Name: preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_step"> Introduktion till utrustning </p><ol><li> Tissue är försiktigt dissocierade, med violett C Rör till livskraftiga encelliga suspensioner. </li><li> PBS / BSA-EDTA buffert används för att skilja cellerna. Bufferten är beredd genom att lägga till en del av BSA stamlösning till 20 delar autoMACS Sköljning Lösningar innehållande EDTA. </li><li> Den MACS försepareringen filter används så att de dissocierade vävnadsprover är fria från alla celler klumpar, främja framgångsrika MACS separation och efterföljande analys. </li></ol><p class="jove_step"> Ta avstånd de mjältceller </p><ol><li> Hela mjälte är disscociated i encelliga suspensioner av splenocytes använda gentleMACS Dissociator. </li><li> Till att börja proceduren, ladda C Tube med en volym buffert enligt massan av mjälte. En frisk mjälte om en ung vuxen hona BALB / c mus väger ca 80-120 mg. Varje 1 till 2 mjälte av denna vikt kräver 3 ml buffert. Mjälte från äldre djur eller djur med infektioner är ofta större och måste vägas i buffert. Bufferten volymer måste anpassas i enlighet därmed. Inte överstiga buffert volym på 10 ml. </li><li> Lägg till dissekerade mjälten till C Tube innehållande 3 ml buffert. </li><li> Se till att C Tube locket är tätt och fäst C Tube till dissociator med locket nedåt. </li><li> Effekt upp dissociator. För 1-2 mjälte, välja program m_spleen_01. Programmet tar 56 sekunder att genomföra. Om antalet mjälte är större, använder programmet m_spleen_04, detta program kan användas för upp till 720 mg mjälte vävnad. </li><li> Efter genomgången av programmet den infödda mjälten vävnaden är dissocierade till en splenocyte suspension. </li><li> Spinn ner hela cellsuspension på 300xg i rumstemperatur i ca 30 sek. Detta kommer att säkerställa att rotor och stator är befriad från alla celler som samlas i botten av C Tube. </li><li> Ta provet genom membranet förslutna öppning i C Tube locket med hjälp av en 1000 mikroliter pipetter. </li></ol><p class="jove_step"> Filtrering steg </p><ol><li> För att börja filtrering steg tillämpa dissocierade vävnaden till försepareringen filter eller en cell sil med 30 ìm porstorlek. Silen bör passa ett 15 ml rör för 1-2 mjälte eller en 50 ml tub i mer än 2 mjälte. </li><li> Låt cellsuspension passera. Sedan tvätta filtret genom att 5 ml buffert. </li><li> Nu, centrifugera röret med cellsuspension på 300xg, i rumstemperatur i 10 minuter för att samla alla splenocytes i en mjälte cellpellet. </li><li> Nu när vi har en pellet av dissocierade splenocytes måste vi aspirera supernatanten och resuspendera cellpelleten i en lämplig mängd buffert. </li></ol><p class="jove_content"> Spleen dissociation använder gentleMACS Dissociator kommer att ge en hög andel av livskraftiga splenocytes, vilket framgår av flödescytometri med MACSQuant Analyzer. Döda celler färgas av propidiumjodid. I den medföljande exempel visar framåt Side Scatter dot plot den förberedda splenocytes. </p>

Alla protokoll och datablad finns på<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

<p> För att undvika tråkiga och ofta smärtsamma manuell dissociations tillåter gentleMACS Dissociator en att skilja vävnad mycket effektivt under kontrollerade och reproducerbara förhållanden. Det vävnadsdissociering förfarandet är skonsam mot cellerna och ger suspensioner cell med en hög lönsamhet takt. Den gentleMACS Dissociator i kombination med C Rör är utformad för beredning av encelliga suspensioner från olika vävnader. Instrumentet är utrustat med ett antal förinställda program att skilja mus mjälte, lever, lungor eller nervvävnad. Utbudet av program och protokoll kommer kontinuerligt att utökas till att omfatta ytterligare vävnader. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>13 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-596</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Separation Filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-041-407</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSQuant Analyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-092-197</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">Encelliga suspensioner är en förutsättning för experiment i cell separation, cell analys och cellodling. För att undvika tråkiga och ofta smärtsamma manuell dissociations de gentleMACS Dissociator gör att man kan separera vävnad mycket effektivt under kontrollerade och reproducerbara förhållanden. Den gentleMACS Dissociator kan optimalt avstånd musen mjälte, som kombinerar tidsbesparande och standardisering med användar-säkerhet. Denna video beskriver hur man särskilja musen mjälte med gentleMACS Dissociator, en automatiserad bänkbaserade enhet som mekaniskt kan störa vävnader med hjälp av speciella rör för att producera livskraftiga cellsuspensioner. Efter dissociation, är mjälte filtreras, centrifugeras och återsuspenderade för ytterligare applikationer.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">Denna video beskriver ett enkelt, tidsbesparande teknik för automatiserad vävnadsdissociering använda gentleMACS Dissociator att förbereda encelliga suspensioner av musen splenocytes.</p>

Beredning av encelliga Suspensioner från musmjälte med gentleMACS Dissociator

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

<p>


<a class="grey_button" href="/video/1045">
&#x4E2D;&#x6587;
</a>


<a class="grey_button" href="/video/1102">
JapaneseVersion
</a>

</p>

Research

JoVE Journal

Biology

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Standardiserade Beredning av encelliga Suspensioner från mus lungvävnad med gentleMACS Dissociator

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Generering av encelliga Suspensioner från mus nervvävnad

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Encelliga Sug Inspelningar från fotoreceptorer Mus Cone

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generering av möss härledda från inducerade pluripotenta stamceller

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

Enkel och effektiv teknik för framställning av Testicular cellsuspensioner

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

Isolering av endotelceller från lumen i mushalspulsåder för encelliga multi-omics-experiment

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

Realtidsdetektering av reaktiv syreradikalproduktion i immunsvar i ris med en kemiluminescensanalys

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Encellssuspensionspreparat från Nile Tilapia-tarmen för encellssekvensering

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...

Isolation and Transcriptome Analysis of Plant Cell Types

Isolering och transkriptomanalys av växtcelltyper

In multicellular organisms, developmental programming and environmental responses can be highly divergent in different cell types or even within cells, ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

Halvautomatisk isolering av den stromala vaskulära fraktionen från murin vit fettvävnad med användning av en vävnadsdissociator

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...