Name: microcontact printing of proteins for cell biology
Uploaded: 2008-12-05T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology at JoVE.com

1. Beredning av lösningar och material Dessa åtgärder bör utföras flera dagar i förväg. <ol><li> Glas täckglas. Täckglas städades genom nedsänkning i 10 minuter i en lösning av Linbro 7X rengöringsmedel: vatten, blandat med en 1: 3 ratio och värme, med omrörning tills klart. Täckglas var sköljas mycket med avjoniserat vatten och sedan bakas i 450 ° C i 6 timmar. Laddar täckglas i keramiska färgning rack (se reagenser) förenklat denna process. </li><li> Protein lösning för stämpling. Rek...

<ol>
	<li>Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+control+of+cell+life+and+death.">Geometric control of cell life and death.</a> Science. 276, 1425-1425 (1997).</li><li>Kumar, A., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Features+of+Gold+Having+Micrometer+to+Centimeter+Dimensions+can+be+Formed+Through+a+Combination+of+Stamping+with+an+Elastomeric+Stamp+and+an+Alkanethiol+"Ink"+Followed+by+Chemical+Etching.">Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol "Ink" Followed by Chemical Etching.</a> Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).</li><li>St. John, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+Glial+Cell+Attachment+to+Microcontact-printed+Surfaces.">Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces.</a> Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).</li><li>Kam, L., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+to+protein-micropatterned-supported+lipid+bilayer+membranes.">Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).</li><li>Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterning+Hybrid+Surfaces+of+Proteins+and+Supported+Lipid+Bilayers.">Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers.</a> Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).</li><li>Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micropatterning+of+costimulatory+ligands+enhances+CD4++T+cell+function.">Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).</li><li>Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+presentation+of+L1+and+N-cadherin+in+multicomponent,+microscale+patterns+differentially+direct+neuron+function+in+vitro.">Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).</li></ol>

Den microcontact tryckprocessen är konceptuellt enkel och mycket robust, efter att ha tillämpats på mönstring ett brett spektrum av molekyler på olika substrat. Dock fortfarande processen något av en konst. Den specifika geometri mönstret som ska skapas, protein vara mönstrade, tillämpas vikt och beläggning / stämpling förhållanden påverkar alla stämpling kvalitet. Till exempel, för lite vikt, tillämpas på stora drag, ofta resulterar i luckor i mönster som kan ses i övre högra logotyp FIG. 1A. Omvänt kommer för mycket...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Plasma Cleaner</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harrick Scientific Products, Inc.</td>
<td>PDC-32G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Desiccator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>5315-0150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10010-072</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protein labeling kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A30006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibronectin </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F2006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Staining rack</td>
<td>Reagent</td>
<td>Thomas Scientific</td>
<td>8542E40</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-544-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ellsworth Adhesives</td>
<td>184 Sil Elast Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diffraction Grating</td>
<td>Reagent</td>
<td>Edmund Scientific</td>
<td>3040267</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

microcontact printing of proteins for cell biology

Förmågan att mönstret proteiner och andra biomolekyler på substrat är viktigt för att fånga den rumsliga komplexiteten i den extracellulära miljön. Utveckling av microcontact utskrift av Whitesides gruppen (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"&gt; Http://gmwgroup.harvard.edu/</a&gt;) I mitten av 1990-talet revolutionerat detta område genom att göra mikroelektronik / mikrofabrikation tekniker tillgänglig för laboratorier inriktade på livsvetenskaperna. Inledande implementationer av denna metod använts Polydimetylsiloxan (PDMS) stämplar för att skapa mönster av functionalized kemikalier på materialytor<sup&gt; 1</sup&gt;. Sedan dess har en rad innovativa strategier tagits fram för att mönstret andra molekyler inklusive proteiner<sup&gt; 2</sup&gt;. Denna video visar den grundläggande processen för att skapa PDMS frimärken och använder dem för att mönster proteiner, eftersom dessa åtgärder är svårt att exakt uttrycka i ord. Vi fokuserar på mönstring den extracellulära matrisen proteinet fibronektin på glas täckglas som ett konkret exempel på mönstring. En viktig komponent i microcontact tryckprocessen är en topologisk mästare, från vilken frimärkena är gjutna, den höjs och sänks regioner befälhavare speglas i den stämpeln och definiera den slutliga mönstret. Normalt består en mästare på en kiselskiva belagda med fotoresist och sedan mönstrade av fotolitografi, som görs här. Skapande av mästare som innehåller ett visst mönster kräver specialiserad utrustning och är bäst närmade i samråd med en tillverkning center eller anläggning. Däremot kan nästan alla substrat med topologi kan användas som en mästare, som plast diffraktion galler (se Reagens för ett exempel), och sådana serendipitous mästare ger lätt tillgängliga, enkla mönster. Detta protokoll börjar vid poängen med att ha en mästare i handen.

Watch this Scientific Journal Video about Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology at JoVE.com

Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology

Microcontact utskrift används i stor utsträckning att mönstret proteiner och andra molekyler på material ytor. Vi visar de grundläggande stegen i denna process, prägling mönster av fibronektin på glas.

Microcontact utskrift av proteiner för cellbiologi

The ability to pattern proteins and other biomolecules onto substrates is important for capturing the spatial complexity of the extracellular environment. ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Gradient-generating Microfluidic Device for Cell Biology

En gradient som genererar mikroflödessystem enhet för cellbiologi

 The fabrication and operation of a gradient-generating microfluidic device for studying cellular behavior is described.  A microfluidic platform is an ...

Micro-scale Engineering for Cell Biology

Micro-skala Engineering för cellbiologi

Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

Bedöma Tvådimensionella Kristallisering Trials of Small Membrane proteiner för strukturbiologi studier av elektron Kristallografi

Electron crystallography has evolved as a method that can be used either alternatively or in combination with three-dimensional crystallization and X-ray ...

Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging

Fluorescerande märkning av COS-7 uttrycka SNAP-tagg fusionsproteiner för levande cell imaging

SNAP-tag and CLIP-tag protein labeling systems enable the specific, covalent attachment of molecules, including fluorescent dyes, to a protein of interest ...

Protein Membrane Overlay Assay: A Protocol to Test Interaction Between Soluble and Insoluble Proteins in vitro

Protein Membrane Overlay Assay: A Protocol to Test Interaction Between Soluble and Insoluble Proteins in vitro

Protein Membrane Overlay-analys: Ett protokoll till Test Interaktion mellan lösliga och olösliga proteiner In vitro</em

Validating interactions between different proteins is vital for investigation of their biological functions on the molecular level.  There are several ...

Pull-down of Calmodulin-binding Proteins

Pull-down för calmodulin proteiner

Calcium (Ca2+) is an ion vital in regulating cellular function through a variety of mechanisms. Much of Ca2+ signaling is mediated through the ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

Modifierad jäst-Two-Hybrid System för att identifiera proteiner Interagera med Growth Factor Progranulin

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Cell Tracking Using Photoconvertible Proteins During Zebrafish Development

Cell Spårning Med Photoconvertible proteiner under Zebrafish Utveckling

Embryogenesis is a dynamic process that is best studied by using techniques that allow the documentation of developmental changes in vivo. The use of ...

The Use of Chemostats in Microbial Systems Biology

Användning av kemostater i Microbial Systembiologi

Cells regulate their rate of growth in response to signals from the external world. As the cell grows, diverse cellular processes must be coordinated ...

Protocols for Implementing an Escherichia coli Based TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

Protocols for Implementing an Escherichia coli Based TX-TL Cell-Free Expression System for Synthetic Biology

Protokoll för Implementera en<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Baserad TX-TL Cell-Free Expression System för syntetisk biologi

Ideal cell-free expression systems can theoretically emulate an in vivo cellular environment in a controlled in vitro platform.1 This is useful for ...