ELISPOT 分析：检测 IFN-- 分泌性细胞

资料来源：托尼娅·韦伯^1
1马里兰大学医学院微生物学和免疫学系，马里兰州巴尔的摩的马琳和斯图尔特·格林鲍姆综合癌症中心 21201

ELISPOT 是一种标准化的、可重复的检测，用于检测细胞免疫反应。该测定利用一种基于酶链接的免疫吸附测定（ELISA）方法检测单细胞免疫反应，这些反应可以通过斑点可视化，因此命名为ELISPOT。1983年，Czerkinsky首次将ELISPOT描述为一种列举产生抗原特异性免疫球蛋白（1）的B细胞杂交瘤数量的方法。同一组进一步开发了测定，以测量细胞因子产生T淋巴细胞的频率。现在，ELISPOT已成为在临床试验和疫苗候选中测量抗原特异性T细胞免疫的黄金标准。例如，在接种疫苗后或感染期间，血浆细胞和记忆B细胞分泌抗体，提供保护。通常，通过测量抗原特异性抗体的血清位子来评估这些B细胞反应。然而，这种类型的分析，通常由ELISA测量，可能不包括记忆B细胞，即使在没有可检测的血清抗体水平的情况下，也可能存在记忆B细胞。此外，循环记忆B细胞对于病原体重新暴露后观察到的快速保护性抗体反应非常重要，因此能够检测这些细胞至关重要。因此，为了清楚地评估抗原特异性记忆B细胞反应，应同时使用ELISA和ELISPOT（2）。

ELISPOT 测定使用含有膜衬里孔的板，这些孔被涂有抗体，以捕获感兴趣的分泌蛋白质。然后，板加载细胞和刺激，以诱导蛋白质生产。分泌的蛋白质被表面涂覆的抗体捕获。在适当的孵育时间后，细胞被移除，并且使用生物缩化抗体检测分泌的分子，该抗体是特定为不同表位，与捕获抗体相比。接下来，加入链球菌蛋白过氧化物酶，然后添加基板，允许检测斑点（图1）。这种测定的用量是，它允许定量出产生感兴趣的蛋白质的细胞数量。重要的是，人们可以评估产生特定蛋白质的细胞总数是否有变化，或者种群中的单个细胞是否产生更多的蛋白质。此外，它可以提供有关动力学的信息，并可用于评估与抗原特异性反应（抗原模拟）相关的整体免疫活化（米托根刺激）。ELISPOT测定将允许在线生成或抗原特异性激活后在300，000个细胞中检测一个活化细胞。

图 1：ELISPOT 协议概述。

这种测定的主要优点是它简单，协议相对简单明了。它不需要技术专长，b. 敏感性 - 它允许在单个细胞水平上检测免疫细胞，并且与其他方法（如流式细胞测量、c. 功能）相比，它只需要很少的细胞，它提供有关免疫的定量数据功能。

本实验演示了用于检测IFN-分泌-血细胞的ELISPOT协议，但如上所述，此测定也可用于评估B细胞（3）的抗体分泌。