Name: preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_step"> Introducción a los Equipos </p><ol><li> Tejido es ligeramente disociado, con violeta tubos C en viable una sola célula suspensiones. </li><li> El tampón PBS / BSA EDTA se utiliza para disociar las células. El buffer se prepara añadiendo una parte de la solución de archivo BSA a 20 partes de autoMACS Solución de enjuague que contiene EDTA. </li><li> El MACS separación pre-filtros se utilizan para que las muestras de tejido disociado están libres de todos los grupos de células, la promoción de la separación MACS éxito y su posterior análisis. </li></ol><p class="jove_step"> Disociar las células del bazo </p><ol><li> El bazo entero se disscociated en una sola célula suspensiones de esplenocitos con el disociador gentleMACS. </li><li> Para comenzar el procedimiento, el tubo de carga C con un volumen de tampón de acuerdo a la masa del bazo. Un bazo sano de un adulto joven hembra BALB / c ratón pesa alrededor de 80-120 mg. Cada 1 a 2 bazos de esta masa requiere de 3 ml de solución tampón. El bazo de los animales más viejos o los animales con infecciones suelen ser mayores y se deben sopesar en el buffer. Los volúmenes de almacenamiento intermedio debe ser reducido en consecuencia. No excedan de un volumen total de memoria intermedia de 10 ml. </li><li> Añadir el bazo diseccionados para el metro C con 3 ml de solución tampón. </li><li> Asegúrese de que la tapa del tubo C es apretado y conectar el tubo de C a la disociador con la tapa hacia abajo. </li><li> Encienda el disociador. Por 1-2 el bazo, seleccione m_spleen_01 programa. El programa tendrá 56 segundos para completar. Si el número de bazo es mayor, use el programa m_spleen_04, este programa puede ser utilizado para un máximo de 720 mg de tejido esplénico. </li><li> Después de completar el programa de los tejidos del bazo nativos se disocia en una suspensión de esplenocitos. </li><li> Centrifugar la suspensión de células enteras en 300xg a temperatura ambiente durante unos 30 segundos. Esto asegurará que el rotor y el estator se libera de todas las células que se recogen en la parte inferior del tubo C. </li><li> Retire la muestra a través del tabique sellado de apertura en la tapa del tubo con una pipeta de C 1000 microlitros. </li></ol><p class="jove_step"> Filtración de paso </p><ol><li> Para comenzar la etapa de filtración, aplicar el tejido disociado al filtro de pre-separación o un colador de células con un tamaño de micras de poro 30. El filtro debe ajustarse a un tubo de 15 ml por 1-2 el bazo o un tubo de 50 ml por más de 2 bazos. </li><li> Deje que la suspensión de células pasan a través. A continuación, lavar el filtro mediante la aplicación de 5 ml de solución tampón. </li><li> Ahora, centrifugar el tubo con la suspensión celular a 300xg, a temperatura ambiente durante 10 minutos para recoger todos los esplenocitos en un pellet de células del bazo. </li><li> Ahora, que tenemos una bolita de esplenocitos disociado, que debe aspirar el sobrenadante y resuspender el botón celular en una cantidad adecuada de tampón. </li></ol><p class="jove_content"> La disociación del bazo con el disociador gentleMACS dará un alto porcentaje de esplenocitos viables, lo cual es demostrado por citometría de flujo utilizando el analizador de MACSQuant. Las células muertas se tiñen con yoduro de propidio. En el ejemplo proporcionado, la dispersión frontal lado gráfico de puntos muestra los esplenocitos preparado. </p>

Todos los protocolos y hojas de datos están disponibles en<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

<p> Para evitar disociaciones manual tedioso ya menudo dolorosa, el disociador gentleMACS permite disociar los tejidos de manera muy eficiente en condiciones controladas y reproducibles. El procedimiento de disociación del tejido es suave con las células y las suspensiones de producción de células con una tasa alta viabilidad. El disociador gentleMACS en combinación con C Tubos está diseñado para la preparación de una sola célula suspensiones de varios tejidos. El instrumento está equipado con una serie de programas pre-establecidos para disociar de bazo de ratón, hígado, pulmón, o en el tejido neural. La gama de programas y protocolos serán continuamente expandido para incluir otros tejidos. </p>

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>13 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-596</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Separation Filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-041-407</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSQuant Analyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-092-197</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">Una sola célula suspensiones son un requisito previo para realizar experimentos en la separación celular, el análisis de células y cultivos celulares. Para evitar disociaciones manual tedioso ya menudo dolorosa la disociador gentleMACS permite disociar los tejidos de manera muy eficiente en condiciones controladas y reproducibles. El disociador gentleMACS óptima se puede disociar de bazo de ratón, la combinación de ahorro de tiempo y de normalización por el usuario de seguridad. Este vídeo se describe cómo disociar el bazo del ratón con el disociador gentleMACS, un sistema automatizado de sobremesa dispositivo mecánico que puede alterar los tejidos que utilizan tubos especiales para producir suspensiones de células viables. Después de la disociación, el bazo se filtra, se centrifuga y se resuspende para otras aplicaciones.</p>

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Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">Este video describe un simple ahorro de tiempo para la técnica de la disociación del tejido automatizado utilizando el disociador gentleMACS para preparar una sola célula suspensiones de esplenocitos de ratón.</p>

Preparación de una sola célula suspensiones de bazo de ratón con el disociador gentleMACS

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

<p>


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&#x4E2D;&#x6587;
</a>


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JapaneseVersion
</a>

</p>

Research

JoVE Journal

Biology

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

La preparación estandarizada de un solo suspensiones de células de tejido pulmonar de ratón con el disociador gentleMACS

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Investigación

Biología

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Generación de un solo suspensiones de células de tejido de ratón Neural

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Una sola célula grabaciones de succión de los conos del ratón

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generación de ratones derivados de células madre pluripotentes inducidas

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

Técnica sencilla y eficaz para la preparación de suspensiones de células testiculares

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

Aislamiento de células endoteliales de la luz de arterias carótidas de ratón para experimentos multiómicos unicelulares

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

Detección en tiempo real de la producción reactiva de especies de oxígeno en la respuesta inmune en el arroz con un ensayo de quimioluminiscencia

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

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Preparación de suspensión unicelular del intestino de tilapia del Nilo para secuenciación unicelular

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Isolation and Transcriptome Analysis of Plant Cell Types

Análisis de aislamiento y transcriptoma de tipos de células vegetales

In multicellular organisms, developmental programming and environmental responses can be highly divergent in different cell types or even within cells, ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

Aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal del tejido adiposo blanco murino utilizando un disociador tisular

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...