免疫荧光显微镜：石蜡内嵌组织部分的免疫荧光染色

资料来源：托马斯·查^菲1，托马斯·^{格里菲斯2，3，4，}凯瑟琳·施韦特费^{格1，3，4
1}明尼苏达大学明尼阿波利斯分校实验室医学和病理学系，MN 55455
²明尼苏达大学泌尿科，明尼阿波利斯，MN 55455
³共济会癌症中心，明尼苏达大学明尼阿波利斯分校，MN 55455
⁴明尼苏达大学明尼阿波利斯分校免疫学中心，MN 55455

组织部分的病理分析可用于更好地了解正常组织结构，并有助于我们了解疾病机制。组织活检，无论是从患者还是从实验性体内模型，通常通过固定在甲醛或甲醛和嵌入石蜡中来保存。这允许长期存储和组织被分割。使用微缩图，将组织切成薄（5 μm）部分，并且这些截面粘附在玻璃玻片上。组织部分可以沾染抗体，从而检测组织部分的特定蛋白质。与荧光素（也称为氟铬）结合的抗体染色 - 当激光激发时以特定波长发出光的化合物 - 称为免疫荧光。检测部分内蛋白质的能力可以提供信息，如细胞类型异质性在组织内，激活特定信号通路，和生物标志物的表达。根据所使用的荧光光和可用于分析的显微镜类型，可以使用多种颜色，从而可以多路分析目标。

以下协议概述了石蜡嵌入式组织部分的免疫荧光染色所涉及的基本步骤。需要注意的是，该协议将不包括关于组织固定、石蜡嵌入过程或组织切片的任何细节。一旦组织被分割并放置在玻璃幻灯片上，它们就会通过一系列分级乙醇（EtOH）孵育物进行补水。这些部分用阻塞试剂孵育，以减少抗体与组织部分的非特异性结合。然后，用可能或可能不会直接标记荧光剂的原抗体孵育这些部分。如果原抗体没有直接标记，则用标有荧光剂的次级抗体孵育这些部分。不同的抗体可能需要不同的染色条件，因此包括优化抗体的建议。洗涤后去除所有未结合的抗体后，将幻灯片与含有DAPI的介质安装，以荧光标记细胞核。安装介质干燥后，可以使用显微镜使用激光对幻灯片进行成像，激光可以检测不同的荧光道。