Name: preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_step"> Equipment Giriş </p><ol><li> Doku uygulanabilir tek hücre süspansiyonları içine menekşe C Tüpler kullanarak, hafifçe ayrışmış. </li><li> PBS / BSA EDTA tampon hücreleri ayırmak kullanılır. Tampon BSA Stok çözelti, EDTA içeren Çözüm Durulama autoMACS 20 kısım 1 kısım ekleyerek hazırlanır. </li><li> MACS Ön Ayırma Filtreler başarılı MACS ayrılması ve daha sonraki analiz teşvik ayrışmış doku örnekleri tüm hücre kümeleri, böylece kullanılır. </li></ol><p class="jove_step"> Dalak hücreleri Dissociating </p><ol><li> Tüm dalak dalak gentleMACS Dissociator kullanarak tek hücre süspansiyonları disscociated. </li><li> Prosedürü başlatmak için, dalak, kitle göre tampon hacmi ile C Tüp yük. Genç bir yetişkin erkek BALB / c fare sağlıklı bir dalak 80-120 mg ağırlığındadır. Bu kitle her 1 ila 2 dalak 3 mL tampon gerektirir. Enfeksiyonları ile büyük hayvan veya hayvanların dalak genellikle büyük ve tampon tartılır olmalıdır. Tampon hacimleri buna göre ölçeklenmiş olmalıdır. 10 ml toplam tampon hacmi aşmayın. </li><li> 3 ml tampon içeren C Tüp disseke dalak ekleyin. </li><li> C Tüp kapağı sıkı olduğundan emin olun ve kapağı aşağı dissociator C Tüp takmak. </li><li> Dissociator kadar güç. 1-2 dalak için program m_spleen_01 seçin. Programını tamamlamak için 56 saniye sürer. Dalak, sayı büyükse, program m_spleen_04 kullanın, bu program 720 mg dalak doku için kullanılabilir. </li><li> Programın tamamlanmasından sonra yerli dalak doku splenocyte süspansiyon ayrışmış. </li><li> Yaklaşık 30 saniye boyunca oda sıcaklığında 300xg tüm hücre süspansiyonu aşağı spin. Bu rotor ve stator C Boru altında toplanan tüm hücreleri serbest olmasını sağlayacaktır. </li><li> 1000 mikrolitrelik pipetter kullanarak septum-C Tüp kapağı kapalı açılış ile örnek çıkarın. </li></ol><p class="jove_step"> Filtrasyon adım </p><ol><li> Filtrasyon adım başlamak için, Pre-Ayırma Filtre ya da 30 mikron gözenek boyutu ile bir hücre süzgeç ayrışmış doku geçerlidir. Süzgeç fazla 2 dalak, 1-2 dalak ya da 50 ml tüp 15 ml tüp uygun olmalıdır. </li><li> Hücre süspansiyonu geçmesine izin verin. Daha sonra 5 ml tampon uygulayarak filtre yıkayın. </li><li> Şimdi, bir dalak hücre pelletini tüm splenositlerin toplamak için 10 dakika boyunca oda sıcaklığında, 300xg hücre süspansiyonu ile tüp santrifüj. </li><li> Şimdi, ayrışmış splenositlerin bir pelet, süpernatantı aspirat ve tamponu uygun bir miktarda hücre pelletini tekrar süspansiyon gerekir. </li></ol><p class="jove_content"> Dalak ayrılma gentleMACS Dissociator kullanarak canlı splenositlerin MACSQuant Analyzer kullanarak flow sitometri gösterdiği yüksek bir yüzdesi verecektir. Ölü hücreler propidium iyodür tarafından lekeli. Verilen örnekte, ileri yan dağılım nokta arsa hazırlanan splenositlerin gösterir. </p>

Tüm protokolleri ve veri sayfaları mevcuttur<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

<p> GentleMACS Dissociator sıkıcı ve sıklıkla ağrılı manuel dissociations önlemek için, kontrollü ve tekrarlanabilir koşullar altında çok etkin bir şekilde doku ayırmak sağlar. Doku disosiasyon prosedürü yüksek canlılık oranı ile hücre ve verim hücre süspansiyonları yumuşaktır. C Tüpleri ile birlikte gentleMACS Dissociator, çeşitli dokuların tek hücre süspansiyonları hazırlanması için tasarlanmıştır. Cihaz fare dalak, karaciğer, akciğer veya sinir doku ayırmak önceden belirlenmiş programları bir dizi ile donatılmıştır. Çeşitli programların ve protokollerin ek dokuların sürekli kapsayacak şekilde genişletildi olacaktır. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>13 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-596</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Separation Filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-041-407</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSQuant Analyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec </td>
<td>130-092-197</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

preparation of single-cell suspensions from mouse spleen with the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">Tek hücre süspansiyonları hücre ayırma, hücre analizi ve hücre kültürü deneyleri için bir önkoşuldur. GentleMACS Dissociator sıkıcı ve sıklıkla ağrılı manuel dissociations önlemek için kontrollü ve tekrarlanabilir koşullar altında çok etkin bir şekilde doku ayırmak sağlar. GentleMACS Dissociator optimal, kullanıcı güvenliği ile zaman kazandıran ve standardizasyon birleştirerek, fare dalak ayrılabilir. Bu video gentleMACS Dissociator, mekanik, canlı hücre süspansiyonları üretmek için özel tüpler kullanılarak dokuların bozabilir otomatik bir tezgah üstü cihazı kullanarak fare dalak ayırmak anlatılmaktadır. Disosiasyon ardından, dalak, süzülür ve başka uygulamalar için yeniden süspanse.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">Bu video gentleMACS Dissociator kullanarak fare dalak tek hücre süspansiyonları hazırlamak için otomatik doku ayrılma için basit, zaman tasarrufu sağlayan bir teknik açıklar.</p>

Fare Dalak gentleMACS Dissociator Tek Hücreli Cezalar hazırlanması

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

<p>


<a class="grey_button" href="/video/1045">
&#x4E2D;&#x6587;
</a>


<a class="grey_button" href="/video/1102">
JapaneseVersion
</a>

</p>

Research

JoVE Journal

Biology

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Standardize Hazırlık gentleMACS Dissociator kullanarak Fare Akciğer Doku Tek Hücre Cezalar

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Fare Sinir Doku Hücre Tek Cezalar Üretimi

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Tek hücreli fare Koni fotoreseptörlerin Emiş Kayıtlar

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Elde Edilen Fare Üretimi

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

Testis Hücre Cezalı Hazırlanması için basit ve Verimli Tekniği

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

Tek Hücreli Multi-Omik Deneyler için Fare Karotis Arterlerinin Lümeninden Endotel Hücrelerinin İzolasyonu

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

Kemilüminesans Testi ile Pirinçte İmmün Yanıtta Reaktif Oksijen Türleri Üretiminin Gerçek Zamanlı Tespiti

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Tek Hücreli Dizileme için Nil Tilapia Bağırsağından Tek Hücreli Süspansiyon Hazırlığı

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...

Isolation and Transcriptome Analysis of Plant Cell Types

Bitki Hücre Tiplerinin İzolasyonu ve Transkriptom Analizi

In multicellular organisms, developmental programming and environmental responses can be highly divergent in different cell types or even within cells, ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...