免疫蛍光顕微鏡:パラフィン埋め込組織切片の免疫蛍光染色

ソース: トーマス・チャフィー¹, トーマス・S・グリフィス^2,3,4,キャサリン・L・シュヴェルトフェガー^1,3,4
1ミネソタ大学ミネソタ大学研究室医学病理学科,ミネアポリス,MN 55455
²ミネソタ大学泌尿器科,ミネアポリス,MN 55455
³ミネソタ大学、ミネアポリス、MN 55455
⁴ミネソタ大学免疫学センター,ミネアポリス,MN 55455

組織切片の病理学的解析は、正常な組織構造のより良い理解を得るために使用することができ、疾患のメカニズムの理解に貢献することができます。組織生検は、患者または生体内モデルの実験から、ホルマリンまたはパラホルムアルデヒドで固定し、パラフィンワックスに埋め込むことによって保存されることが多い。これは長期貯蔵およびティッシュが切除されることを可能にする。組織はマイクロトームを使用して薄い(5 μm)セクションに切断され、セクションはガラススライドに付着している。組織セクションは抗体で染色することができ、組織セクション内の特定のタンパク質の検出を可能にします。蛍光色素(フルオロクロムとも呼ばれる)に結合した抗体を用いた染色は、レーザーによって励起されたときに特定の波長で発光する化合物であり、免疫蛍光として知られている。セクション内のタンパク質を検出する機能は、組織内の細胞型の不均一性、特定のシグナル伝達経路の活性化、バイオマーカーの発現などの情報を提供できます。使用される蛍煙素や分析に利用できる顕微鏡の種類に応じて、複数の色を使用することができ、ターゲットの多重分析が可能です。

以下のプロトコルは、パラフィン埋め込組織セクションの免疫蛍光染色に関与する基本的なステップを概説する。このプロトコルは、組織の固定、パラフィン埋め込みのプロセス、または組織の断面に関する詳細を含まないことに注意することが重要です。組織が切り分けされ、ガラススライド上に置かれると、それらは一連の等級のエタノール(EtOH)インキュベーションを通して再水和される。セクションは、組織セクションへの抗体の非特異的結合を減少させるためにブロッキング試薬でインキュベートされる。その後、セクションは、蛍舞体で直接標識されてもよいし、そうでないかもしれない一次抗体でインキュベートされる。一次抗体が直接標識されていない場合、セクションは、フッ素で標識された二次抗体でインキュベートされます。異なる抗体は、異なる染色条件を必要とし、したがって、抗体の最適化のための提案が含まれる。すべての結合されていない抗体を除去するために洗浄した後、スライドは、核を蛍光標識するためにDAPIを含む媒体で取り付けられる。取り付け媒体が乾燥したら、異なる蛍光色素を検出できるレーザーを使用してスライドを画像化できます。