Name: microcontact printing of proteins for cell biology
Uploaded: 2008-12-05T00:00:00
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1. Preparazione delle soluzioni e dei materiali Questi passaggi devono essere effettuati diversi giorni di anticipo. <ol><li> Vetrini coprioggetto. Coprioggetto sono stati puliti per immersione per 10 minuti in una soluzione di detersivo Linbro 7X: acqua, mescolata ad un 1: 3 ratio e riscaldato, mescolando, fino a non toccare. Coprioggetto sono stati ampiamente sciacquati con acqua deionizzata, e poi cotto al forno a 450 ° C per 6 ore. Caricamento coprioggetto in rack colorazione ceramica (vedi reagenti) semp...

<ol>
	<li>Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+control+of+cell+life+and+death.">Geometric control of cell life and death.</a> Science. 276, 1425-1425 (1997).</li><li>Kumar, A., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Features+of+Gold+Having+Micrometer+to+Centimeter+Dimensions+can+be+Formed+Through+a+Combination+of+Stamping+with+an+Elastomeric+Stamp+and+an+Alkanethiol+"Ink"+Followed+by+Chemical+Etching.">Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol "Ink" Followed by Chemical Etching.</a> Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).</li><li>St. John, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+Glial+Cell+Attachment+to+Microcontact-printed+Surfaces.">Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces.</a> Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).</li><li>Kam, L., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+to+protein-micropatterned-supported+lipid+bilayer+membranes.">Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).</li><li>Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterning+Hybrid+Surfaces+of+Proteins+and+Supported+Lipid+Bilayers.">Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers.</a> Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).</li><li>Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micropatterning+of+costimulatory+ligands+enhances+CD4++T+cell+function.">Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).</li><li>Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+presentation+of+L1+and+N-cadherin+in+multicomponent,+microscale+patterns+differentially+direct+neuron+function+in+vitro.">Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).</li></ol>

Il processo di stampa microcontact è concettualmente semplice e molto robusto, essendo stata applicata a patterning una vasta gamma di molecole su una varietà di substrati. Tuttavia, questo processo rimane qualcosa di un&#39;arte. La geometria specifica del modello da creare, le proteine ​​per essere modellata, peso applicato, e di rivestimento / condizioni di stampaggio tutti influiscono sulla qualità di stampaggio. Per esempio, troppo poco peso, applicata a funzioni di grandi dimensioni, si traduce spesso in lacune nel modello di c...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Plasma Cleaner</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harrick Scientific Products, Inc.</td>
<td>PDC-32G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Desiccator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>5315-0150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10010-072</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protein labeling kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A30006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibronectin </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F2006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Staining rack</td>
<td>Reagent</td>
<td>Thomas Scientific</td>
<td>8542E40</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-544-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ellsworth Adhesives</td>
<td>184 Sil Elast Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diffraction Grating</td>
<td>Reagent</td>
<td>Edmund Scientific</td>
<td>3040267</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

microcontact printing of proteins for cell biology

La capacità di proteine ​​modello e altre biomolecole su substrati è importante per catturare la complessità spaziale dell&#39;ambiente extracellulare. Sviluppo della stampa microcontatto dal gruppo Whitesides (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"&gt; Http://gmwgroup.harvard.edu/</a&gt;) A metà degli anni 1990 rivoluzionato questo campo facendo microelettronica / tecniche di microfabbricazione accessibile ai laboratori focalizzati sulle scienze della vita. Implementazioni iniziali di questo metodo utilizzato polidimetilsilossano (PDMS) francobolli per creare modelli di prodotti chimici sulle superfici funzionalizzate materiale<sup&gt; 1</sup&gt;. Da allora, una serie di approcci innovativi sono stati sviluppati per altre molecole modello, comprese le proteine<sup&gt; 2</sup&gt;. Questo video mostra il processo di base della creazione di timbri PDMS e li utilizza per le proteine ​​modello, in quanto questi passaggi sono difficili da esprimere con precisione a parole. Ci concentriamo su patterning la proteina della matrice extracellulare fibronectina sul coprioggetto di vetro come un esempio specifico di patterning. Una componente importante del processo di stampa microcontact è un maestro topologica, da cui sono espressi i francobolli, le regioni sollevato e abbassato del maestro si specchiano nel timbro e definire il modello finale. Tipicamente, un maestro è costituito da un wafer di silicio ricoperto di photoresist e poi modellata da fotolitografia come è fatto qui. Creazione di master contenente un modello specifico richiede attrezzature specializzate, ed è meglio affrontato in collaborazione con un centro di fabbricazione o struttura. Tuttavia, quasi ogni tipo di superficie con topologia può essere utilizzato come un maestro, come reticoli di diffrazione di plastica (vedi Reagenti per un esempio), e tali maestri fortuita fornire prontamente disponibili, i modelli semplici. Questo protocollo inizia al punto di avere un master in mano.

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Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology

Stampa microcontact viene utilizzato estensivamente alle proteine ​​modello e altre molecole sulle superfici dei materiali. Dimostriamo i passaggi fondamentali di questo processo, stampaggio modelli di fibronectina su vetro.

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Stampa microcontatto di proteine ​​per Cell Biology

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