Name: embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia
Uploaded: 2009-01-23T00:00:00
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Los autores agradecen a Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Velotta Jeff, MD, Hoyt Grant, Robert C. Robbins, MD, Yu Jin, MD, Tim Doyle, PhD, y el Stanford pequeño núcleo de imágenes de animales para la asistencia técnica. Los autores también agradecen AM Bickford, Inc. para el apoyo del equipo de veterinarios. Esta investigación fue financiada por becas de investigación de los Institutos Nacionales de Salud (R01 HL-75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), el tabaco de California las enfermedades relacionadas con el Programa de Investigación de la Universidad de California (15IT-0257 y 0169-1514RT) , y el Instituto de Medicina Regenerativa de California (RS1-00183). NH es apoyado por una beca de la Asociación Americana del Corazón. puede Heart Association.

1. Diferenciación de los CES murino en células endoteliales <ol><li> El protocolo para la diferenciación de los CES en las células endoteliales se describe en otro lugar y no es el objetivo de este protocolo 2,3. En pocas palabras, las células pueden diferenciarse, y las células que son positivas para los marcadores endoteliales como el CD31 o caderina del endotelio vascular (VE-cadherina) se purifican por clasificación celular activado por fluorescencia (FACS). </li></ol> 2. La...

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	<li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+hindlimb+ischemia.">Murine model of hindlimb ischemia.</a> JoVE. , (2008).</li><li>Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells.">Endothelial cells derived from human embryonic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).</li><li>Yamashita, J., Itoh, H., Hirashima, M., Ogawa, M., Nishikawa, S., Yurugi, T., Naito, M., Nakao, K., Nishikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flk1-positive+cells+derived+from+embryonic+stem+cells+serve+as+vascular+progenitors.">Flk1-positive cells derived from embryonic stem cells serve as vascular progenitors.</a> Nature. 408, 926-926 (2000).</li><li>De, A., Yaghoubi, S. S., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+lentiviral+vectors+in+noninvasive+molecular+imaging.">Applications of lentiviral vectors in noninvasive molecular imaging.</a> Methods Mol Biol. 433, 177-202 (2008).</li><li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization.">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li><li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomy+of+the+laboratory+mouse.">The anatomy of the laboratory mouse.</a> , (1976).</li><li>Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescent+indicators+in+living+mammals.">Bioluminescent indicators in living mammals.</a> Nature Med. 4, 245-247 (1998).</li><li>Ray, P., De, A., Min, J. J., Tsien, R. Y., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+tri-fusion+multimodality+reporter+gene+expression+in+living+subjects.">Imaging tri-fusion multimodality reporter gene expression in living subjects.</a> Cancer Res. 64, 1323-1330 (2004).</li><li>Huang, N. F., Lee, R. J., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+and+physical+regulation+of+stem+cells+and+progenitor+cells:+potential+for+cardiovascular+tissue+engineering.">Chemical and physical regulation of stem cells and progenitor cells: potential for cardiovascular tissue engineering.</a> Tissue Eng. 13, 1809-1823 (2007).</li><li>Cao, F., Lin, S., Xie, X., Ray, P., Patel, M., Zhang, X., Drukker, M., Dylla, S. J., Connolly, A. J., Chen, X., Weissman, I. L., Gambhir, S. S., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+visualization+of+embryonic+stem+cell+survival,+proliferation,+and+migration+after+cardiac+delivery.">In vivo visualization of embryonic stem cell survival, proliferation, and migration after cardiac delivery.</a> Circulation. 113, 1005-1114 (2006).</li><li>Wilson, K., Yu, J., Lee, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+bioluminescence+reporter+gene+imaging+of+human+embryonic+stem+cells.">In vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

CES es una fuente de células prometedoras para el tratamiento de la isquemia tisular, debido a su plasticidad de diferenciación y su capacidad de dar lugar a linajes de células que comprende las tres capas germinales, incluyendo las células endoteliales. Para superar los problemas éticos asociados con la CES, células madre pluripotentes inducidas (CMPi) puede ser una madre pluripotentes alternativa fuente de células que supera las preocupaciones éticas. Además de los CES, las células madre adultas, como las células progenitoras e...

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<td>Surgical tools</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe needle</td>
<td>Tool</td>
<td>BD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>28G insulin syringe is preferred</td>
</tr>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline </td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>D-luciferin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Biosynth International, Inc</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Prepare D-luciferin in advance into filtered stock solutions of 15 mg/mL in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>IVIS 200 Bioluminescence imaging system and acquisition software </td>
<td>Equipment</td>
<td>Xenogen Corporation</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
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embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia

Enfermedad arterial periférica (PAD) se debe a un estrechamiento de las arterias periféricas que irrigan sangre oxigenada y nutrientes a las piernas y los pies, esta patología provoca síntomas como la claudicación intermitente (dolor al caminar), dolorosas úlceras isquémicas, o incluso gangrena del miembro en peligro. Se cree generalmente que el endotelio vascular, una monocapa de células endoteliales, que invierte la superficie luminal de los vasos sanguíneos y linfáticos, juega un papel dominante en la homeostasis vascular y la regeneración vascular. Como resultado, las células madre basado en la regeneración del endotelio puede ser un enfoque prometedor para el tratamiento de PAD. En este vídeo, se demuestra el trasplante de células madre embrionarias (ESC)-derivados de las células endoteliales para el tratamiento de la isquemia hindimb unilateral como un modelo de PAD, seguido por el seguimiento no invasivo de homing de las células y la supervivencia de imágenes de bioluminiscencia. Los materiales y procedimientos específicos para la entrega de la celda y las imágenes se describen. Este protocolo sigue a otra publicación en la descripción de la inducción de isquemia extremidades inferiores por Niiyama et al 1.

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Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia

El procedimiento quirúrgico para el suministro de células madre embrionarias derivadas de las células endoteliales de las extremidades inferiores isquémicas se demuestra, con no invasiva de seguimiento por imágenes de bioluminiscencia.

Células madre embrionarias-las células endoteliales derivadas de tratamiento de la isquemia Miembro Posterior

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This ...

Research

JoVE Journal

Biology

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Propagación de la madre embrionarias humanas (ES) Células

Investigación

Biología

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Derivación de células madre hematopoyéticas de células madre embrionarias murinas

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivación de células estaminales embrionarias humanas por Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Probing for Mitochondrial Complex Activity in Human Embryonic Stem Cells

Sondeo de la actividad mitocondrial complejo en células estaminales embrionarias humanas

Mitochondria are cytoplasmic organelles that have a primary role in cellular metabolism and homeostasis, regulation of the cell signaling network, and ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Inmunoprecipitación de la cromatina de células estaminales embrionarias humanas

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

Modelo murino de isquemia Miembro Posterior

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping

Preparación Extienda los cromosomas de las células estaminales embrionarias para cariotipo

Although human embryonic stem cells (hESC) have been shown to present a stable diploid karyotype 1, many studies have reported that depending on culture ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

El aislamiento y la derivación de células embrionarias de ratón Germinal

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

La diferenciación de células madre embrionarias en los precursores de oligodendrocitos

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Efficient Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Motor Neurons

La diferenciación eficiente de las células madre embrionarias de ratón en neuronas motoras

Direct differentiation of embryonic stem (ES) cells into functional  motor neurons represents a promising resource to study disease mechanisms, to  screen ...