Name: preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_step"> Einführung in die Geräte </p><ol><li> Das Gewebe wird sanft dissoziiert, mit violetten C Tubes zu tragfähigen Einzel-Zell-Suspensionen. </li><li> Die PBS / BSA EDTA-Puffer wird verwendet, um die Zellen zu distanzieren. Der Puffer wird durch Zugabe von 1 Teil BSA Stammlösung auf 20 Teile autoMACS Spüllösung EDTA vorbereitet. </li><li> Das MACS Pre-Separation Filter sind so, dass die dissoziierten Gewebeproben frei von allen Zellklumpen verwendet werden, die Förderung der erfolgreichen MACS Trennung und anschließender Analyse. </li></ol><p class="jove_step"> Dissoziation der Milzzellen </p><ol><li> Whole Milz werden in Einzel-Zellsuspensionen von Splenozyten mit dem gentleMACS Dissociator disscociated. </li><li> Zu Beginn des Verfahrens, laden Sie die C Tube mit einem Volumen von Puffer nach der Masse der Milz. Eine gesunde Milz eines jungen erwachsenen weiblichen BALB / c Maus wiegt etwa 80-120 mg. Jeder von 1 bis 2 Milzen dieser Masse benötigen 3 ml Puffer. Milz von älteren Tieren oder Tieren mit Infektionen sind oft größer und muss in Puffer abgewogen werden. Der Puffer Volumina müssen entsprechend skaliert werden. Nicht mehr als insgesamt Puffer Volumen von 10 mL. </li><li> Fügen Sie die Milz seziert, um die C Tube enthält 3 ml Puffer. </li><li> Stellen Sie sicher, dass die C Tubenkappe dicht ist und bringen Sie die C Rohr zur dissociator der Sockel nach unten. </li><li> Schalten Sie den dissociator. Für 1-2 Milz, wählen Sie Programm m_spleen_01. Das Programm dauert 56 Sekunden dauern. Wenn die Anzahl der Milz ist größer, benutzerfreundliches Programm m_spleen_04; dieses Programm kann verwendet werden für bis zu 720 mg Milzgewebe. </li><li> Nach Abschluss des Programms der einheimischen Milzgewebe wird in eine Splenozyten Federung dissoziiert. </li><li> Spin, den ganzen Zellsuspension bei 300xg bei Raumtemperatur für etwa 30 Sekunden. Dadurch wird sichergestellt, dass der Rotor und Stator aller Zellen, die an der Unterseite der C Rohr gesammelt werden, werden freigegeben. </li><li> Entfernen Sie die Probe durch das Septum verschlossenen Öffnung in der C Tubenkappe mit einem 1000 Mikroliter Pipette. </li></ol><p class="jove_step"> Filtrationsschritt </p><ol><li> Zu Beginn der Filtration, gelten die dissoziierten Gewebe um die Pre-Separation Filter oder eine Zelle Sieb mit 30 um Porengröße. Das Sieb sollte ein 15-ml-Tube für 1-2 Milz oder ein 50-ml-Tube fit für mehr als 2 Milz. </li><li> Lassen Sie die Zellsuspension durch. Dann waschen Sie den Filter, indem 5 ml Puffer. </li><li> Nun Zentrifuge das Rohr mit der Zellsuspension bei 300xg, bei Raumtemperatur für 10 Minuten, um alle Splenozyten in der Milz Zellpellet zu sammeln. </li><li> Nun, dass wir ein Pellet aus dissoziierten Milzzellen haben, müssen wir saugen den Überstand und Zellpellet in einer entsprechenden Menge an Puffer. </li></ol><p class="jove_content"> Spleen Dissoziation mit dem gentleMACS Dissociator wird ein hoher Anteil von lebensfähigen Splenozyten, die mittels Durchflusszytometrie mit dem MACSQuant Analyzer demonstriert wird. Tote Zellen werden durch Propidiumiodid gefärbt. In dem Beispiel vorgesehen, zeigt die Vorderseite streuen Dot-Plot die vorbereitete Splenozyten. </p>

Alle Protokolle und Datenblätter finden Sie unter<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

<p> Zur Vermeidung von langwierigen und oft schmerzhaft manuelle Dissoziationen, ermöglicht die gentleMACS Dissociator man Gewebe sehr effizient distanzieren unter kontrollierten und reproduzierbaren Bedingungen. Die Gewebedissoziation Verfahren ist schonend zu den Zellen und liefert Zellsuspensionen mit einer hohen Überlebensrate. Die gentleMACS Dissociator in Kombination mit C Tubes ist für die Herstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus verschiedenen Geweben entwickelt. Das Gerät ist mit einer Reihe von voreingestellten Programmen zur Maus-Milz, Leber, Lunge oder Nervengewebe distanzieren ausgestattet. Die Palette der Programme und Protokolle wird laufend erweitert werden, um zusätzliche Gewebe umfassen. </p>

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>13 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-596</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Separation Filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-041-407</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSQuant Analyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-092-197</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">Einzel-Zell-Suspensionen sind eine Voraussetzung für Experimente in Zellseparation, Zellanalyse und Zellkultur. Zur Vermeidung von langwierigen und oft schmerzhaft manuelle Dissoziationen der gentleMACS Dissociator ermöglicht es, Gewebe sehr effizient distanzieren unter kontrollierten und reproduzierbaren Bedingungen. Die gentleMACS Dissociator optimal distanzieren Mäusemilz, kombiniert zeitsparende und Normung Benutzer-Sicherheit. Dieses Video beschreibt, wie Sie mit der Maus Milz mit dem gentleMACS Dissociator, eine automatisierte Bank-Top-Gerät, das mechanisch stören können Gewebe mit speziellen Röhren, um lebensfähige Zellsuspensionen produzieren zu distanzieren. Nach Dissoziation, sind Milz gefiltert, zentrifugiert und resuspendiert für weitere Anwendungen.</p>

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Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">Dieses Video beschreibt eine einfache, zeitsparende Technik für die automatisierte Gewebedissoziation mit dem gentleMACS Dissociator zu Single-Zellsuspensionen von Maus-Splenozyten vorzubereiten.</p>

Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus-Milz mit dem gentleMACS Dissociator

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

<p>


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&#x4E2D;&#x6587;
</a>


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JapaneseVersion
</a>

</p>

Research

JoVE Journal

Biology

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Standardisierte Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus Lungengewebe mit dem gentleMACS Dissociator

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Forschung

Biologie

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Generierung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus Nervengewebe

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Einzel-Zell-Saug-Recordings aus Maus Zapfen-Photorezeptoren

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generation der Mäuse aus induzierten pluripotenten Stammzellen

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

Einfache und effiziente Technik zur Herstellung von Hodenkrebs Zellsuspensionen

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

Isolierung von Endothelzellen aus dem Lumen von Maus-Halsschlagadern für Einzelzell-Multi-Omics-Experimente

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

Echtzeit-Detektion der Produktion reaktiver Sauerstoffspezies bei der Immunantwort in Reis mit einem Chemilumineszenz-Assay

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Einzelzell-Suspensionspräparat aus Nil-Tilapia-Darm für die Einzelzell-Sequenzierung

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...

Isolation and Transcriptome Analysis of Plant Cell Types

Isolierung und Transkriptomanalyse pflanzlicher Zelltypen

In multicellular organisms, developmental programming and environmental responses can be highly divergent in different cell types or even within cells, ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

Halbautomatische Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion aus murinem weißem Fettgewebe mit Hilfe eines Gewebedissoziators

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...