Name: microcontact printing of proteins for cell biology
Uploaded: 2008-12-05T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology at JoVE.com

1. De voorbereiding van oplossingen en materialen Deze stappen moeten worden uitgevoerd enkele dagen op voorhand. <ol><li> Dekglaasjes. Dekglaasjes werden schoongemaakt door onderdompeling gedurende 10 minuten in een oplossing van Linbro 7X detergent: water, gemengd met een 1: 3 verhouding en verhit, onder roeren, totdat duidelijk. Dekglaasjes werden uitgebreid gespoeld met gedemineraliseerd water, en vervolgens gebakken bij 450 ° C gedurende 6 uur. Het laden van coverslips in keramische vlekken rekken (zie r...

<ol>
	<li>Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+control+of+cell+life+and+death.">Geometric control of cell life and death.</a> Science. 276, 1425-1425 (1997).</li><li>Kumar, A., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Features+of+Gold+Having+Micrometer+to+Centimeter+Dimensions+can+be+Formed+Through+a+Combination+of+Stamping+with+an+Elastomeric+Stamp+and+an+Alkanethiol+"Ink"+Followed+by+Chemical+Etching.">Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol "Ink" Followed by Chemical Etching.</a> Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).</li><li>St. John, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+Glial+Cell+Attachment+to+Microcontact-printed+Surfaces.">Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces.</a> Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).</li><li>Kam, L., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+to+protein-micropatterned-supported+lipid+bilayer+membranes.">Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).</li><li>Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterning+Hybrid+Surfaces+of+Proteins+and+Supported+Lipid+Bilayers.">Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers.</a> Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).</li><li>Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micropatterning+of+costimulatory+ligands+enhances+CD4++T+cell+function.">Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).</li><li>Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+presentation+of+L1+and+N-cadherin+in+multicomponent,+microscale+patterns+differentially+direct+neuron+function+in+vitro.">Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).</li></ol>

De microcontact drukproces is conceptueel eenvoudig en zeer robuust, dat is toegepast op patronen een brede waaier van moleculen op een verscheidenheid van substraten. Echter, dit proces blijft iets van een kunst. De specifieke geometrie van het patroon te creëren, eiwit te zijn patroon, toegepast gewicht en coating / stempelen voorwaarden alle van invloed op de kwaliteit stampen. Bijvoorbeeld, te weinig gewicht, toegepast op de grote mogelijkheden, resulteert vaak in hiaten in het patroon zoals te zien in de rechterbovenhoek logo van Fig....

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Plasma Cleaner</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harrick Scientific Products, Inc.</td>
<td>PDC-32G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Desiccator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>5315-0150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10010-072</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protein labeling kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A30006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibronectin </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F2006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Staining rack</td>
<td>Reagent</td>
<td>Thomas Scientific</td>
<td>8542E40</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-544-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ellsworth Adhesives</td>
<td>184 Sil Elast Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diffraction Grating</td>
<td>Reagent</td>
<td>Edmund Scientific</td>
<td>3040267</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

microcontact printing of proteins for cell biology

De mogelijkheid om patroon eiwitten en andere biomoleculen op substraten is belangrijk voor het vastleggen van de ruimtelijke complexiteit van het extracellulaire milieu. Ontwikkeling van microcontact afdrukken door de Whitesides groep (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"&gt; Http://gmwgroup.harvard.edu/</a&gt;) In het midden van de jaren 1990 revolutionalized dit gebied door het maken van micro-elektronica / microfabricage technieken toegankelijk voor laboratoria gericht op de life sciences. De eerste implementaties van deze methode gebruikte polydimethylsiloxaan (PDMS) postzegels om patronen van gefunctionaliseerde chemicaliën te maken op materiaaloppervlakken<sup&gt; 1</sup&gt;. Sindsdien zijn er een reeks van innovatieve benaderingen zijn ontwikkeld op patroon andere moleculen, zoals eiwitten<sup&gt; 2</sup&gt;. Deze video toont de basis-proces van het maken PDMS stempels en gebruikt ze om patroon eiwitten, als deze stappen zijn moeilijk om nauwkeurig te drukken in woorden. Wij richten ons op patronen van de extracellulaire matrix eiwit fibronectine op glas dekglaasjes als een specifiek voorbeeld van patronen. Een belangrijk onderdeel van het microcontact drukproces is een topologische meester, van waaruit de postzegels worden gegoten, de omhoog en omlaag regio&#39;s van de meester worden weerspiegeld in de stempel en bepalen de uiteindelijke patroon. Typisch, een meester bestaat uit een silicium wafer bedekt met fotolak en daarna patroon door fotolithografie, zoals hier gebeurt. Creatie van masters met een specifiek patroon vereist gespecialiseerde apparatuur, en wordt het best benaderd in overleg met een fabricage centrum of faciliteit. Echter, bijna elke ondergrond met topologie worden gebruikt als een master, zoals plastic buigingsroosters (zie Reagentia voor een voorbeeld), en dergelijke toevallige masters bieden direct beschikbaar, eenvoudige patronen. Dit protocol begint op het punt van het hebben van een meester in de hand.

Watch this Scientific Journal Video about Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology at JoVE.com

Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology

Microcontact afdrukken wordt op grote schaal gebruikt voor het patroon eiwitten en andere moleculen op materiaal oppervlakken. Tonen we de basisstappen van dit proces, stempelen patronen van fibronectine op glas.

Microcontact afdrukken van eiwitten voor Celbiologie

The ability to pattern proteins and other biomolecules onto substrates is important for capturing the spatial complexity of the extracellular environment. ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Gradient-generating Microfluidic Device for Cell Biology

Een Gradient-genererende Microfluïdische Device for Cell Biology

 The fabrication and operation of a gradient-generating microfluidic device for studying cellular behavior is described.  A microfluidic platform is an ...

Micro-scale Engineering for Cell Biology

Micro-scale Engineering voor Celbiologie

Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

Het beoordelen van twee-dimensionale Kristallisatie Trials van kleine membraaneiwitten voor Structurele Biologie Studies van Electron Kristallografie

Electron crystallography has evolved as a method that can be used either alternatively or in combination with three-dimensional crystallization and X-ray ...

Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging

Fluorescerende Labeling van COS-7 tot expressie SNAP-tag fusieproteïnen voor live cell imaging

SNAP-tag and CLIP-tag protein labeling systems enable the specific, covalent attachment of molecules, including fluorescent dyes, to a protein of interest ...

Protein Membrane Overlay Assay: A Protocol to Test Interaction Between Soluble and Insoluble Proteins in vitro

Protein Membrane Overlay Assay: A Protocol to Test Interaction Between Soluble and Insoluble Proteins in vitro

Eiwit Membraan Overlay Test: een protocol om interactie tussen oplosbare en onoplosbare eiwitten Test In vitro</em

Validating interactions between different proteins is vital for investigation of their biological functions on the molecular level.  There are several ...

Pull-down of Calmodulin-binding Proteins

Pull-down van calmoduline-bindende eiwitten

Calcium (Ca2+) is an ion vital in regulating cellular function through a variety of mechanisms. Much of Ca2+ signaling is mediated through the ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

Gemodificeerde gist-twee-hybride systeem aan eiwitten Interactie met de groeifactor progranuline identificeren

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Cell Tracking Using Photoconvertible Proteins During Zebrafish Development

Mobiele Tracking Met behulp van Photoconvertible eiwitten tijdens ontwikkeling van de zebravis

Embryogenesis is a dynamic process that is best studied by using techniques that allow the documentation of developmental changes in vivo. The use of ...

The Use of Chemostats in Microbial Systems Biology

Het gebruik van chemostaten in Microbiële Systems Biology

Cells regulate their rate of growth in response to signals from the external world. As the cell grows, diverse cellular processes must be coordinated ...

Protocols for Implementing an Escherichia coli Based TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

Protocols for Implementing an Escherichia coli Based TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

Protocollen voor implementatie van een<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Op basis TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

Ideal cell-free expression systems can theoretically emulate an in vivo cellular environment in a controlled in vitro platform.1 This is useful for ...