순수 배양 및 줄무늬 평판배양: 혼합 검체에서 단일 박테리아 군집 분리

출처: 틸드 앤더슨^1,롤프 루드¹
¹ 임상 과학 룬드학과, 감염 의학 학과, 생물 의학 센터, 룬드 대학, 221 00 룬드, 스웨덴

겉보기에는 불가능한 미생물 생물 다양성은 약 1조 종의 공존하는 종(1,2)으로 정말 놀랍습니다. 특히 가혹한 기후, 인간의 위 (3) 또는 남극의 빙하 호수 (4)의 산성 환경 처럼, 특정 종에 의해 지배 될 수 있습니다., 박테리아는 일반적으로 혼합 된 문화에서 발견. 각 균주는 다른 (5)의 성장에 영향을 미칠 수 있기 때문에, "순수"(한 가지 유형으로만 구성)를 분리하고 육성하는 능력은 모두 임상 및 학술 환경에서 필수적이되고있다. 순수한 배양은 추가 유전 (6) 및 proteomic 검사 (7), 샘플 순도의 분석 및, 아마도 더 주목할 만한, 임상 샘플에서 전염하는 에이전트의 식별 및 특성을 가능하게합니다.

박테리아는 성장 요구 사항의 넓은 범위를 가지고 있으며, 까다로운 종과 까다로운 종 (8)을 모두 유지하기 위해 설계된 영양소 미디어의 수많은 유형이있다. 성장 매체는 액체 형태(국물로서) 또는 전형적으로 한천계(적조류에서 유래한 겔화제) 고체 형태로 제조될 수 있다. 국물에 직접 접종은 유전적으로 다양하거나 심지어 혼합 된 세균 인구를 생성할 위험을 수반하지만, 도금및 재 줄무늬는 각 세포가 매우 유사한 유전 적 메이크업을 가지고 있는 순수한 문화를 만듭니다. 줄무늬 플레이트 기술은 개별 세포를 서로 분리하는 것을 목표로 시료(도1)의점진적 희석을 기반으로 합니다. 미디어 및 지정된 환경에 의해 유지되는 모든 실행 가능한 세포(이하 콜로니 형성 유닛, CFU라고 함)는 이후에 이진 분열을 통해 딸 세포의 고립된 식민지를 발견할 수 있다. 세균성 지역 사회 내의 급속한 돌연변이 비율에도 불구하고, 이 세포 단은 일반적으로 복제로 간주됩니다. 이 인구를 수확하고 다시 줄무늬하면 후속 작업이 단일 세균 유형만 포함되도록 합니다.

그림 1: 줄무늬 플레이트는 원래 샘플의 점진적 희석을 기반으로 합니다. I) 접종은 처음에 지그재그 운동을 사용하여 분산되어 상대적으로 조밀한 세균 인구가 있는 영역을 만듭니다. II-IV) 줄무늬는 네 번째 사분면에 도달 할 때까지, 매번 멸균 접종 루프를 사용하여, 이전 영역에서 그려집니다. V) 플레이트 의 중간을 향한 최종 지그재그 동작은 무접종이 현저하게 희석된 영역을 형성하여 식민지가 서로 분리된 것처럼 보일 수 있게 합니다.

줄무늬 플레이트 기술은 선택적 및/또는 차동 매체의 사용과 결합될 수도 있습니다. 선택적 배지는 특정 유기체의 성장을 억제합니다(예를 들어 항생제의 첨가를 통해) 차등 배지는 전적으로 다른 구별하는 데 도움이됩니다(예를 들어 혈액 천식판에 용혈을 통해).

미생물학의 모든 작업의 기본은 무균 (멸균) 기술의 사용입니다. 위험한 긴장, 에어로졸 형성 및 장비/인력의 오염의 의도하지 않은 성장의 위험이 있기 때문에 모든 세균 문화는 잠재적으로 병원성으로 간주되어야 합니다. 이러한 위험을 최소화하기 위해 모든 미디어, 플라스틱, 금속 및 유리 제품은 일반적으로 사용 전후의 오토클레이브를 통해 멸균되어 약 121°C에서 고압 포화 증기를 적용하여 느린 세포를 효과적으로 제거합니다. 작업 공간은 일반적으로 에탄올을 사용하여 소독되어 사용 전과 이후에 모두 사용한다. 실험실 코트와 장갑은 항상 전염성 요원과 함께 작업하는 동안 착용됩니다.

1. 설정

모든 미생물은 위험한 것처럼 취급되어야 합니다. 항상 실험실 코트와 장갑을 착용하고 긴 머리를 묶고 상처가 특히 잘 보호되도록하십시오.
70% 에탄올을 사용하여 살균하여 작업 공간을 준비하십시오.
한천 플레이트, 시료 용액, 미리 멸균된 플라스틱 접종 루프 상자 또는 금속 루프와 분센 불꽃이 가까이 있는지 확인하십시오. 일회용 플라스틱 루프는 ...

초기 줄무늬 플레이트는 상이한 유전적 메이크업을 가진 세포로부터 유래되는 콜로니를 포함하거나(샘플 순도에 따라 다름)를 상이한 세균종(도2A)으로부터포함할 수 있다.

모든 단위가 일반적인 모성 세포로부터 파생되는 단일 식민지의 후속 격리를 통해, 두 번째 줄무늬 절차는 상대적으?...

순수한 세균 성 식민지를 얻고 육성 하는 능력은 필수적이다, 임상 및 학술 설정모두에서. 줄무늬 도금은 상대적으로 복제 세포 집단의 격리를 가능하게, 공유 CFU에서 유래, 진단 중 또는 격리의 추가 특성에 대한 특정 관심있을 수 있습니다. 시료는 적합한 한천 계 영양 매체에 줄무늬가 있고 식민지가 눈에 띄게 될 때까지 배양됩니다. 고립된 식민지는 이후에 수확되어 두 번째 접시에 다시 줄지?...

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