mg. Elke 1 tot 2 milten van deze massa moet 3 ml buffer. Milt van oudere dieren of dieren met infecties zijn vaak groter en moeten worden afgewogen in buffer. De buffer volumes moeten dienovereenkomstig worden aangepast. Niet meer dan in totaal buffer volume van 10 ml. </li><li> Voeg de ontleed milt van de C Tube met 3 ml buffer. </li><li> Zorg ervoor dat de C-Tube kap strak is en bevestig de C Tube aan de dissociator met de dop naar beneden. </li><li> Het opstarten van de dissociator. Voor 1-2 milt, selecteert u het programma m_spleen_01. Het programma duurt 56 seconden in beslag. Als het aantal van de milt groter is, gebruik van het programma m_spleen_04, dit programma kan gebruikt worden voor maximaal 720 mg van de milt weefsel. </li><li> Na afronding van het programma de inheemse milt weefsel is gedissocieerd in een splenocyten schorsing. </li><li> Spin down van de hele cel suspensie bij 300xg bij kamertemperatuur gedurende ongeveer 30 sec. Dit zal ervoor zorgen dat de rotor en de stator zijn ontdaan van alle cellen die worden verzameld op de bodem van de C-Tube. </li><li> Verwijder het monster door het septum afgesloten opening in de C-Tube dop met behulp van een 1000 microliter pipetter. </li></ol><p class="jove_step"> Filtratiestap </p><ol><li> Om te beginnen de filtratie stap, gelden de gedissocieerde weefsel om de Pre-filter Separation of een cel zeef met 30 micrometer poriegrootte. Het filter moet passen een 15 mL buis voor 1-2 milt of een 50 mL buis voor meer dan 2 milt. </li><li> Laat de celsuspensie passeren. Was daarna de filter door het toepassen van 5 ml van de buffer. </li><li> Nu, centrifuge de buis met de celsuspensie op 300xg, bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten aan alle splenocyten verzamelen in een milt celpellet. </li><li> Nu, dat we een pellet van gescheiden splenocyten hebben, moeten we het supernatans aspireren en resuspendeer de cel pellet in een geschikte hoeveelheid van de buffer. </li></ol><p class="jove_content"> Milt dissociatie met behulp van de gentleMACS Dissociator levert een hoog percentage van levensvatbare splenocyten, die wordt aangetoond door middel van flowcytometrie met behulp van de MACSQuant Analyzer. Dode cellen worden gekleurd door propidiumjodide. In de verstrekte voorbeeld, de voorwaartse zijwaartse verstrooiing dot plot toont de voorbereide splenocyten. </p>

Alle protocollen en data sheets zijn beschikbaar op<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

<p> Om te voorkomen dat vervelende en vaak pijnlijke handleiding dissociaties, de gentleMACS Dissociator maakt het mogelijk om weefsel los te zeer efficiënt onder gecontroleerde en reproduceerbare omstandigheden. Het weefsel dissociatie procedure is zacht voor cellen en levert celsuspensies met een hoge levensvatbaarheid tarief. De gentleMACS Dissociator in combinatie met C Tubes is ontworpen voor de bereiding van single-cell schorsingen van verschillende weefsels. Het instrument is uitgerust met een aantal vooraf ingestelde programma&#39;s om muis-milt-, lever-, long-of zenuwweefsel distantiëren. Het bereik van de programma&#39;s en protocollen zal voortdurend worden uitgebreid met extra weefsels te nemen. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>13 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-596</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Separation Filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-041-407</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSQuant Analyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-092-197</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">Single-cell suspensies zijn een voorwaarde voor experimenten in cel scheiding, cel-cel-analyse en cultuur. Om te voorkomen dat vervelende en vaak pijnlijke handleiding dissociaties de gentleMACS Dissociator maakt het mogelijk om weefsel los te zeer efficiënt onder gecontroleerde en reproduceerbare omstandigheden. De gentleMACS Dissociator optimaal kan dissociëren muis-milt, een combinatie van tijdbesparende en normalisatie met user-veiligheid. Deze video wordt beschreven hoe u de muis los te milten het gebruik van de gentleMACS Dissociator, een geautomatiseerde bench-top apparaat dat mechanisch kunnen verstoren weefsels met behulp van speciale buizen aan levensvatbare celsuspensies te produceren. Naar aanleiding van dissociatie, zijn milt gefilterd, gecentrifugeerd en geresuspendeerd voor verdere toepassingen.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">Deze video beschrijft een eenvoudige, tijdsbesparende techniek voor automatische weefsel dissociatie met behulp van de gentleMACS Dissociator naar single-cell suspensies van de muis splenocyten voor te bereiden.</p>

Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse Spleen met de gentleMACS Dissociator

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

<p>


<a class="grey_button" href="/video/1045">
&#x4E2D;&#x6587;
</a>


<a class="grey_button" href="/video/1102">
JapaneseVersion
</a>

</p>

Research

JoVE Journal

Biology

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Gestandaardiseerde Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse longweefsel met behulp van de gentleMACS Dissociator

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Generatie van de Single-celsuspensies van Mouse Neural Tissue

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Single-cell Suction Recordings van Mouse Cone fotoreceptoren

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generatie van Muizen Afgeleid van geïnduceerde pluripotente stamcellen

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

Eenvoudige en doeltreffende techniek voor de bereiding van testikels Cell Schorsingen

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

Isolatie van endotheelcellen uit het lumen van muisslagaders voor eencellige multi-omics-experimenten

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

Real-time detectie van reactieve zuurstofsoortenproductie in immuunrespons in rijst met een chemiluminescentietest

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Single-Cell Suspension Voorbereiding van Nile Tilapia Intestine voor Single-Cell Sequencing

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...

Isolation and Transcriptome Analysis of Plant Cell Types

Isolatie en transcriptoomanalyse van plantenceltypen

In multicellular organisms, developmental programming and environmental responses can be highly divergent in different cell types or even within cells, ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

Semi-geautomatiseerde isolatie van de stromale vasculaire fractie uit muizenwit vetweefsel met behulp van een weefseldissociator

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...