Name: calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am
Uploaded: 2009-01-19T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM at JoVE.com

<p class="jove_title">細胞の文化</p><p class="jove_content">細胞は、確立された技術を用いて成長させることができるが、画像の実験中に分離または移動から細胞を防止するために、細胞接着剤（ポリリジン、ポリオルニチンまたはラミニンのような）でコーティングされた第1ガラス製カバースリップ上に播種する必要があります。 </p><p class="jove_title">ソリューション</p><p class="jove_content">カルシウムイメージング実験は...

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	<li>Grynkiewicz, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> <em style='font-style: italic'>J. Biol. Chem</em>. <b>260</b>, 3440-3450 (1985).</li><li>Lewis, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogen-induced+oscillations+of+cytosolic+Ca2++and+transmembrane+Ca2++current+in+human+leukemic+T+cells.">Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells.</a> <em style='font-style: italic'>Cell Regul</em>. <b>1</b>, 99-112 (1989).</li><li>Dolmetsch, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+between+intracellular+Ca2++stores+and+depletion-activated+Ca2++channels+generates+[Ca2+]i+oscillations+in+T+lymphocytes.">Signaling between intracellular Ca2+ stores and depletion-activated Ca2+ channels generates [Ca2+]i oscillations in T lymphocytes.</a> <em style='font-style: italic'>J Gen Physiol</em>. <b>103</b>, 365-388 (1994).</li></ol>

<p>このプレゼンテーションでは、AMフラ-2を使用してカルシウムのイメージングを行うためのすべてのステップを経てきました。我々はモデルとして皮質ニューロンを用い、カルシウムイメージングは​​、細胞の様々なリアルタイムで細胞内のカルシウムを測定するために使用することができます。この手順を行う際にはプラスチックが多くの場合、イメージングが困難に紫外波長、少なくとも蛍光灯なので...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
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		<tbody>
		
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Fura-2 AM</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F1221</td>
<td>Protect from light</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>DMSO</td>
<td>EM Science</td>
<td>MX1457-6</td>
<td>Keep in dry place to prevent hydration</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Albumin from bovine serum</td>
<td>Sigma</td>
<td>A8022-100G</td>
<td>Store at 4&#176;</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Imaging Chamber</td>
<td>Warner Instruments</td>
<td>Model RC-20H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Microscope</td>
<td>Nikon</td>
<td>Eclipse TE2000-U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Potassium chloride</td>
<td>SIGMA</td>
<td>P9333-500G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Calibration Kit</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>F6774</td>
<td>Protect from light</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am

<p class="jove_content">カルシウムイメージングでは、培養細胞でのカルシウム信号を測定するための有用な一般的な手法です。カルシウムイメージング技術は、Ca2 +イオンの結合に応答してそれらのスペクトル特性を変更するBAPTA系有機分子であるカルシウム指示薬染料、を活用する。カルシウム指示薬染料は、二つのカテゴリーにレシオメトリックフラ-2のような染料とインド- 1とみたFluo - 4のような単一波長の色素を落ちる。レシオメトリック色素は、細胞内カルシウムの濃度が異なる波長で蛍光発光または励起の比から決定できるように、カルシウムに反応して励起またはそれらの発光スペクトルのいずれかを変更する。単一波長のプローブを介してレシオメトリック染料を使用する主な利点は、比の信号が色素濃度、照度、および独立してこれらのアーティファクトの決定する細胞内カルシウムの濃度を可能にする光路長に依存しないということです。最も一般的なカルシウムの指標の一つは、結合カルシウムに反応して発光505 nmにピークと380nmへの変更は340 nmからの励起ピークを有するフラ-2、です。ここでは、ニューロンや他の興奮性細胞の細胞内カルシウムの上昇を測定するためのフラ-2の使用について説明します。</p>

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Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM

<p class="jove_content">カルシウムの信号は、遺伝子発現、生存と分化を含む多くの細胞プロセスにおいて重要な役割を果たす。ここでは、フラ-2回答を使用して、カルシウムのイメージングを実行する方法を示します。カルシウムイメージングでは、リアルタイムとシグナル伝達カスケードの調節における細胞内カルシウムの調節を研究する貴重なツールです。</p>

AMフラ-2を用いて皮質ニューロンのカルシウムイメージング

Calcium imaging is a common technique that is useful for measuring calcium signals in cultured cells. Calcium imaging techniques take advantage of calcium ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

マイクロ流体デバイスでコンパートメントのためのE18脳ラットのニューロンの準備

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

レイヤーin vivoでの2光子カルシウムイメージングマウスの2 / 3

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons

初代培養海馬ニューロンにおける高密度コア小胞のライブイメージング

Observing and characterizing dynamic cellular processes can yield important information about cellular activity that cannot be gained from static images.  ...

<em>In vivo</em> Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

マイクロプリズムを使ってDeep皮質層の<em>in vivoイメージング</em>

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

遺伝的にコードされたカルシウムのセンサを用いたアポトーシス時のミトコンドリア内カルシウム濃度の動的変更の監視

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

生細胞におけるストア作動性カルシウムエントリの蛍光ベースの測定：培養癌細胞から骨格筋線維に

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading (TED)

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading TED

ターゲット-エステラーゼ誘起染料の読み込み（TED）とERカルシウムの直接イメージング

Visualization of calcium dynamics is important to understand the role of calcium in cell physiology. To examine calcium dynamics, synthetic fluorescent ...

Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

FRETベースの共焦点イメージングを使用した培養平滑筋細胞の小胞体内カルシウム変動の測定

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall ...

Concurrent EEG and Functional MRI Recording and Integration Analysis for Dynamic Cortical Activity Imaging

同時脳波と機能的 MRI 皮質活動の動的イメージングのための統合解析

Electroencephalography (EEG) and functional magnetic resonance imaging (fMRI) are two of the fundamental noninvasive methods for identifying brain ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

ゼブラフィッシュ ランゲルハンス島における単一セルの解像度カルシウム イメージングを用いた β-細胞機能の解析

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...