Name: preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_step"> Introduzione alla Attrezzature </p><ol><li> Il tessuto è leggermente dissociato, utilizzando viola Tubi C in singola cellula vitale sospensioni. </li><li> La PBS / BSA tampone EDTA è usato per separare le cellule. Il buffer è preparato con l&#39;aggiunta di 1 parte di soluzione madre BSA per 20 parti di autoMACS Risciacquo Soluzione contenente EDTA. </li><li> La pre-separazione filtri MACS sono usati in modo che i campioni di tessuto dissociate sono liberi di tutti i grumi di cellule, favorendo il successo separazione MACS e successiva analisi. </li></ol><p class="jove_step"> Dissociare le cellule della milza </p><ol><li> Milze intere disscociated in cella singola sospensioni di splenociti utilizzando il dissociatore gentleMACS. </li><li> Per iniziare la procedura, caricare la metropolitana C, con un volume di tampone a seconda della massa della milza. Una milza sana di un giovane adulto femmina BALB / c del mouse pesa circa 80-120 mg. Ogni 1 o 2 milza di questa massa richiedono 3 ml di tampone. Milza di animali più vecchi o animali con infezioni sono spesso più grandi e devono essere valutati nel buffer. I volumi buffer deve essere ripartita in proporzione. Non superano un volume totale di buffer di 10 ml. </li><li> Aggiungere la milza sezionato per la metropolitana C contenente 3 ml di buffer. </li><li> Assicurarsi che il tappo del tubo C è stretto e collegare il tubo C al dissociatore con il tappo verso il basso. </li><li> Accendere il dissociatore. Per 1-2 milza, selezionare m_spleen_01 programma. Il programma avrà 56 secondi per essere completata. Se il numero di milza è maggiore, usare il programma m_spleen_04, questo programma può essere utilizzato per un massimo di 720 mg di tessuto milza. </li><li> Dopo il completamento del programma del tessuto milza nativa è dissociato in una sospensione splenocyte. </li><li> Spin down la sospensione a cellule intere, a 300xg a temperatura ambiente per circa 30 sec. Questo farà sì che il rotore e lo statore sono liberati di tutte le cellule che vengono raccolte sul fondo del tubo C. </li><li> Rimuovere il campione attraverso il setto-sigillato l&#39;apertura del tappo del tubo C con una 1000 pipetter microlitro. </li></ol><p class="jove_step"> Filtrazione passo </p><ol><li> Per iniziare la fase di filtrazione, applicare il tessuto dissociato al pre-filtro di separazione o di un colino cellula con 30 micron dimensioni dei pori. Il filtro dovrebbe montare un tubo di 15 ml per 1-2 milza o un tubo da 50 ml per più di 2 milze. </li><li> Lasciate che la sospensione di cellule passano attraverso. Poi lavare il filtro applicando 5 ml di tampone. </li><li> Ora, centrifugare la provetta con la sospensione cellulare a 300xg, a temperatura ambiente per 10 minuti per raccogliere tutte splenociti in una milza pellet. </li><li> Ora, che abbiamo un pellet di splenociti dissociato, dobbiamo aspirare il supernatante e risospendere il pellet cellulare in una quantità adeguata di buffer. </li></ol><p class="jove_content"> Dissociazione milza utilizzando il dissociatore gentleMACS produrrà una elevata percentuale di splenociti vitale, che è dimostrato mediante citometria di flusso utilizzando l&#39;analizzatore MACSQuant. Le cellule morte sono colorate con ioduro di propidio. Nell&#39;esempio fornito, l&#39;attaccante scatter plot mostra il lato dot splenociti preparato. </p>

Tutti i protocolli e le schede tecniche sono disponibili all&#39;indirizzo<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

<p> Per evitare di dissociazioni manuali ripetitive e spesso dolorosa, il dissociatore gentleMACS permette di dissociare i tessuti in maniera molto efficiente, in condizioni controllate e riproducibili. La procedura di dissociazione tessuto è delicato per le cellule e sospensioni cellulari produce un alto tasso di vitalità. Il dissociatore gentleMACS in combinazione con C Tubi è stata progettata per la preparazione di singola cellula sospensioni da vari tessuti. Lo strumento è dotato di una serie di programmi preimpostati per dissociare il mouse milza, fegato, polmone, o tessuto neurale. La gamma di programmi e protocolli sarà continuamente ampliata per includere altri tessuti. </p>

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>13 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-596</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Separation Filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-041-407</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSQuant Analyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-092-197</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">Monocellulari sospensioni sono un prerequisito per esperimenti di separazione delle cellule, l&#39;analisi delle cellule e coltura delle cellule. Per evitare di dissociazioni manuali ripetitive e spesso doloroso il dissociatore gentleMACS permette di dissociare i tessuti in maniera molto efficiente, in condizioni controllate e riproducibili. Il dissociatore gentleMACS può dissociarsi in modo ottimale milza del mouse, coniugando risparmio di tempo e di normalizzazione dall&#39;utente sicurezza. Questo video spiega come dissociare milza del mouse utilizzando il dissociatore gentleMACS, un sistema automatico da banco dispositivo in grado di distruggere meccanicamente i tessuti con tubi speciali per la produzione di sospensioni di cellule vitali. A seguito di dissociazione, milza vengono filtrati, centrifugati e risospesi per ulteriori applicazioni.</p>

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Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">Questo video descrive un semplice, di risparmiare tempo tecnica per la dissociazione dei tessuti automatizzato mediante il dissociatore gentleMACS per preparare cella singola sospensioni di splenociti mouse.</p>

Preparazione di Single-Cell Sospensioni da Spleen mouse con il dissociatore gentleMACS

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

<p>


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&#x4E2D;&#x6587;
</a>


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JapaneseVersion
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</p>

Research

JoVE Journal

Biology

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

La preparazione standardizzata di Single-Cell Sospensioni da tessuto polmonare del mouse utilizzando il dissociatore gentleMACS

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

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