Name: calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am
Uploaded: 2009-01-19T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM at JoVE.com

<p class="jove_title"> Cel Cultuur </p><p class="jove_content"> Cellen kunnen worden gekweekt met behulp van bestaande technieken, maar moet worden uitgeplaat op # 1 glas coverslips bedekt met een cellulaire lijm (zoals polylysine, polyornithine of laminine) om de cellen te voorkomen dat los of te verplaatsen tijdens de imaging experimenten. </p><p class="jove_title"> Oplossingen </p><p class="jove_content"> Calcium imaging experimenten kunnen worden uitgevoerd met behulp van een groot aantal fysiologische oplossingen, waaronder celcultuur medi...

<ol>
	<li>Grynkiewicz, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> <em style='font-style: italic'>J. Biol. Chem</em>. <b>260</b>, 3440-3450 (1985).</li><li>Lewis, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogen-induced+oscillations+of+cytosolic+Ca2++and+transmembrane+Ca2++current+in+human+leukemic+T+cells.">Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells.</a> <em style='font-style: italic'>Cell Regul</em>. <b>1</b>, 99-112 (1989).</li><li>Dolmetsch, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+between+intracellular+Ca2++stores+and+depletion-activated+Ca2++channels+generates+[Ca2+]i+oscillations+in+T+lymphocytes.">Signaling between intracellular Ca2+ stores and depletion-activated Ca2+ channels generates [Ca2+]i oscillations in T lymphocytes.</a> <em style='font-style: italic'>J Gen Physiol</em>. <b>103</b>, 365-388 (1994).</li></ol>

<p> In deze presentatie hebben we doorlopen alle stappen voor het uitvoeren van calcium beeldvorming met behulp van Fura-2 AM. We corticale neuronen gebruikt als een model, maar calcium beeldvorming kan worden gebruikt om de intracellulaire calcium te meten in real-time in een verscheidenheid van cellen. Bij het doen van deze procedure is het belangrijk dat glas dekglaasjes gebruiken in plaats van plastic, want kunststof is vaak TL op ultraviolette golflengten, waardoor beeldvorming moeilijk. Ook is het belangrijk om vooraf de vacht van de dekg...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Fura-2 AM</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F1221</td>
<td>Protect from light</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>DMSO</td>
<td>EM Science</td>
<td>MX1457-6</td>
<td>Keep in dry place to prevent hydration</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Albumin from bovine serum</td>
<td>Sigma</td>
<td>A8022-100G</td>
<td>Store at 4&#176;</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Imaging Chamber</td>
<td>Warner Instruments</td>
<td>Model RC-20H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Microscope</td>
<td>Nikon</td>
<td>Eclipse TE2000-U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Potassium chloride</td>
<td>SIGMA</td>
<td>P9333-500G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Calibration Kit</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>F6774</td>
<td>Protect from light</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am

<p class="jove_content">Calcium beeldvorming is een veelgebruikte techniek die nuttig is voor het meten van calcium signalen in gekweekte cellen. Calcium beeldvormende technieken profiteren van calcium indicator kleurstoffen, die zijn BAPTA op basis van organische moleculen die hun spectrale eigenschappen veranderen als reactie op de binding van Ca2 + ionen. Calcium indicator kleurstoffen vallen in twee categorieën, ratio-metrische kleurstoffen zoals Fura-2 en Indo-1 en single-golflengte kleurstoffen zoals Fluo-4. Ratio-metrische kleurstoffen veranderen ofwel hun excitatie of hun emissie spectra in reactie op calcium, waardoor de concentratie van intracellulair calcium te worden bepaald uit de verhouding van de fluorescentie emissie of excitatie bij verschillende golflengten. Het belangrijkste voordeel van het gebruik van ratio-metrische kleurstoffen meer dan enkele golflengte probes is dat de verhouding signaal is onafhankelijk van de kleurstof concentratie, lichtintensiteit, en optische weglengte waardoor de concentratie van intracellulair calcium onafhankelijk van deze artefacten worden bepaald. Een van de meest voorkomende calcium indicatoren is Fura-2, die een emissie piek bij 505 nm en verandert de excitatie piek van 340 nm tot 380 nm heeft in reactie op de calcium binding. Hier beschrijven we het gebruik van Fura-2 om intracellulair calcium verhoging te meten in de neuronen en andere exciteerbare cellen.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM at JoVE.com

Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM

<p class="jove_content">Calcium-signalen spelen een belangrijke rol in vele cellulaire processen zoals genexpressie, overleving en differentiatie. Hier laten we zien hoe calcium beeldvorming met behulp van Fura-2 AM uit te voeren. Calcium beeldvorming is een waardevol instrument om de regulering van intracellulair calcium in real time en de regulering van de signaaltransductie cascades studie.</p>

Calcium beeldvorming van corticale neuronen met behulp van Fura-2 AM

Calcium imaging is a common technique that is useful for measuring calcium signals in cultured cells. Calcium imaging techniques take advantage of calcium ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

Voorbereiden E18 Corticale Rat Neuronen voor Compartimentering in een microfluïdische apparaat

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

In vivo 2-Photon Imaging Calcium in Layer 2 / 3 van Muizen

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons

Live-Imaging van dicht-core Blaasjes in het jeugdwerk Gekweekte hippocampale neuronen

Observing and characterizing dynamic cellular processes can yield important information about cellular activity that cannot be gained from static images.  ...

<em>In vivo</em> Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

<em>In vivo</em> beeldvorming van Deep Corticale lagen met behulp van een microprisma

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Monitoring dynamische veranderingen in het mitochondriaal calciumgehalte Tijdens Apoptosis Met behulp van een genetisch gecodeerd Calcium Sensor

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescentie-gebaseerde waardering van Store-bediende Calcium Entry in levende cellen: van Cultured Cancer Cell op Skeletal Muscle Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading (TED)

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading TED

Direct Imaging van ER Calcium met Targeted-esterase-Induced Dye Loading (TED)

Visualization of calcium dynamics is important to understand the role of calcium in cell physiology. To examine calcium dynamics, synthetic fluorescent ...

Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

Meting van Calcium Schommelingen Binnen het sarcoplasmareticulum van gekweekte gladde spiercellen Met behulp van FRET-gebaseerde confocale Imaging

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall ...

Concurrent EEG and Functional MRI Recording and Integration Analysis for Dynamic Cortical Activity Imaging

Gelijktijdige EEG en functionele MRI opname en integratie analyse voor dynamische corticale activiteit Imaging

Electroencephalography (EEG) and functional magnetic resonance imaging (fMRI) are two of the fundamental noninvasive methods for identifying brain ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

Analyse van bèta-cel functie met behulp van de resolutie van de eencellige Calcium Imaging in Zebrafish eilandjes

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...