Name: preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> מבוא ציוד </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות הוא ניתק בעדינות, בעזרת צינורות סגול C לתוך תא בודד השעיות קיימא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המאגר PBS / BSA EDTA משמש לנתק את התאים. המאגר מוכן ידי הוספת 1 חלק מהפתרון במלאי BSA עד 20 חלקים autoMACS שטיפת פתרון המכיל EDTA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MACS טרום ההפרדה מסננים משמשים כך דגימות רקמה ניתק הן ללא כל גושים התא, לקדם הפרדה MACS מוצלח וניתוח שלאחר מכן. </li></ol><p class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> Dissociating בתאי הטחול </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Spleens שלמות disscociated לתוך תא בודד השעיות של splenocytes באמצעות Dissociator gentleMACS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל את ההליך, לטעון את Tube C בהיקף של המאגר על פי המסה של spleens. הטחול בריא של עכבר צעיר מבוגר נשים BALB / c שוקל כ 80-120 מ&quot;ג. כל 1-2 spleens של מסה זו דורשת 3 מ&quot;ל של המאגר. Spleens מבעלי חיים או בבעלי חיים מבוגרים עם זיהומים הם לעתים קרובות גדולים יש לשקול במאגר. נפח המאגר חייב להיות מדורגים בהתאם. לא יעלה על נפח המאגר כולל של 10 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את הטחול גזור אל התחתית C המכיל 3 מ&quot;ל של המאגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כובע Tube C הוא חזק לצרף את Tube C כדי dissociator עם כובע ומטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוח עד dissociator. במשך 1-2 spleens, בחר m_spleen_01 התוכנית. התוכנית ייקח 56 שניות כדי להשלים. אם מספר spleens גדול, להשתמש בתוכנית m_spleen_04: תוכנית זו יכולה לשמש עד 720 מ&quot;ג של רקמת טחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השלמת התוכנית רקמת טחול יליד הוא ניתק לתוך השעיה splenocyte. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין את ההשעיה התא כולו בבת 300xg בטמפרטורת החדר למשך כ -30 שניות. זה יבטיח כי הרוטור ואת הסטטור משוחררים של כל התאים אשר נאספים בתחתית של התחתית C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המדגם דרך הפתח, מחצה חתום כובע Tube C באמצעות pipetter 1000 microliter. </li></ol><p class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון צעד </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל את שלב הסינון, להחיל את רקמת ניתק על סנן ההפרדה טרום או מסננת תא בגודל 30 מיקרומטר הנקבוביות. מסננת צריך להתאים צינור 15 מ&quot;ל במשך 1-2 spleens או שפופרת 50 מ&quot;ל במשך יותר מ 2 spleens. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו ההשעיה התא לעבור. ואז לשטוף את המסנן על ידי יישום של 5 מ&quot;ל חיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו, צנטריפוגה הצינור עם ההשעיה התא 300xg, בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות כדי לאסוף את כל splenocytes בתא הטחול גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו, שיש לנו גלולה של splenocytes ניתק, עלינו לשאוב supernatant ו resuspend התא גלולה בסכום המתאים של המאגר. </li></ol><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> דיסוציאציה הטחול באמצעות Dissociator gentleMACS תניב אחוז גבוה של splenocytes קיימא, אשר באה לידי ביטוי cytometry זרימה באמצעות Analyzer MACSQuant. תאים מתים הם מוכתמים על ידי יודיד propidium. בדוגמה סיפקה, לצד פיזור העלילה קדימה נקודה מציגה את splenocytes מוכן. </p>

כל הפרוטוקולים וגליונות נתונים זמינים<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להימנע dissociations ידני מייגע וכואב לעיתים קרובות, את Dissociator gentleMACS מאפשרת לנתק רקמה ביעילות רבה בתנאים מבוקרים לשעתקו. ההליך רקמת ניתוק עדין לתאים התשואות השעיות תא עם קצב כדאיות גבוהה. Dissociator gentleMACS בשילוב עם C צינורות נועד להכנת תא בודד השעיות מרקמות שונות. המכשיר מצויד במספר שנקבע מראש תוכניות לנתק עכבר הטחול, הכבד, הריאות, או רקמה עצבית. מגוון של תוכניות ופרוטוקולים יורחב ברציפות לכלול רקמות נוספות. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>13 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-596</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Separation Filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-041-407</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSQuant Analyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-092-197</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">תא בודד המתלים הם תנאי הכרחי ניסויים ההפרדה התא, ניתוח התא תרבית תאים. כדי להימנע dissociations ידני מייגע וכואב לעיתים קרובות Dissociator gentleMACS מאפשרת לנתק רקמה ביעילות רבה בתנאים מבוקרים לשעתקו. Dissociator gentleMACS ניתן לנתק בצורה אופטימלית טחול עכבר, שילוב timesaving וסטנדרטיזציה עם בטיחות למשתמש. וידאו זה מתאר כיצד לנתק spleens העכבר באמצעות Dissociator gentleMACS, מכשיר אוטומטי הספסל העליון שיכולים לשבש באופן מכני לרקמות באמצעות צינורות מיוחדים כדי לייצר השעיות תא קיימא. בעקבות הניתוק, spleens מסוננים, centrifuged ו resuspended עבור יישומים נוספים.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">וידאו זה מתאר פשוטים, חוסך זמן טכניקה ניתוק אוטומטי רקמות באמצעות Dissociator gentleMACS להכין תא בודד השעיות של splenocytes העכבר.</p>

הכנת תא בודד השעיות מן הטחול עכבר עם Dissociator gentleMACS

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

<p>


<a class="grey_button" href="/video/1045">
&#x4E2D;&#x6587;
</a>


<a class="grey_button" href="/video/1102">
JapaneseVersion
</a>

</p>

Research

JoVE Journal

Biology

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

הכנה סטנדרטית של תא בודד השעיות מתוך רקמת הריאה באמצעות עכבר Dissociator gentleMACS

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

הדור של תא בודד מרקמת השעיות עכבר עצבית

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

תא בודד יניקה הקלטות של photoreceptors קון עכבר

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

דור של עכברים שמקורם בתאי גזע pluripotent מושרים

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

טכניקה פשוטה ויעילה להכנת השעיות תא אשכים

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

בידוד תאי אנדותל מהלומן של עורקי הצוואר של עכברים לניסויים רב-תאיים חד-תאיים

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

זיהוי בזמן אמת של ייצור מיני חמצן תגובתי בתגובה חיסונית באורז עם בדיקת כימילומינסנציה

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

הכנת תרחיף חד-תאי ממעי אמנון הנילוס לריצוף חד-תאי

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...

Isolation and Transcriptome Analysis of Plant Cell Types

בידוד וניתוח שעתוק של סוגי תאי צמח

In multicellular organisms, developmental programming and environmental responses can be highly divergent in different cell types or even within cells, ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...