Name: microcontact printing of proteins for cell biology
Uploaded: 2008-12-05T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology at JoVE.com

1. ההכנה של פתרונות וחומרים פעולות אלה צריכות להתבצע מספר ימים מראש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זכוכית coverslips. Coverslips נוקו על ידי טבילה למשך 10 דקות לתוך תמיסה של חומר ניקוי 7x Linbro: מים, מעורבות בבית 1: 3 יחס ומחוממת, עם ערבוב, ?...

<ol>
	<li>Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+control+of+cell+life+and+death.">Geometric control of cell life and death.</a> Science. 276, 1425-1425 (1997).</li><li>Kumar, A., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Features+of+Gold+Having+Micrometer+to+Centimeter+Dimensions+can+be+Formed+Through+a+Combination+of+Stamping+with+an+Elastomeric+Stamp+and+an+Alkanethiol+"Ink"+Followed+by+Chemical+Etching.">Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol "Ink" Followed by Chemical Etching.</a> Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).</li><li>St. John, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+Glial+Cell+Attachment+to+Microcontact-printed+Surfaces.">Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces.</a> Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).</li><li>Kam, L., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+to+protein-micropatterned-supported+lipid+bilayer+membranes.">Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).</li><li>Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterning+Hybrid+Surfaces+of+Proteins+and+Supported+Lipid+Bilayers.">Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers.</a> Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).</li><li>Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micropatterning+of+costimulatory+ligands+enhances+CD4++T+cell+function.">Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).</li><li>Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+presentation+of+L1+and+N-cadherin+in+multicomponent,+microscale+patterns+differentially+direct+neuron+function+in+vitro.">Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).</li></ol>

תהליך ההדפסה microcontact היא פשוטה מבחינה מושגית חזקים מאוד, לאחר הוחל על דפוסים מגוון רחב של מולקולות על מגוון מצעים. עם זאת, תהליך זה נשאר משהו של האמנות. הגיאומטריה מסוים של דפוס להיווצר, חלבון להיות בדוגמת, משקל מוחל, ציפוי / הטבעה כל התנאים להשפיע על איכות הטבעה. לדוגמה, גם משקל קטן...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Plasma Cleaner</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harrick Scientific Products, Inc.</td>
<td>PDC-32G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Desiccator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>5315-0150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10010-072</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protein labeling kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A30006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibronectin </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F2006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Staining rack</td>
<td>Reagent</td>
<td>Thomas Scientific</td>
<td>8542E40</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-544-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ellsworth Adhesives</td>
<td>184 Sil Elast Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diffraction Grating</td>
<td>Reagent</td>
<td>Edmund Scientific</td>
<td>3040267</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

microcontact printing of proteins for cell biology

היכולת חלבונים דפוס ביומולקולות אחרים על גבי מצעים חשוב לתפוס את המורכבות של הסביבה המרחבית תאיים. פיתוח והדפסה microcontact ידי קבוצת Whitesides (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"&gt; Http://gmwgroup.harvard.edu/</a&gt;) באמצע 1990 revolutionalized בשדה זה על ידי ביצוע המיקרואלקטרוניקה / טכניקות microfabrication נגיש מעבדות מתמקדת במדעי החיים. יישום ראשוני של שיטה זו בשימוש polydimethylsiloxane (PDMS) בולים ליצור דפוסים של כימיקלים פונקציונליות על משטחים חומר<sup&gt; 1</sup&gt;. מאז, מגוון של גישות חדשניות פותחו מולקולות דפוס אחרים, לרבות חלבונים<sup&gt; 2</sup&gt;. וידאו זה מדגים את התהליך הבסיסי של יצירת בולים PDMS, ומשתמשת בהם כדי חלבונים דפוס, כמו צעדים אלה קשה לבטא במדויק במילים. אנו מתמקדים דפוסים תאי מטריקס החלבון פיברונקטין על coverslips זכוכית כדוגמה ספציפית של דפוסים. מרכיב חשוב בתהליך ההדפסה microcontact הוא אמן טופולוגי, שממנו בולים נוצקו; האזורים הרים והוריד של המאסטר משתקפים אל הבול ולהגדיר את הדפוס הסופי. בדרך כלל, מאסטר מורכב סיליקון ופל מצופה photoresist ואז בדוגמת ידי photolithography, כפי שנעשה כאן. יצירה של אדונים המכיל דפוס מסוים דורש ציוד מיוחד, והוא ניגש הטוב בהתייעצות עם מרכז ייצור או מתקן. עם זאת, כמעט כל מצע עם טופולוגיה יכול לשמש אמן, כגון gratings עקיפה פלסטיק (ראו למשל ריאגנטים אחד), האדונים מקרית כזה לספק זמינים, דפוסי פשוטה. פרוטוקול זה מתחיל בנקודה שיש מאסטר ביד.

Watch this Scientific Journal Video about Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology at JoVE.com

Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology

הדפסה Microcontact נעשה שימוש נרחב על חלבונים ומולקולות אחרות דפוס על משטחי חומר. אנו מדגימים את השלבים הבסיסיים של תהליך זה, ביול דפוסים של פיברונקטין על זכוכית.

Microcontact הדפסה של חלבונים עבור ביולוגיה של התא

The ability to pattern proteins and other biomolecules onto substrates is important for capturing the spatial complexity of the extracellular environment. ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Gradient-generating Microfluidic Device for Cell Biology

התקן Gradient מניבות Microfluidic עבור ביולוגיה של התא

 The fabrication and operation of a gradient-generating microfluidic device for studying cellular behavior is described.  A microfluidic platform is an ...

Micro-scale Engineering for Cell Biology

מיקרו בקנה מידה הנדסה לביולוגיה של התא

Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

הערכת דו מימדי ניסויים התגבשות של חלבונים בממברנה קטנים ללימודי לביולוגיה מבנית על ידי קריסטלוגרפיה אלקטרונים

Electron crystallography has evolved as a method that can be used either alternatively or in combination with three-dimensional crystallization and X-ray ...

Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging

תיוג פלורסנט של COS-7-SNAP הבעת תג חלבונים Fusion עבור דימות תא חי

SNAP-tag and CLIP-tag protein labeling systems enable the specific, covalent attachment of molecules, including fluorescent dyes, to a protein of interest ...

Protein Membrane Overlay Assay: A Protocol to Test Interaction Between Soluble and Insoluble Proteins in vitro

Protein Membrane Overlay Assay: A Protocol to Test Interaction Between Soluble and Insoluble Proteins in vitro

חלבון ממברנה Assay Overlay: פרוטוקול בדיקת אינטראקציה בין חלבונים מסיסים ובחלקם לא מסיסים במבחנה</em

Validating interactions between different proteins is vital for investigation of their biological functions on the molecular level.  There are several ...

Pull-down of Calmodulin-binding Proteins

הנפתח של calmodulin מחייב חלבונים

Calcium (Ca2+) is an ion vital in regulating cellular function through a variety of mechanisms. Much of Ca2+ signaling is mediated through the ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

השתנה שמרים-Two-Hybrid System כדי לזהות חלבונים אינטראקציה עם גורם הגדילה Progranulin

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Cell Tracking Using Photoconvertible Proteins During Zebrafish Development

מעקב נייד באמצעות חלבוני Photoconvertible במהלך פיתוח דג זברה

Embryogenesis is a dynamic process that is best studied by using techniques that allow the documentation of developmental changes in vivo. The use of ...

The Use of Chemostats in Microbial Systems Biology

השימוש בChemostats בביולוגיה מיקרוביאלית מערכות

Cells regulate their rate of growth in response to signals from the external world. As the cell grows, diverse cellular processes must be coordinated ...

Protocols for Implementing an Escherichia coli Based TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

Protocols for Implementing an Escherichia coli Based TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

פרוטוקולים ליישום<em&gt; חיידקי Escherichia</emמערכת&gt; בהתבסס TX-TL סלולרי ללא ביטוי של ביולוגיה סינתטית

Ideal cell-free expression systems can theoretically emulate an in vivo cellular environment in a controlled in vitro platform.1 This is useful for ...