Name: microcontact printing of proteins for cell biology
Uploaded: 2008-12-05T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology at JoVE.com

1。ソリューションと材料の準備これらの手順は、事前に数日間行ってください。 <ol><li>ガラス製カバースリップ。透明になるまで、攪拌しながら、3比及び加熱：水1で混合：カバーグラスはLinbro 7Xの洗剤の溶液中に10分間浸漬することにより洗浄した。カバースリップを脱イオン水で広範に洗浄し、その後6時間450℃で焼成した。セラミック染色ラックにカバースリップをロードすると...

<ol>
	<li>Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+control+of+cell+life+and+death.">Geometric control of cell life and death.</a> Science. 276, 1425-1425 (1997).</li><li>Kumar, A., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Features+of+Gold+Having+Micrometer+to+Centimeter+Dimensions+can+be+Formed+Through+a+Combination+of+Stamping+with+an+Elastomeric+Stamp+and+an+Alkanethiol+"Ink"+Followed+by+Chemical+Etching.">Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol "Ink" Followed by Chemical Etching.</a> Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).</li><li>St. John, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+Glial+Cell+Attachment+to+Microcontact-printed+Surfaces.">Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces.</a> Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).</li><li>Kam, L., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+to+protein-micropatterned-supported+lipid+bilayer+membranes.">Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).</li><li>Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterning+Hybrid+Surfaces+of+Proteins+and+Supported+Lipid+Bilayers.">Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers.</a> Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).</li><li>Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micropatterning+of+costimulatory+ligands+enhances+CD4++T+cell+function.">Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).</li><li>Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+presentation+of+L1+and+N-cadherin+in+multicomponent,+microscale+patterns+differentially+direct+neuron+function+in+vitro.">Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).</li></ol>

マイクロコンタクトプリンティングのプロセスは、パターニング基板のさまざまな分子の広い範囲をに適用されたこと、概念的に単純で非常に堅牢です。しかし、このプロセスはアートのようなもののまま。特定の作成されるパターンの形状、パターン化される蛋白質、適用される重量、およびコーティング/プレス条件は、すべてのスタンプ品質に影響を与えます。たとえば、しばしば大規模な機能を、図...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Plasma Cleaner</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harrick Scientific Products, Inc.</td>
<td>PDC-32G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Desiccator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>5315-0150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10010-072</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protein labeling kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A30006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibronectin </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F2006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Staining rack</td>
<td>Reagent</td>
<td>Thomas Scientific</td>
<td>8542E40</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-544-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ellsworth Adhesives</td>
<td>184 Sil Elast Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diffraction Grating</td>
<td>Reagent</td>
<td>Edmund Scientific</td>
<td>3040267</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

microcontact printing of proteins for cell biology

基板上へのパターンのタンパク質やその他の生体分子への能力は、細胞外環境の空間的な複雑さを捕捉するために重要です。ホワイトサイズグループによるマイクロコンタクトプリンティングの開発（<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"&gt; http://gmwgroup.harvard.edu/</a&gt;）は、1990年代半ばにマイクロエレクト​​ロニクス/ライフサイエンスに焦点を当てた研究室へのアクセス可能な微細加工技術を加えることによって、このフィールドをrevolutionalized。ポリジメチルシロキサン（PDMS）スタンプは、材料表面上の官能化学物質のパターンを作成するために使用されるこのメソッドの初期実装<sup&gt; 1</sup&gt;。それ以来、革新的なアプローチの範囲は、タンパク質を含む、パターンの他の分子に開発されている<sup&gt; 2</sup&gt;。このビデオでは、PDMSスタンプを作成するための基本的なプロセスを示しており、これらの手順が正確に言葉で表現するのは困難であるため、パターンの蛋白質にそれらを使用しています。我々は、パターン形成、パターニングの具体例として、ガラス製カバースリップ上に細胞外マトリックスタンパク質のフィブロネクチンに焦点を当てる。マイクロコンタクトプリンティングのプロセスの重要な構成要素は、スタンプがキャストされ、そこから位相的なマスター、です;マスターの昇降領域は、タイムスタンプにミラーリングして、最終的なパターンを定義している。一般的に、マスターはここで行われているように、フォトリソグラフィによってパターニングしてフォトレジストでコーティングし、シリコンウェハから構成されています。特定のパターンを含むマスターの作成には特殊な装置を必要とし、最高の製造センターや施設との協議に近づいている。しかし、トポロジーを持つほぼすべての基板は、プラスチック製の回折格子のようなマスター、（一例のための試薬を参照）として使用し、そしてそのような偶然のマスターは容易に利用できる、単純なパターンを提供することができます。このプロトコルは、手でマスターを持つことのポイントから開始されます。

Watch this Scientific Journal Video about Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology at JoVE.com

Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology

マイクロコンタクトプリンティングは、材料の表面にパターンの蛋白質と他の分子に広く使用されています。我々は、ガラス上にフィブロネクチンのパターンをスタンプする、このプロセスの基本的な手順を示します。

細胞生物学のためのタンパク質のマイクロコンタクトプリンティング

The ability to pattern proteins and other biomolecules onto substrates is important for capturing the spatial complexity of the extracellular environment. ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Gradient-generating Microfluidic Device for Cell Biology

細胞生物学の勾配を生むマイクロ流体デバイス

 The fabrication and operation of a gradient-generating microfluidic device for studying cellular behavior is described.  A microfluidic platform is an ...

Micro-scale Engineering for Cell Biology

細胞生物学のためのマイクロスケールのエンジニアリング

Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

電子線結晶学による構造生物学研究用小型膜タンパク質の二次元結晶化トライアルの評価

Electron crystallography has evolved as a method that can be used either alternatively or in combination with three-dimensional crystallization and X-ray ...

Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging

COS - 7の蛍光標識は、生細胞イメージングのためにSNAP - Tag融合タンパク質を発現する

SNAP-tag and CLIP-tag protein labeling systems enable the specific, covalent attachment of molecules, including fluorescent dyes, to a protein of interest ...

Protein Membrane Overlay Assay: A Protocol to Test Interaction Between Soluble and Insoluble Proteins in vitro

Protein Membrane Overlay Assay: A Protocol to Test Interaction Between Soluble and Insoluble Proteins in vitro

タンパク質のメンブレンオーバーレイアッセイ：可溶性および不溶性タンパク質間の相互作用をテストするためのプロトコル in vitroで</em

Validating interactions between different proteins is vital for investigation of their biological functions on the molecular level.  There are several ...

Pull-down of Calmodulin-binding Proteins

プルダウンカルモジュリン結合タンパク質の

Calcium (Ca2+) is an ion vital in regulating cellular function through a variety of mechanisms. Much of Ca2+ signaling is mediated through the ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

成長因子Progranulinと相互作用するタンパク質を識別するように変更酵母ツーハイブリッドシステム

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Cell Tracking Using Photoconvertible Proteins During Zebrafish Development

ゼブラフィッシュの開発時Photoconvertibleタンパク質を用いた細胞トラッキング

Embryogenesis is a dynamic process that is best studied by using techniques that allow the documentation of developmental changes in vivo. The use of ...

The Use of Chemostats in Microbial Systems Biology

微生物システム生物学のケモスタットの使用

Cells regulate their rate of growth in response to signals from the external world. As the cell grows, diverse cellular processes must be coordinated ...

Protocols for Implementing an Escherichia coli Based TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

Protocols for Implementing an Escherichia coli Based TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

実装するためのプロトコル<em&gt;エシェリヒア·コリ</em合成生物学のための&gt;に基づくTX-TLの無細胞発現系

Ideal cell-free expression systems can theoretically emulate an in vivo cellular environment in a controlled in vitro platform.1 This is useful for ...