滅菌のティッシュの収穫

ソース: ケイ ・ スチュワート、RLATG、RVT CMAR;ヴァレリー A. シュレーダー、RVT、RLATG。ノートルダムのノートルダム大学

1959 年に、3 R の W.M.S. ラッセルと r. l. トリーバーチによって彼らの本で導入された人道的な実験技術の原則です。3 R の交換、削減、および研究における動物の使用の洗練。¹研究動物由来組織培養細胞の使用は多くの実験を行うことができるので、交換手法体外。組織や細胞・組織培養用臓器を収穫、組織の汚染を避けるため無菌技術が必要です。滅菌の収穫も蛋白質および RNA の解析や組織の代謝プロファイリングの必要です。本稿では、ラットおよびマウスの生殖不能の臓器収穫のプロセスを議論します。

無菌技術は組織の無菌性を確保するために従わなければなりません。アルコールで消毒された層流フードで収穫を行います。使用されるすべての材料を滅菌する必要があります。収穫を行う技術者は、滅菌手術用手袋、滅菌手術用ガウン、マスク、ふっくなど保護具をドンする必要があります。ガウンは、開かれた体腔、ペトリ皿、または生殖不能媒体に皮膚細胞の脱落を防ぐために手首をカバーする必要があります。技術者の無菌性を維持するためには、この手順は、2 番目の非滅菌の技術者が動物の安楽死と滅菌の技術者を支援する必要です。

組織の代謝プロファイルを必要とする実験、組織収穫法は収集されたデータの品質に大きな影響を及ぼします。²安楽死両方プロシージャおよび組織の整合性に影響することができます収穫かかる時間の長さ。低酸素、炭酸ガスで安楽死の結果は、組織の代謝に大きな影響を持っている示されています。肺組織の血管の出血は、安楽死のため二酸化炭素の使用によっても発生します。組織の除去対象となる組織の連郭清を行うときの順序は、組織の時代へを開始または収穫の際に崩壊代謝の変化を引き起こす可能性が。

最も滅菌収穫は一つの臓器をターゲットとしながらもがあります 1 つ以上の臓器が必要であります。シーケンシャルの解剖時に必要な組織は除去されるべき順序を定めます。²急速に低下する組織は、可能な次の安楽死、早く収穫する必要があります。楽器の無菌性を維持するために腹腔内から収穫器官は次の順序で削除されます: 脾臓、肝臓、腎臓、副腎、卵巣や精巣、副生殖器 (前立腺、精嚢、子宮、卵管)、膵組織、リンパ節、膀胱、消化管 (胃、小さく、大きい腸)。胸腔内からの器官の収穫の順序は、まず心臓や肺胸腺、リンパ節、食道のコレクションに続いてを取り除くことです。³新しい手袋が必要各マウスです。

滅菌収穫器官のいくつかは保存する必要があります。液体窒素 (LN₂) または LN₂と 2 methylbutane の組み合わせで凍結組織の保全を実現します。LN₂だけで、組織が滅菌生理食塩水で洗浄、余分な水分を使い果たす無菌の吸収性の布の滅菌アルミ箔正方形に配置、LN₂にすぐに水中に沈みます。²免疫学的標本 2-methylbutane が追加されます。組織は、LN₂で冷却されて 2-methylbutane に実際に浸水します。組織が白になっている、2 methylbutane から削除、滅菌パックに配置、LN₂に直接配置されます。

1. 準備

1. 一般的な材料は、ホヤの瓶、滅菌 20-25 g 針、アイリスのはさみと親指鉗子 (皮膚に 1 つ) と内部の組織の 1 つ、ペーパー タオル、生殖不能の外科医の手袋、滅菌ペトリネットの滅菌器具の 2 つのパックで 70% アルコールを含む料理、生殖不能媒体と滅菌生理食塩水。
2. フードのファンは、手続きの前に、少なくとも 15 分間実行する必要がある、それは 70% アルコールで消毒する必要があります。
3. フードには紫外線殺菌ランプが装備されている場合は、さらに作業面の消毒に使えます。
4. フードのセットアップのきれいな手袋が着用されます。機器は、彼らが使用する、通常左から右への順序でフードに読み込まれます。きれいな項目を汚染からダーティな項目を防ぐ方向ワークフローで実施する作業が可能になります。これは、動物の死体からの偶発的な汚染から収穫された組織や臓器を保護します。
5. パッケージの生殖不能の内部を尊重する滅菌器パックが開かれます。無菌性を維持、パックをテーブルのセンターに配置、各フラップは滅菌フィールドまたはパックの内側に交差することがなく開かれます。非滅菌の人は、彼/彼女のそれを離れて反射によって最初の上部フラップを開きます。各フラップの両方の手の 1 つを使用して側フラップを開きます、-パックからそれらを引っ張る。最終的なフラップは、パックの内側のサーフェスのいずれかに触れることを避けるために世話、パックを開く人に向かって引っ張られます。
6. ボンネットにペーパー タオルを置き、アルコールとそれらをウェットします。
7. 非滅菌の人が動物を安楽死させます。
8. 不妊の人は、滅菌手術用手袋の 2 つのセットを着ています。
9. 非滅菌の人はペーパー タオルに死体を配置し、70% アルコールで死体を完全に浸します。
10. 滅菌はさみと鉗子のセットを使用して、(男性) の包皮や (女性) で骨盤の骨にちょうど前方皮膚の水平カットを作る。腹部の筋肉を切断を避けます。
11. 楽器置いておきます。

2. 組織の収穫

1. 女性と男性の包皮の上に骨盤にちょうど前方の小さなカットを作る。
2. カットの下で親指を置き、カットの頭蓋の端を把握します。もう一方の手を使用して、安全に後肢を保持、尾の頭に向かって皮膚を引っ張りながら。
3. 皮膚は後肢のすぐ上の体から引き離すだろうし、頭や前足にインサイド アウトになることが。これは効果的に器官の収穫時期に髪の汚染物質を削除します。
4. 70% アルコールで再び体を浸すし、滅菌は、もはや手袋の表面的なペアを削除します。
5. 滅菌器具を使用して腹腔内を開きます。
   1. 脾臓
      1. 脾臓を収穫、体は右横ずれの臥床に配置されます。
      2. 脾臓は腹部の筋肉を視覚化できます。
      3. はさみカットは、脾臓の上に直接行われます。
      4. 脾臓は優しく体腔から取り消されます。
      5. 脾臓、胃、膵組織のすべての添付ファイルをカットするときは、穿刺または器官を引き裂くことを避けてください。
   2. 肝臓
      1. その他の腹部の臓器を収穫、体は背臥位に。
      2. 腹部の筋肉を持ち上げて切り取る、腹腔内に直接開く楕円形を残してします。
      3. 腹腔内を公開した後横隔膜から尾側の肝臓を反映します。
      4. 横隔膜に肝臓をアタッチする任意の膜を慎重に断ちます。
      5. カットをする血管を通って背骨に垂直な肝臓と横隔膜の間表示されます。
      6. 肝臓を持ち上げ、その下にある添付ファイルを視覚化するダイヤフラムへ反映します。
      7. 胃と小腸は、中断する必要がありますに小さい肝葉をアタッチする薄い膜があります。
      8. その下側の肝臓の中心部に線維性のノードをつかんで、すべての添付ファイルを見つけるための器官。基になる臓器や組織から肝臓を分離します。
      9. 肝臓は壊れやすいと簡単にパンクすることができます血液の解放に終ってことを注意してください。したがって、それは注意深く扱われなければなりません。
   3. 腎臓
      1. 右腎を視覚化する左または左の腎臓を視覚化する右腹腔内を公開した後、腸をプッシュします。
      2. 腎臓を削除するには、体から臓器を分離する腎臓の下に把握する鉗子ブレードを使用します。体から腎臓をカットはさみやメス刃を使用します。腎臓の損傷を避けるために鉗子でカットをします。
      3. 腎臓を削除すると、任意の脂肪は臓器からトリミングことができます。
   4. 卵巣
      1. 腹腔内を公開した後、子宮を視覚化するため頭側腸に移動します。
      2. 左し、右の卵巣に子宮角に従ってください。
      3. 卵巣が小さいです。古い動物の彼らは脂肪に埋め込まれる可能性があります。
      4. 体からそれを分離するために卵巣の下で鉗子をスライドさせ、脂肪と卵管から無料でカットします。
   5. 精巣
      1. 腹腔内を開いたら、優しく鼠径の脂肪パッドを持ち、前方引き出します。
      2. これは陰嚢から精巣を引っ張ってくる。
      3. 精巣を露出すると、一度は、陰嚢や体から輸精管に添付ファイルをカットします。
      4. これは、それぞれの精巣。
6. 胸腔内の開いた胸部臓器を削除するには
   1. 体は背臥位に。胸腔臓器を収穫する場合皮膚が頭の上にも反映されるが不可欠です。
   2. 剣状突起と肋骨にちょうど尾側腹部の筋肉のカットを許可するリフトを把握します。両側に胸郭の下のカーブに沿ったカットを拡張します。横隔膜の可視化できるようになります。
   3. 胸郭のそれぞれの側に可能な限り最も外側の点をカット小することによって横隔膜を穿刺します。肋骨からダイヤフラムをカットします。
   4. 胸部の臓器を視覚化する剣状の肋骨を持ち上げます。
   5. 両側、胸骨の上部に横方向のカットを拡張し、胸を開きます。
   6. 心臓と肺は最も簡単に一緒に削除されます。
      1. 鉗子を気管に垂直に置き、気管をしっかりと把握します。
      2. はさみを使って気管鉗子にちょうど前方に垂直カットをします。このカットは、気管と食道を断つ必要があります。
      3. 気管のグリップをゆるめることがなく立ち上がって尾側気管を持ち上げます。

滅菌の器官の収穫のための手順の多くは、標準的な剖検と同じ生殖不能の技術の使用は実験手順は、摘出組織から細胞を収穫を含む価値がある組織のために不可欠。無菌性が維持されない場合、プロファイルまたは組織からの RNA の収集が危険にさらされることができます。

1. Russel, W.M.S. and Burch, R.L. 1959. The Principles of Humane Experimental Technique. Methuen: London.
2. Petucci, C., Rojas-Betancourt, S., and Gardell, S.J. 2012. Comparison of tissue harvest protocols for the quantitation of acylcarnitines in mouse heart and liver by mass spectrometry. Metabolomics. 8.784-792.
3. Parkinson, C.M., O'Brien, A., Albers, T.M., Simon, M.A., Clifford, C.B., and Pritchett-Corning, K.R. 2011. Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice. 54. e2966. 1-7.