면역 형광 현미경 검사법: 파라핀이 내장 된 조직 절편의 면역 형광 염색

출처: 토마스 채피^1,토마스 에스 그리피스^2,3,4,캐스린 엘 슈베르트페거^1,3,4
1 미네소타 대학교 미니애폴리스 대학교, MN 55455
² 미네소타 대학교 비뇨기과, 미니애폴리스, MN 55455
³ Masonic 암 센터, 미네소타 대학, 미니애폴리스, MN 55455
⁴ 면역학 센터, 미네소타 대학, 미니애폴리스, MN 55455

조직 단면의 병리학적 분석은 정상적인 조직 구조에 대한 더 나은 이해를 얻고 질병의 메커니즘에 대한 우리의 이해에 기여하기 위해 사용될 수 있습니다. 조직 생검은 환자또는 생체 내 실험에서 종종 포름알데히드 또는 파라핀 왁스에 포함시킴으로써 보존됩니다. 이렇게 하면 장기 저장 및 조직을 단면화할 수 있습니다. 조직은 마이크로토메를 사용하여 얇은 (5 μm) 섹션으로 절단되고 단면도는 유리 슬라이드에 부착됩니다. 조직 섹션은 조직 섹션 내의 특정 단백질의 검출을 허용하는 항체로 얼룩질 수 있습니다. 형광에 결합 된 항체로 염색 (또한 형광으로 알려진) - 레이저에 의해 흥분 할 때 특정 파장에서 빛을 방출 하는 화합물 -면역 형광으로 알려져 있다. 단면 내에서 단백질을 검출하는 기능은 조직 내의 세포 유형 이질성, 특정 신호 경로의 활성화 및 바이오마커의 발현과 같은 정보를 제공할 수 있다. 사용된 형광과 분석에 사용할 수 있는 현미경의 유형에 따라 여러 색상을 사용할 수 있으며, 이를 통해 표적의 멀티플렉스 분석을 가능하게 합니다.

다음 프로토콜은 파라핀 임베디드 조직 섹션의 면역 형광 염색에 관여하는 기본적인 단계를 간략하게 설명합니다. 이 프로토콜은 조직의 고정, 파라핀 포함 과정 또는 조직의 단면에 대한 세부 사항을 포함하지 않는다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 조직이 단면화되고 유리 슬라이드에 놓이면 일련의 등급에 대한 에탄올 (EtOH) 배큐어를 통해 수화됩니다. 단면도는 조직 단면에 항체의 비특이적 결합을 감소시키기 위하여 차단 시약으로 배양됩니다. 그 때 단면도는 불소로 직접 표지될 지도 모르거나 아닐 지도 모르다 1 차적인 항체로 배양됩니다. 1차 항체가 직접 표지되지 않으면, 단면도는 불소로 표지된 이차 항체로 인큐베이션됩니다. 상이한 항체는 다른 염색 조건을 요구할 수 있고, 따라서 항체의 최적화를 위한 제안이 포함되어 있습니다. 모든 언바운드 항체를 제거하기 위해 세척한 후, 슬라이드는 DAPI를 함유한 미디어와 함께 장착되어 핵을 형광으로 표시합니다. 마운팅 미디어가 건조되면 슬라이드는 다른 형광을 감지 할 수있는 레이저현미경을 사용하여 이미지를 이미지화 할 수 있습니다.